本研究では、眼鏡拡大鏡を用いた真空抽出管システムを用いて、マウスの尾静脈からの血液採取を報告する。我々の方法は、練習が容易であり、マウスでの血液サンプリングを繰り返すために使用することができます。マウスは最初はプラスチックの拘束ホルダーに置かれる。
尾部は70%エタノールで洗浄され、拭きます。その後、オペレータは、マウス尾の視視を向上させるために眼鏡の拡大鏡を着用します。その後、蝶の針の先端が拡張横尾静脈の1つに挿入され、血液は蝶の針のゴム端を通って真空採取管に集められる。
最後に針が取り除かれ、採血プロセスが終了します。尾静脈は血液採取の好ましい場所である。この血液採取法は、マウスへの傷害を最小限に抑えるが、マウスの尾静脈は非常に薄いので穿刺が困難な場合もあるが、ここでは真空抽出管システムを用いた実験用マウスにおける単純な尾静脈血液サンプリング法について説明する。
この方法は、簡単かつ効率的であり、マウスで繰り返し必要な血液を得るために使用することができます。この手順は、私たちの研究室の2人のメンバー、Xiaoyan LiuとWusong Zou開始し、プラスチック拘束ホルダー、ゴムストッパー付きの真空管、二重尖った針、および無菌表面に眼鏡拡大鏡を配置します。次に、プラスチックの拘束ホルダーにマウスを入れします。
マウスの前足と後足は快適な位置にあるはずです。血液サンプルを得るためには、20〜30°Cの温水で尾を洗い、70%エタノール飽和綿球で尾を拭いて静脈を膨張させます。血液サンプリング用の右または左尾静脈を選択します。
尾の下部を軽く握り、血液サンプル採取中に尾をまっすぐに保ちます。眼鏡の拡大鏡を着用して、尾静脈の穿刺を容易にするために視聴を改善します。22ゲージの蝶針の先端を、尾の先端から約10度の角度で半分遠位の両側尾静脈の1つに挿入し、複数のサンプルの場合は尾のベースに向かって移動します。
バタフライ針のゴムの端を真空採血管に挿入して、真空採取管に血液を採取します。マウスの尾は、承認されたプロトコルに従って、必要に応じて必要な頻度で、いくつかの採血に使用することができます。従来の方法でマウスの細いおよび低血流の尾静脈から十分な血液量を得ることは必ずしも容易ではありません。
我々の方法は、簡単かつ効率的であり、マウスで繰り返し十分な血液量を得るために使用することができます。総血液量の最大10%は、2週間間隔で健康な動物から安全に除去できることが報告されていますので、倫理元素に従って毎回約175マイクロリットルの血液サンプルを採取しました。2つは、血液サンプリングの過程でその動きを避けるために尾を拡張することが重要です。
針の血液凝固を避けるために、血液が15秒以上流れ出なくなったら、別の穿刺位置を選択する必要があります。採血の成功は、毎回175マイクロリットルの血液を得るとして定義された。最大穿刺時間は3回の試行に設定された。
3回目の穿刺後に175マイクロリットルの総血液量が低い場合は、採血不全と定義した。十分なサンプル量が採取されたら、静脈から針を引き出し、短時間、挿入部位に圧力をかけて出血を止める。血漿を収集するには、抗凝固剤であるEDTAを含むチューブを使用して、チューブを数回軽く反転させ、抗凝固剤と血液を混合し、サンプルを氷の上に垂直に置きます。
冷蔵遠心分離機中の全血サンプル採取管を10分間回転させる。血漿を抽出し、赤と白の血球層を乱さないで注意してください。セリンを収集するには、抗凝固剤なしでチューブを使用してください。
どちらのタイプのサンプルも、すぐに使用するか、摂氏80度以下で最大1年間保存できます。本研究は、マウスの尾静脈から、真空採血システムと眼鏡拡大鏡を介して繰り返し採血する優位性を調べる。従来の血液サンプリング法と比較して実験群を用いた。
従来のグループは、初心者および専門家によってそれぞれ、採取された血液量およびサンプリング期間は専門家のために2つのグループ間で類似していたが、しかし、採取された血液量の増加およびサンプリング期間の短縮は、従来の群と比較して実験群で見られた。実験群では、従来の初心者グループに比べて成功率が高いことが分かった。この血液のサンプリング方法は、マスターするのは簡単で、高い成功率を有する。
失敗した穿刺の数は、従来の方法を使用するのと比較して減らすことができます。さらに、この手順はマウスへの傷害を最小限に抑えるだけで、麻酔薬を必要とせずにマウスのテールテープだけで、血液サンプルに対する麻酔薬におけるストレス応答の影響を回避することができる。
