このプロトコルは、ゼブラフィッシュの内部状態または性格が、水流や磁場などの環境から来る手がかりに対する配向応答にどのように影響するかを調べることができる。この技術は、内部要因と環境の手がかりの両方がゼブラフィッシュの向きにどのように影響するかを観察するために使用されます。しかし、それは、実験計画の広い様々なに適用することができます。
この方法は、センサー生物学研究の行動生態学に関する洞察を提供することができる。そして、それは積極的に泳ぐ任意の水生動物に適しているので、柔軟な種です。実験を行うと、使用する動物の行動や動物のストレスを最小限に抑える方法に精通することをお勧めします。
ゼブラフィッシュの性格選択のために転送タンクにそれらを移動し、人格選択タンクの暗い側に魚を転送するためにネットで250ミリリットルビーカーを使用して個々の魚を収集します。順応の1時間後にスライドドアを開け、穴から出る個人がタンクの明るい面を10分間探索できるようにします。探査期間の終わりに、穏やかに2つの分離された容器に魚を収集し、明るい側から積極的な魚を収集し、さらに5分後に暗い箱から反応性魚を収集します。
1次元の磁場操作で磁場を設定するには、トンネルを開いたままにして、電源ユニットと磁力計をオンにします。トンネル内のガステスラメーターに接続された磁気プローブを配置し、トンネルの長軸に沿って選択した磁場値を得るために必要な電圧を確認します。次に、プローブを取り外し、フロートンネルを水泳装置に接続します。
3 次元の磁場操作で磁場を設定するには、コンピュータをオンにして、デジタルからアナログ変換器に、コイル ドライバで、選択した磁場を x、y、z 軸に設定します。その後、ヘルムホルツペアセットの中央にトンネルを配置します。その選択が設定された磁場が設定されたら、レオタクティックテストのために1〜5匹の魚を選択します。
トンネル内で魚を移動し、トンネル内の流量を毎分4.5リットルに設定し、ポンプをオンにします。水でトンネルを感じる前に出口弁を閉じ、魚を転送し、床を右に設定する前にそれを開いてください。動物が1時間水泳トンネル内に順応した後、トンネル内の魚の挙動を記録し始め、選択された実験プロトコルに従って流量を上げるステップを開始する。
コイルを取り外した同じ水泳トンネルは、ヘルムホルツペアセットの中央に配置することができる。解門実験の終わりに、アモルファスメートルチャンバーで個々の魚の写真を撮り、画像J.ノートに動物の性別を公開します。オスのゼブラフィッシュは細身で黄色がかった傾向があり、メスはより丸みを帯びており、青と白の着色を持つ傾向があります。
次に、[分析] をクリックしてスケールを設定します。カメラスケールを基準として、セグメント化された線ツールを選択して、画像のスケールをセンチメートル単位で設定するには、スナッチップからコドルペンタクルに線を引き、標準の長さを測定するか、全長の尾端に描きます。次に、[解析]をクリックして、動物の長さをセンチメートル単位で測定して記録します。
トンネル内のゼブラフィッシュのアクティビティを追跡するには、適切なビデオ分析およびモデリングソフトウェアプログラムを開きます。[ファイル]、[読み込み]、[ビデオ] をクリックし、ビデオの 1 つを開いて座標系をクリックして、長さの単位をセンチメートルに、時間単位を秒に設定します。座標軸をクリックし、トンネルに沿った x 軸で魚の位置を経て追跡する基準系を設定し、水出口の壁の低い角に原点を設定します。
一度に1匹の魚の追跡を開始するには、キャリブレーションで新しいトラックをクリックしてスケールを設定し、新しいインポイントから質量にトラックします。ビデオを半秒、5フレーム間隔で手動で進め、各上流下流ターン時および下流の各上流ターンで動物の時間と位置をマークしました。各トラッキングセッションの最後に、テーブルからXと時間の値を選択します。
データを右クリックし、データを完全にコピーをクリックします。次に、テンプレートスプレッドシートファイル上のすべての回転位置の時間値とx値を保存します。アップストリーム時間とダウンストリーム時間の合計、およびレオタクティクス指数の値と各フルステップのパーセンテージを計算します。
本代表的実験では、実例通りトンネル内で1時間順応した後、一度に1つのショーが水中のトンネル内で泳いでいる間に録画されたビデオを、7段階の流量の段階的な増加とともに加速した。これらの試験の間、磁場は一次元で制御された。追跡時間の間に、各流量の各魚の用語が強調表示され、各フルスピードで各魚のレオタクティク指数を計算するための基準点として使用されました。
レオタクティブ指数が50%を超え、上流水泳の有病率に対応する正のレオタクチック応答を有することを示す場合、50%と有意に異なっていないレオチック指数は、レオチック応答の欠如を示す。この実験における5匹の魚の平均レオタクティクス指数パーセント値のアークサイン変換は、水速が上昇するとレオタクチック指数値のシグモイド増加を示し、単純な数学的方法を用いてゼブラフィッシュレオタクシスを定量化することを可能にした。これらの曲線からは、異なる方向の磁場の下で、プロアクティブな魚のレオタクティブ応答性が影響を受けず、2つの実験群の応答が同じ曲線で表されているのが分かります。
一方、反応性魚は磁場に応じてレオタクティブの向きを変化させ、応答は著しく異なる曲線に表される。これは行動実験であり、魚の行動はストレスの影響を受ける可能性があることを覚えておいてください。魚の取り扱いと移送は難しい場合があります。
だから、実験の前に自分自身を訓練します。このレオタクティック磁気技術は、ゼブラフィッシュや他の水生脊椎動物および無脊椎動物の磁気感受性に対する人格の影響をさらに探求することを可能にしました。
