マウスの肺疾患をモデル化するために、実験剤はしばしば気管内注射を介して投与される。しかし、このアプローチは1つの肺を選択的に標的とすることはできず、分布は肺間で非対称である可能性がある。麻酔薬を用いたマウスに個々の肺をカニューララットすることにより、実験剤を一方的に投与することができる。
改変を行う場合、このアプローチは両側で使用され、両方の肺にわたる堆積の対称性を改善することができる。研磨、わずかな絞り、およびラベリングを含むカテーテル調製は成功のための重要な要素です。もちろん、このテクニックも練習する必要があります。
この手順を実証するのが、研究室の専門研究助手である澄井遼です。つま先ピンチへの応答の欠如を確認した後、麻酔を受けた8〜10週齢のC57-Black/6マウスを、上端方向にドレープ縫合線の切り傷から吊り下げる。マウスを2~3個のフックで緩く固定し、テープをループさせ、換気の制限を回避し、発光ダイオード光ファイバー照明器をオンにします。
オペレータをプラットフォームの後ろに置き、マウスに対して背面に配置します。マウスから2〜3センチメートル離れたイルミメーターのグースネックを向け、皮膚を通して喉頭領域を点灯させます。優勢な手に無菌鉗子を使用して、口腔から舌を引き出す。
非支配的な手と無菌の抑圧器を使用して舌の根を平らにして、中咽頭を広く露出させます。鉗子を解放した後、口腔を介して気管に拡張カテーテルを挿管するために支配的な手を使用する。注射器の気泡が呼吸ごとに上下に動くかどうかを観察して、配置を確認します。
遠位右肺の選択的ローバーカンヌレーションの場合、気管内挿管後、プラスチック板を30度回転させ、カテーテルのハブをマウスの正中線に平行して、表に示すように適切な重量ベースの深さに導きます。ゲルローディングチップを使用して、0.3%のエバンスブルー染料の20マイクロリットルをカテーテルに送り込み、続いてガラススポイトで1〜2個の100マイクロリットルの空気アリコートを送ります。その後、カテーテルを引き出し、動物を温かい毛布の上に置く前に30秒間マウスの位置を維持し、完全回復までモニタリングする。
遠位左肺の選択的ローバーカンニュア化の場合、気管内挿管後、プラスチック板をマイナス74度回転させ、カテーテルを左メインステム気管支にそっと進め、控えめな圧力を90度下方に置き、ブックエンドに向かって進めます。左下肺セグメントをカニューラットした後、プラスチック板をマイナス30度回転させ、ゲルローディングチップで0.3%エバンスブルー染料の40マイクロリットルを提供します。次に、ガラスドロッパーを介して100〜300マイクロリットルの空気アリコートを1〜2個送り、カテーテルを引き出してマウスが回復できるようにします。
右肺全体投与のために、口腔内挿管後、プラスチック板を30度回転させ、カテーテルをマウスの正中線に平行に導き、右側の遠位ロバール缶取に必要な深さまで到達する。タチプネアサインの外観を確認し、マウスをマイナス74度回転させて、エージェントの配達に重力支援を有効にします。右メインステム気管支の離陸に対応する位置にカテーテルを撤回し、カテーテルのベベルが下向きであることを確認します。
右肺に0.3%のエバンスブルー染料の30マイクロリットルを送り、続いて1〜2個の100〜300マイクロリットルの空気アリコートを送ります。その後、カテーテルを引き出し、マウスを回復させる。左肺全体投与の場合、口腔内カヌリン化後、プラスチック板をマイナス74度回転させ、カテーテルを左メインステム気管支にそっと進めながら、90度下方とブックエンドに向かって控えめな圧力を加えます。
タキプネア記号がないことを確認し、マウスを86度回転させて、薬剤投与による重力支援を可能にする。左メインステム気管支にカテーテルを引き出し、下向きにカテーテルのベベルを回転させます。左肺にゲルローディングチップを付けた0.3%のエバンスブルー染料の30マイクロリットルを提供し、続いて1〜2個の100〜300マイクロリットルの空気アリコートを提供します。
次に、カテーテルを引き出し、マウスが回復できるように、実証されるようにする。気管内投与と対称性気管内投与の両方によるFITC-dextranの二国間送達は、左肺に記載されているより大きな相対濃度を有する非対称肺の花座FITC蛍光をもたらす。これは、気管内投与後の実験剤の非対称性肺送達は、これらの薬剤を各主幹気管支に非対称的に提示した結果ではなく、等しい主幹送達が肺重量と質量の差によって希釈されることを示唆している。
用量調整後気管支投与は、肺の花脈薬送達の対称性を改善する。しかし、この補正にもかかわらず、右肺の異なるローブ内では持続的な不均一性が依然として観察される。気管内ブレオマイシン誘発性線維性肺損傷の21日後、炎症は主に左肺で観察され、右肺で顕著な傷害が少ない。
逆に、用量調整された気管内ブレオマイシン投与は、左肺への傷害をわずかに減少させ、右肺への傷害を増加させ、中および上のローブで最大の傷害が明らかとなる。肺の投与の間、カテーテルを引き出すことを忘れずに、カテーテルの斜めを下にする傾向がある。
