術後MRIと組み合わせた血管内穿孔モデルは、出血の検証および他の頭蓋間病変の排除を可能にする。このアプローチの利点の1つは、さらなるサブグループ分析のために出血量を定量化するオプションである。マウスの首の毛を剃ることから始めます。
処置中に眼科軟膏を塗布する。70%エタノールで皮膚を消毒し、続いてベタジンまたはクロルヘキシジンを塗布し、1%リドカインを塗布する。マウスを仰臥位に置き、頭と胴体を上向きにします。
4つの四肢にテープを使用してマウスの背側を安定させます。首の皮膚を伸ばして持ち上げます。顎から乳房骨の上端まで首の皮膚を広げ、隣接する結合組織から唾液腺を分離する。
気管の片側に沿って筋肉を分離することによって総頸動脈鞘を露出させる。リトラクターまたは滅菌ガーゼ綿棒で手術野を露出させ、頸動脈を剥離し、無料の8-0を残すそれを結紮せずに絹縫合し、迷走神経を傷つけないようにする。ECAの遠位端を解剖し、遠位位置で血管を2回結紮する。
2回ライゲーションされたフィラメントセグメントの中間点でECAを切断し、容器切り株を作成する。ICAを閉じずにICAの周りに絹の縫合糸を残します。ECA切り株の周囲にフィラメント用の1つのライゲーションを予め配置する。
フィラメントの挿入が成功するまで閉じないでください。縫合糸またはマイクロクリップを使用してICAとCCAを一時的に閉じます。微小血管はさみを使用して、ECAに切開を行い、代わりに5-0の代わりに4-Oプロレンフィラメントを挿入し、CCAに進める。
ICAとCCAのマイクロクリップを取り外しながら、ECAの合字を閉じます。フィラメントを静かに引き戻し、ECAの切り株を頭蓋方向に調整しながら、分岐部を通ってICAにフィラメントを侵入させます。フィラメント先端を水平面の気管正中線に対して約30度の角度で内側に置き、ICAの内部に押し込む。
ACA-MCA分岐部では、抵抗が観察される。フィラメントを最大 3 mm 前方に動かし、右の ACA に穴を開けます。フィラメントをECA切り株に素早く引き抜き、くも膜下腔に血流を流す。
フィラメントをこの位置に10秒間置きます。フィラメントを抜きます。CCAは、過度の失血を避けるために事前に一時的に閉じてからフィラメントを撤回することができます。
あらかじめ配置された縫合糸を使用してECAを取り付け、以前に閉じたことがある場合はCCAを再度開きます。筋肉の振戦、同側筋症、息の喘ぎ声、心臓のリズムの変化、尿失禁の存在は、手術の成功の証拠を裏付けることができます。出血漏れがないことを確認し、皮膚を消毒してください。
傷口を縫合する。マウスをサーマルボックスに入れ、動物が胸骨臥位を持つのに十分な意識を持つまで待ちます。痛みを和らげるために、パラセタモール1ミリリットルあたり1.2ミリグラムを投与する。
マウス頭部共振器上のげっ歯類スキャナーを用いて、手術の24時間後にMRIを行い、摂氏37度で加熱された循環水毛布上にマウスを置く。まず、クイックリファレンススキャンを実行して、3つの直交スライスパッケージを取得します。次に、高解像度のT2加重2Dターボスピンエコーシーケンスをイメージングに使用します。
データをDICOM画像形式に転送し、Imagejソフトウェアを使用してSAHグレーディングと血栓の体積測定を行います。正しい出血部位を確保し、他の頭蓋内病変を排除するために、MRIスキャンを術後24時間実施した。SAH出血グレードを、T2加重MRIスキャンに基づいて定量化した。
検査を受けたマウスのうち、14%の動物は、SAHまたは出血の放射線学的証拠なしに出血グレードゼロに分類された。動物の大部分は1〜3の間の出血グレードを示し、10%は脳卒中および/またはICHに沿ってSAHと定義されたグレード4の出血を示した。SAHの厚さに基づいて、各SAHグレードの総出血量を定量化し、出血領域を決定するのに役立つ。
軸方向SAH厚さに基づいて計算されたブリード体積は、グレード1〜3の対応するサブグループにおいて有意差を示した。手術全体を通して、周囲の接続組織の徹底的な解剖は、縫合糸の正しい位置決めに不可欠です。ECA切り株の長さが十分であることを確認し、フィラメントのライゲーション、切開、挿入のための快適な作業スペースを確保してください。
MCA-ACA分岐の前に抵抗を感じたときは、容器の早期穿孔を防ぐためにフィラメントを前方に押し出さないでください。
