このプロトコルは、腫瘍脱バルク手術後の残留疾患の臨床設定を模倣することを目的としており、術後創傷治癒の文脈で新しい癌療法をテストすることを可能にする。この技術の利点は、それが傷の量を与え、腫瘍の量を維持することを標準化できることです。この技術は、癌の新しい治療法を同定し、軟部組織肉腫の一例である局所的に再発するという前臨床試験にとって特に重要である。
この視覚的なデモンストレーションは、反転技術を実証するために重要であり、皮膚側に付着した腫瘍を露出させることができます。テキストプロトコルに記載されているように、マウスで調製された癌細胞の皮下接種からこの手順を開始する。12日目、接種後、腫瘍が約50平方ミリメートルの大きさに達すると、100マイクロリットルのブプレノルフィンを頸部の擦り傷の中で30分前に投与する。
ベンチコートで覆われたヒートパッドで外科領域を設置し、麻酔のための鼻コーンを設定します。クロルヘキサジン、綿棒、ガーゼ、アイジェル、2つの湾曲した鉗子、はさみ、クリップアプリケーター、クリップリムーバー、クリップリフィルなど、簡単に手の届くところにきれいな外科用機器を配置します。暖房室を摂氏37度に温め、回復のために別のヒートパッドを設置します。
この手順には 2 人のユーザーが必要であることに注意してください。アシスタントは、手順中にマウスの呼吸を注意深く監視する必要があります。テキストプロトコルに記載されているようにマウスを麻酔した後、手術を開始する前にマウスが完全に麻酔されていることを確認するためにピンチテストと角膜反射試験を行います。
目の乾燥を避けるために、少量の眼科ゲルでマウスの目を覆います。この手術を開始し、クロルヘキサジンで外科領域をスワッピングします。鉗子とハサミを使用すると、腫瘍から3ミリメートル離れた後側に沿って1センチメートルのまっすぐな切開を行います。
皮膚は、腫瘍を覆う場合は、よく治らないので直接切り取らないでください。メスを使って腫瘍を切り、ピンセットを使ってすくい。ピンセットを使用して、腫瘍と腹膜の間の筋膜および皮下脂肪組織を引き離す。
皮下腫瘍は通常皮膚側に付着する。ピンセットを使用して腫瘍軸受側の皮膚を優しく保持して傷口を開き、外に見えるように腫瘍を反転させます。ハサミを使用して、開口に最も近い腫瘍の基部から始めて、腫瘍カプセルを半分から切り取って取り除く。
50%の逆バルク手術のために、腫瘍の真ん中を横切る。湾曲した鉗子を使用して、取り除く腫瘍のセクションをすくい上げる。デバルク領域から残骸をすくい上げろ。
75%のデバルクについては、50%の腫瘍脱バルクを行い、残りの50%の腫瘍の半分に切断することによって開始する。湾曲した鉗子を使用して腫瘍の25%をすくい上げる。外科部位を閉じるには、残りの腫瘍を皮膚の下に戻し、鉗子を使用して、皮膚のフラップを一緒に引っ張り、創傷に沿って皮膚を並べます。
傷口の端から5ミリメートルの皮膚を一緒に保持し、外科用クリップを使用して、鉗子に最も近い側面から創傷を閉じます。必要な数のクリップを適用して、下層の組織が露出しないようにします。通常、3 ~4 個のクリップが、クリップ間に 2 ミリメートルの間隔で適用されます。
マウスを暖かい加熱室に入れて回復させる。マウスのケージをヒートパッドに置きます。麻酔薬から回復するまで、加熱室のマウスを監視します。
次いで、マウスをケージに戻し、マウスがより活発になるまでさらに10分間、ケージをヒートパッドに残します。マウスに濡れた柔らかい食べ物を与えます。回復のために手術の1時間後にマウスを監視します。
一日の終わりと翌朝にマウスを再び監視し、クリップが所定の位置に残っていることを確認します。マウスは、関心のある治療に応じて、いつでもアドベントまたはネオアジュバント療法で周回治療する。例えば、接種後15日目に100マイクログラムの抗CTLA-4腹腔内でマウスを治療する。
あるいは、接種後の日、15、17、および19日に200マイクログラムの抗PD-1腹腔内3回投与でマウスを治療する。50平方ミリメートルの腫瘍の不完全な外科的切除は、点線によってここに示され、アジュバント免疫療法の不在時に腫瘍の100%再現性の再成長をもたらす。したがって、50平方ミリメートルの大きさへの腫瘍の成長は、部分的な逆バルクのための理想的なサイズである。
このモデルは、チェックポイントモジュール、細胞傷害性Tリンパ球関連タンパク質4およびプログラム死受容体1に対する抗体を使用してアジュバント免疫療法をテストするために使用された。抗CTLA-4を有するマウスの治療は、80%の治癒率をもたらしたが、抗PD−1を有するマウスの治療は25%の治癒率をもたらした反PD−1の応答は、新しい組み合わせを試験する機会を提供し、応答率をさらに改善する。残りの腫瘍が皮膚に付着したままであることが重要であり、そうでなければ血液供給が遮断され、腫瘍は壊死する。
この手順に従って、腫瘍は、手術が腫瘍浸潤細胞にどのように影響するかを評価するために、フローサイトメトリーなどの様々な方法によって分析することができる。このマウスモデルは、創傷治癒ががん免疫療法にどのような影響を与えるかを調べるためのものです。
