このビデオの全体的な目標は、くも膜下出血のモデルとして、水槽に血液を二重直接注入するプロトコルを説明することです。くも膜下出血の生理は、しばしば動脈瘤の破裂によるものです。そして、まず、脳と脳を覆う組織との間のコンパートメントへの血液の飛び込み。
このコンパートメントはくも膜下空間です。くも膜下出血は、すべてのストライキ症例の最大7%を占める。死亡率は、人口ベースの研究で30〜50%の間で変化し、くも膜下出血生存者は、一般的に記憶障害、無力症、または気分障害として認知後遺症を経験する。
悪い結果の高い有病率の主な原因は、脳虚血とは何かである。研究は、大脳動脈の血管収縮における虚血の発生との間にリンクを作った, 最初の膨満感イベントの後の4番目と15日目の間に大多数の患者で検出することができる顕微鏡血管れん縮と命名.現在の治療オプションの非効率性のために、病理学的事象のより良い理解のための明らかな医学的必要性がある。
それに伴うくも膜下出血と新しい治療目標をテストする必要がありますが、これには様々で標準化された動物モデルが必要です。頭蓋内動脈瘤の破裂は、主にヒトのくも膜下出血の原因であり、前臨床およびヒトモデルを作ることは困難である可能性が高い。動物では、主な困難は出血および血の分布の制御発生率に存在するが、最近の研究はくも膜下出血のモデルのより多くの退容モデルの開発に焦点を当てている。
ここでは、シツナマグナに私たちの2日間の自家動脈血の2つの連続した注射の標準化されたマウスモデルを表しています。このモデルの主な利点は、再現的に非侵襲的な外科的処置を習得し、注入された血液の質と量を適応させ、頭蓋内圧を大幅に増加させることなく出血事象を補強することです。手術の開始前に、マイクロピペットプーラーを使用して、ガラス毛細血管の別の偉大な数を置く必要があります。
注入ピペットは、0.86ミリメートルの内径と0.5ミリメートルの外径を示す必要があります。書かれた議定書に示されるように、偽の状態のために人工脳脊髄液を準備します。この酸素化された人工脳脊髄液は、0.22ミクロンのフィルター装置で実現する必要があります。
くも膜下出血モデルの最初のステップは、気管に沿った頸動脈の分離と頸動脈穿刺からの血液の最大の収集で構成されています。イソフルランによる麻酔後、1つまたは2つの後肢をクランプして、実験手順の設定を可能にすることによって反射神経の欠如を確認する。26ゲージ針を使用して、エプリンで1ミリメートルの注射器をコード化します。
これは、次のステップ中に血液凝固を防ぐことができます.電子バランスを使用して各マウスの重量を正確に測定します。現在の研究では、マウスは手術直前に20〜25グラムの範囲内の体重を有するであろう。
先に説明したように、操作されたマウスの麻酔を誘発し、その後、適切な電気クリッパーによって各耳の間の首と空間を剃る。マウスが眠っていて、マウスの頭がよくブロックされていることを確認してください。目覚め後の痛みを避けるために、下背部に26ゲージ針を持つ1キロ当たり0.1ミリグラムでブプレノルフィンの皮下100マイクロリットルを注入する。
保護液体ゲルを使用してドライアイを防止し、自動調整電動ブランケットを使用して37度の内帰温度を維持します。かき領域を防腐液で処理する前に、組織に触れるすべての器具が滅菌され、無菌で取り扱われました。初日は、後輪の長さ1センチの切開を切り、続いて中線に沿って筋肉を分離して、システルナマグナにアクセスします。
薄いはさみで空のガラスピペットの先端を切ります。次に、柔軟なシリコンコネクタに接続されたシリンジに適応します。その後、精密マイクロピペットを使用して0.5ミリリットルチューブ内の血液または人工脳脊髄液の60マイクロリットルをガラスピペットに吸い込み、くも膜下出血状態のための血液60マイクロリットルまたは偽の状態のための人工脳脊髄液の60マイクロリットルを移す。
注入の場合は、例えば、私たちのリングまたはaを使用して立体性フレームにピペットを挿入し、ゆっくりと水槽マグナとの界面で膜にピペット先端に近づく。定位フレームのマイクロマニピュレーターを使用して、アトラント後頭部膜を通してピペットチップをシスタンナマグナにゆっくりと挿入します。ピペットを以前充填されたシリンジに接続し、圧力誘導の準備をします。
急性頭蓋内圧を避けるために、1分間に約10マイクロリットルの低速度で圧力で注入する。注射中は、呼吸数と直腸温度を注意深く監視します。注射の終了時に、マイクロマニピュレーターを使用してピペットを慎重に取り外し、引き出し時に漏れが生じなくて視覚的に注意してください。
恒常性を達成し、編組非吸収性縫合糸で2つの縫合糸を行います。手術直後、マウスを減少デキュビタスに分離して位置づけ、回復の間、開いた箱に生存毛布で覆う。24時間後、再び麻酔を誘発し、前日のように立体フレームにマウスを取り付け、マイクロハサミで縫合糸を注意して取り外します。
綿棒で剃った領域と無菌溶液に塗布することにより、アトラント後頭膜の無菌の前のように準備します。前日のように、30マイクロリットルの血液または人工脳脊髄液を低い速度で注入する。既に述べたように、呼吸数と直腸温度を監視します。
注射の終了時に、慎重にピペットを取り外し、離脱時の血液漏出の欠如を制御する。ホメオスタシスを達成し、編組吸収性縫合糸で2つの縫合糸を行います。1日目のポスト手術から犠牲の日まで、体重は一般的な幸福のための敏感な指標として毎日評価されるべきです。
それは、恥ずかしがった動物と比較して、くも膜下出血における有意な減少した体重増加を示し、長期にわたる活動回復プロセスおよび長期の病理学的事象、くも膜下出血後を示唆した。なぜ死亡率は恥ずかしい状態ではないのですか?死亡率はくも膜下出血状態で7日目に30%近く、ほとんどの動物は手術後1日または4日目に死亡する。
人道的エンドポイントの中で、最初の体重の15%より優れた有意な体重減少が注目される。「腰を下ろした」姿勢、遅い動き、創傷、異常な発声または重大な攻撃性も、動物が苦しんでいる兆候です。これらの徴候または徴候の組み合わせのいずれかが現れた場合、動物の追跡はその出現に続く数時間以内に補強される。
動物の状態が48時間以内に続くまたは改善しない時間に悪化した場合、耐え難い苦しみのレベルに達し、殺害が行われると考えられます。手術の1日目のこの例では、血液凝血を被験者のくも膜下出血のウィリスポリゴンの大動脈に沿って、サンプル脳から観察することができる。術後および犠牲の前の5日目に、血管間インキ注入は大小脳動脈の血管収縮に対応する巨視的な血管れん縮の検出を可能にし、ヘマトキシリンおよびエオシンによる脳スライスの着色は脳血管痙攣の測定を可能にする。
ここでは、この写真顕微鏡写真に示すように、バジル動脈の血管れん縮として観察することができる。システルナマグナへの血液の直接注入のこのモデルでは、最近、マウスの感覚、運動、および認知機能の変化を伴う大脳動脈、脳血管線維沈着、および細胞アポトーシスの脳血管れん縮を実証しました。したがって、このモデルは、短期的かつ長期的なイベント、クモ膜下出血後のために検証され、特徴付けられる。
新しい標的の将来の同定や、くも膜下出血に関連する合併症に対する効率的な治療戦略に関する研究に理想的に適しているべきである。
