この方法は、ヒト胸膜中皮腫の開発、治療および診断に関連する重要な質問に答えるのに役立ちます。この信頼性の高い前臨床整形物モデルの主な利点は、胸膜中皮腫患者に見られる微小環境でヒト疾患の進行と病理を複製することです。したがって、この貴重なモデルは、重要度が高く、非侵襲的な分子イメージングを使用することで、3つのR概念に沿った縦方向モニタリングが可能になります。
麻酔システムと手術領域を噴霧してすべての表面に消毒剤を噴霧して、ラミナルフローフードで整える前に行ってください。マイクロ分離されたSPFケージを、感染したフローフードに入れます。加熱パッド、ポビドネヨウ素溶液30ゲージハミルトンシリンジ、ガーゼおよび綿棒手術器具とマイクロピペットと先端を層状フローフードに配置します。
マウスが適切に麻酔を受けたら、術後のパンレリーフのために1キログラムブプリノアフィンあたり0.05ミリグラムを注入する。その後、マウスを加熱パッドの上の右側に置き、ポビドンヨウ素溶液で外科領域をきれいにし、皮膚の5ミリメートルの切開を行います。周囲の脂肪と筋肉を鈍いはさみでクリアして、肋骨を露出させます。
細胞懸濁液を均質化し、50マイクロリットルをハミルトンシリンジにロードし、気泡を避けるようにします。注射の前に70%アルコールで針を拭いてください。30度の角度で針を保持し、肋間筋肉の下で2〜3ミリメートルの間に6番目と7番目の肋骨の間の胸膜腔にゆっくりと細胞を注入します。
肺に注入を避けるために肋骨のすぐ下に針を保ちます.それは筋肉を通して見えるはずです。終了したら、3〜4本の吸収性縫合糸で傷口を閉じ、目が覚めるまでマウスを温めた環境に保管します。
移植を行うときは、針の浸透の深さを制限するために針を正しく配置することが非常に重要です。加熱室加熱パッド、または赤外線ランプを使用して、fluor-18(FDG)の注射前に30°Cでマウスを30°Cで過温します(FDG)用量計算機を使用すると、150〜200マイクロリットルの生理食塩水で3〜4メガベクレル用量を調製します。標準的な取り込み値またはSUVを計算するために、放射能線量測定注射、およびPETスキャンのすべての時間を記録することを確認してください。
その後、注射後にマウスを45分間暖かい状態で目覚めた後、マウスの重さを静脈内にfluor-18(FDG)に注入する。次に、スキャナーベッドにマウスをロードし、スキャナーにベッドを転送し、肺を中心としたCTスキャンに動物を置きます。PETサブシステムにベッドを移動し、15分間の間、フルーラ-18(FDG)注入の1時間後に取得を挿入します。
その後、画像処理室からマウスを取り出し、放射性崩壊専用の領域に保管してケージ内で回復させます。画像解析の前に、原稿に記載されているようにCTスキャンとPETスキャンを再構築します。ファントムシリンダーをスキャンして画像をキャリブレーションし、内蔵のソフトウェアソリューションに従ってスキャンを自動的に共同登録します。
画像を分析するには、開いているデータアイコンをクリックして、CTデータを参照としてロードします。次に、追加データアイコンをクリックして、入力としてPETデータをロードします。CT と PET が画像を対比して目視検査できるようにカラースケールを調整します。
ドロップダウン メニューから [3D ROI] ツールを選択し、[ROI の追加] をクリックし、ファイルの肺に名前を付けます。セグメンテーション アルゴリズムと近傍しきい値をクリックし、入力を背景として定義し、イメージを ref として定義します。マウスの肺密度の値に従って最小と最大を入力します。
VTK アイコンをクリックして、3D レンダリングされた肺を検査します。次に、[テーブルアイコンを表示]をクリックし、生成されたテーブルのボリュームを取得します。腫瘍の蛍光体-18(FDG)を分析するには、ドロップダウンメニューから演算を選択してPET画像をSUVに変換します。
スカラー多重度を選択し、選択したNP 1を使用し、1ミリリットル当たりのベクレルをSUVファクターにスカラーとして設定します。最後に、ドロップダウン メニューから [3D ROI] ツールを選択し、[ROI の追加] をクリックしてファイルの腫瘍に名前を付けます。3D ペイント モードをクリックし、球体は 2D のみをオフにし、腫瘍を囲むようにシェイプのサイズを調整します。
テーブルアイコンを表示して、生成されたテーブルからSUVの最大値を取得します。CT スキャンからの 3D レンダリングは MPM 腫瘍の局在の概要を与え、肺容積の計算を可能にする。肺容積測定は、胸膜内腫瘍の注射後に時間の経過とともに有意に減少する。
PETスキャンはMPM腫瘍の代謝状態についての貴重な情報を提供する。この腫瘍は移植後2週間で区別可能であり、fluor-18(FDG)取り込みは、注射後の日数と正の相関を持つSUVを抽出することによって定量化した。さらに、肺容積とフルオロ-18(FDG)の熱心さは、MPM異所腫瘍の発生を監視するためのこれらの測定の強さを支える0.6のR二乗と相互に相関する。
この手順に従って、組織学、免疫組織化学、およびフローサイトメトリーなどの他の方法は、腫瘍の増殖状態および表現型特性および微小環境の形態的な問題に答えるために行うことができる。結論として、これらの前臨床技術は、研究者が胸膜中皮腫の新しい診断および治療戦略を探求する道を開く。さらに、分子イメージングの使用は、クリニックへの新しい知見の迅速な翻訳を保証します。
