私の名前はトーマス・プレヴォット博士です。私は中毒とメンタルヘルスセンター(CAMH)の科学者であり、精神医学科のトロント大学の助教授です。私のグループは、データの変動性を減らし、動物の福祉を改善するために、マウスのベースライン不安と反応性を減らすことに特に関心を持っています。
マウスは基礎科学と前臨床研究において非常に貴重な資産であることが証明されていますが、ベースラインの不安と実験動物の反応性を制御するラボは世界中で非常に少なく、ラボ間のデータの複製性が複雑になります。ベースラインの不安の主な要因は、住宅条件、環境濃縮、ストレスへの暴露などの制御されていない環境変数です。住宅条件と濃縮の標準化がこの問題を改善するのに役立ちましたが、実験者との相互作用中のストレスへの暴露は、マウスではまだほとんど対処されていない。
尾のハンドリングは、尾でマウスを持ち上げるプロセスであり、マウスは特にストレスが多いにもかかわらず、マウスハンドリング技術を広く使用している。尾の扱いに代わるものは、トンネル処理やカップハンドリングを含めて出現しています。これらの技術の採用は遅れています。
ここでは、わずか3日間の習慣、または3Dハンドリングで実装できるカップハンドリングに似た新しい技術について説明します。特定の処理マイルストーンに対するマウスの反応性に応じて、相互作用の程度と複雑さを徐々に増やすことで、ストレスを軽減し、日常的な処理を容易にすることができます。行動検査におけるマウスの3D処理の有効性を評価し、不安様行動を評価し、実験者や末梢ストレスホルモン、コルチコステロン、レベルとの相互作用を評価し、トンネル処理および尾処理技術との比較を提供する。
ケージをそっと開け、蓋を側面に置きます。マウスを拾おうとする前に、手袋をした手をホームケージに入れてください。マウスが約30秒間手の存在に慣れる。
その後、カップの手でマウスを拾おうとします。マウスを簡単に拾えない場合は、両手をカップに入れ、それらを使ってマウスをケージの隅に案内します。その後、両手を使用してマウスを拾います。
マウスをケージから取り外したら、両手を平らにして、できるだけ開いてください。マウスを自由に探索できます。これにより、マウスが踏み込むフラットなプラットフォームが提供され、噛み付きのリスクが制限されます。
手を開けて平らに持ち、手のひらを上にして押さえます。もう一方の手をマウスに隣接させ、マウスを自由に手から手に動かします。平らな手でハンドリングを1分間行った後、手のひらをリラックスさせ、マウスを頭の中で少しカップしてから、手の間でマウスをそっと転がします。
手の間の穏やかなローリングとあなたの開いた手の自由な探検の間で交互に、4分間続けます。最後の2分間、避難所のテストを行います。マウスを手の端に移動させ、両手を合わせます。
非常にゆっくりと、マウスが手で形成された避難所の中に収まるように手をカップ。マウスが必要に応じてエスケープできるように、開口部を残してください。拘束することなく、5〜10秒間避難所にマウスを保管してみてください。
最後の2分間に3〜4回避難所のテストを繰り返します。プロセスを急いではいないでください。マウスが手の中に閉じ込められていることにストレスを感じている場合は、手の間を転がして30秒間無料で探索を続け、避難所のテストを再試行してください。
30秒間手で自由な探検を許可し、ケージ内のマウスをそっと交換します。70%エタノールまたは適切な洗浄液を使用して、あらゆる便と尿のベンチトップを洗浄してください。必要に応じて、便と尿の手袋をきれいにし、新しいケージに変更する場合は、70%エタノールで手袋をすすいで手袋をすすいで手袋を交換してください。
2日目までに、カップの手でケージからマウスを取り除くのはすでに可能であるはずです。マウスが反応性を持つようであれば、平らな手とオープンヘッドの自由な探査を30秒から1分間実行します。それ以外の場合は、手と避難所のテストの間のロールに進みます。
1日目から2~3分の間で、手と避難所の間で役割を果たします。各ステップを数回実行します。避難所のテストでマウスが安心しているように見える場合は、背中と頭にマウスをペットにしようとします。
マウスが接触を逃げようとしない場合は、鼻突きに進みます。スナッズの先端でマウスを軽く触ります。噛んだり頭を回そうとしない場合、これは習慣の良い兆候です。
ふれあいと鼻の突きテストのために、プロセスを急いではいないでください。マウスが手の中に閉じ込められていることによって強調されているように見える場合、または触られたくない場合は、数分間手の間を転がしてから再試行してください。約3分間の取り扱いの後、動物が避難所によく反応する場合は、頭ふれあいと鼻の突き刺しでこのセッションを停止します。
そして、動物が脱出の試み、手からのジャンプ、または手との接触を避けるなど、ストレスの兆候なしにあなたの手を探検する意思があるように見える場合。マウスがストレスの兆候を示し続けるか、避難所のテストや鼻の突き刺しテストにうまく反応していない場合は、初日のように5分に達するまでセッションを続けます。ケージの中でマウスを交換し、ベンチトップと手袋を清掃します。
3 日目に、2 日目の同じ手順を進めます。手のひらでマウスを拾います。マウスを手の間に移します。
カップの手にそっとマウスを閉じ込めます。マウスがこれらの手順にうまく反応する場合は、マウスをかわいがって鼻の突きのテストを試してみてください。3日目には、マウスは離れて移動せずに手のひらに座るのに十分リラックスしている必要があり、約2〜3分にわたってこれらのステップを進むことができるはずです。
ケージの中のマウスを交換し、ベンチトップと手袋を清掃します。3日目。もし動物が実験目的で拘束される場合、口腔内のガバジや腹腔内注射など、マウスは首のピンチ試験を受けることができる。
首のうなじでマウスをつかみ、親指と人差し指の間でマウスを手の上に5センチ持ち上げます。これは通常、成体マウスにとって不快な位置であり、マウスが不動の近くに残っている場合、彼らは取り扱いに慣れ、注射のために拘束することが容易になります。マウスを平らな手に戻し、1分間自由に探索できるようにします。
動物は、実験者と自発的に相互作用する意欲と実験コンテキストでの取り扱いの容易さについてテストされました。研究1では、実験者がマウスを拾おうとすると、チューブハンドリングまたは3Dハンドリングによって処理されたマウスが逃げる可能性が低かった。さらに、3D技術を使用して処理された1匹のマウスを研究し、実験者の手と同じ象限でより多くの時間を費やし、実験者と対話する意欲が高まったを示しています。
研究2では、チューブハンドリングまたは3Dハンドリングのいずれかで処理されたマウスは、実験者が尾がマウスを扱うのと比較してマウスを拾おうとしたときに逃げる可能性が低かった。しかし、2つの研究では、ハンドリング技術は実験者の手と同じ象限で費やされた時間に大きな影響を与えませんでした。3Dとトンネル処理の効果は、不安のような行動の2つのテストで尾の取り扱いに比較されました, 新しさ抑制された給餌テストと上昇プラス迷路.
研究1では、新規性抑制された摂食試験において、トンネル処理および3D処理マウスにおける不安を軽減する傾向があった。上昇プラス迷路では、取り扱いの全体的な効果はありませんでした。Zスコアとして要約すると、尾処理マウスと比較して、トンネル処理マウスおよび3D処理マウスにおける全体的な不安が有意に減少した。
2の研究では、新規性抑制された摂食試験または上昇プラス迷路における不安対策に対する取り扱いの全体的な効果はなかった。Zスコアとして要約すると、ハンドリング技術は不安に対する全体的な影響を及ぼさなかった。ストレスの生理学的尺度として、我々は、簡単な取り扱いセッションの15分後に取り扱い、3D処理し、トンネルマウスから血清を採取し、コルチコステロンレベルをテストした。
研究1では取り扱いの全体的な効果はなかった。研究2では、3Dハンドリングは、尾の取り扱いに比べてコルチコステロンレベルを有意に低下させた。マウスの取り扱い技術が科学界で広く認められていないという観察に基づいて、我々は新しいハンドリング技術の使用を説明した。
両方の研究では、トンネルと3D処理は、ピックアップされたときに逃げるマウスの試みを減らし、日常的な取り扱いを促進する可能性があります。さらに、高齢の雄マウスでは、この技術は不安のような行動を減少させ、実験者との相互作用を増加させた。若い女性で。
この技術は、取り扱いに応答して観察されるコルチコステロンレベルを減少させる。この技術を実装すると、データの変動性を減らし、動物の福祉を改善し、日常的な取り扱いを容易にする可能性があります。
