転移率を制御する切断を用いた同種異形性骨肉腫スプレイグ・ドーリーラットモデル

脛骨微小環境内に骨肉腫細胞を移植すると、肺転移が促進される。このモデルは、無傷の免疫系を必要とする肺転移または新規癌療法のメカニズムを研究するのにも有用である。腫瘍が確立されると、切断は、長期生存試験における転移の速度を制御するために必要である。

静脈内薬物送達の可視化を可能にするため、司法注射を使用します。頸静脈注射は、正確な薬物送達が必要な他の多くの疾患モデルに有用である。この方法を用いて、生体内イメージング用にナノ粒子および放射状のリガンを送達しています。

私たちは、失血なしで四肢切断の仕組みを習得する実験を試みる前に、5〜10匹の安楽死ラットから四肢を取り除く練習を新しいユーザーに勧めます。陰茎反射への応答の欠如を確認した後、麻酔ラットを、スペイン位置の低熱設定ヒートパッド上の無分法で固定します。右足の毛を、腹側と下腹部まで取り除きます。

70%エタノールと適切な希釈消毒剤で手術領域を消毒し、動物の目に軟膏を適用するためにガーゼまたはスプレーを使用してください。ドリル状の動きを使って開口部を作り、先端から10ミリメートルと記された22ゲージの針を脛骨高原の真ん中の脛骨の糖尿病に挿入し、血腫を通して針をジアフィシスに伸ばします。針を取り外した後、目的の腫瘍細胞懸濁液を穏やかに混合して均質な細胞懸濁液を得、7.5 x 10を20マイクロリットルのPBSの4番目の細胞にハミルトンシリンジに負荷させる。

針先から10ミリメートルの細胞でハミルトン注射器をマークし、22ゲージ針で作られた穴に針を10ミリメートルのマークに挿入します。その後、細胞の全容を穏やかに骨髄腔に排出し、完全な再発まで監視して加熱パッドのケージにラットを入れます。静脈内ドキソルビシン投与の場合、麻酔確認後、慎重に解剖を行い、右または左の頸静脈を可視化し、上にある筋肉組織に針を挿入する。

頸静脈の前部に表に示すように、針を頸静脈内腔に向け、小量の血液を針先に引き込んで正確な挿入を確認します。針が所定の位置にある場合, ゆっくりと 100 から 150 1 キログラムドキソルビシンの 2 ミリリットルのマイクロリットルを 1 分間に注入.溶液は、配信中に静脈内に表示される必要があります。

すべての溶液が送達されたら、滅菌ガーゼを使用して静脈に穏やかな圧力をかけ、3〜4個の巻きクリップを使用して切開を閉じます。沈着を確認した後、右脚の毛を、腹側と下腹部まで取り除き、ラットを加熱パッドの上のスパイン位置に置きます。示されているように、ふくらはぎの真ん中から右下腹部の股関節のすぐ上まで皮膚をこすり、動物の目に軟膏を塗ります。

無菌手袋と器具を使用して、生殖不能手術ドレープの通気孔を通して脚を引っ張り、周切開皮膚切開を息苦しいところに近いだけで行います。後肢をデグローブして後肢の腹側内側の表面に大腿動脈と静脈を露出させ、4-0吸収性縫合糸を使用して、大腿骨中のレベルで血管を訴訟し、遠方に経線を行う。筋肉解離中の漏れを減らすために静脈を遠位にクランプし、鈍い解剖を使用して股関節を外側の外側の回転で外向きに誘拐する。

大腿骨の頭部を探して、その骨の毛を切り離し、残りの組織を取り除き、脚を身体に付け続ける。ロピバカインのキログラムあたり約6ミリグラムでアセタブラムと坐骨神経にスプラッシュブロックを投与し、単純な中断された4-0吸収性縫合糸を使用して、アセタブラムの上の筋肉を閉じます。その後、5〜10ミリメートルに置かれた傷クリップを使用して、皮膚の縁を閉じます。

腫瘍監視のためのX線画像は骨腫瘍の浸潤の確認を可能にし、最近切断されたまたはホルマリン固定肢で行うことができる。X線イメージングは、転移の有無にかかわらず肺の放射線形態の評価を可能にし、不必要な自発的死を防ぐために安楽死の必要性を決定するための迅速かつ容易な方法を提供する。ラット骨肉腫において、骨形成と骨芽細胞性腫瘍形態の両方が切断された四肢の組織病理学によって確認することができる。

皮質の骨はこの例では存在せず、隣接する骨は、皮質の既存のシャフトに垂直に向けられた新しい織られた骨に置き換えられたか、または強化されたことに注意してください。未熟な骨の島も腫瘍内で同定することができる。これらの画像では、代表的な肺転移の顕微鏡形態により、一部のミネラル化された骨および腫瘍血管塞栓を有する形態が観察される。

原発性骨肉腫腫瘍の免疫染色は、CD68陽性マクロファージまたはCD3陽性T細胞などの免疫細胞集団による腫瘍の浸潤を明らかにすることができる。腫瘍細胞タンパク質ライゼのウェスタンブロッティングは、タンパク質キナーゼ、プロテインキナーゼ受容体、およびこれらの経路と相互作用する他のタンパク質の発現を決定するために使用することができる。脛骨移植のために、最初の脛骨の穴が作られたら、ハミルトン針の挿入を容易にするために皮膚と骨穴を並べたままにするために、あなたの非支配的な手の脚を同じ角度で保持し続けます。

頸部注射の場合は、針を筋肉に挿入しますが、静脈を失わないように針をあまり角度にしないでください。切断のために、最初に安楽死させたラットの論争を練習する。