このプロトコルにより、初心者ユーザーは高品質の腎、心臓、肝臓のデータを取得できます。統合されたロボット超音波スキャンは、動物や音響プローブの位置を変更する必要がないため、重要です。この技術の主な利点は、機器の速度と使いやすさの両方です。
1時間で20〜30匹のマウスから高品質の画像を簡単に取得できます。初心者のユーザーは、動物を正しく配置するのに苦労すると予想されます。私たちのアドバイスは、腎臓全体が画像化されていることを確認するために大きなROIボックスを使用することです。
まず、電気カミソリを使用して、超音波または米国測定用の所望の皮膚領域を剃毛します。脱毛クリームを綿の先端のアプリケーターで動物の剃った皮膚に塗布する。乾いたペーパータオルで30~60秒後にクリームを拭き取ってください。
水で湿らせたガーゼパッドを使用して脱毛クリームの残留物を拭き取り続け、スキャンを開始する前に脱毛が完了していることを確認します。米国のマシンと米国のプラットフォーム上の温度制御をオンにします。対応する米国のベイの適切な麻酔バルブをオンにします。
心臓測定のために、動物を臆病な位置に置き、それを約30度右に傾けます。腎臓の測定のために、動物をまっすぐで仰臥位に置きます。動物の体を静かに平らにして、動物と膜の間のエアポケットを最小限に抑えます。
イメージングUSソフトウェアで、US集録を選択し、計測器を初期化します。Bモードを使用した腎臓イメージングを開始するには、適切なダイアログボックスに研究の名前を入力します。次に、適切なダイアログボックスに動物IDを入力します。
3Dというラベルの付いたタブをクリックして、3Dスキャンを初期化します。ライブカメラフィードを使用して、腎臓を含む関心領域またはROIボックスを移動します。希望する画像のタイプに応じて、リニアアレイまたはウォブラーを選択して探触子を選択します。
高速スキャンまたはいずれかの探触子用に最適化から選択します。ライブビューをクリックすると、目的の表示エリアのライブ画像が表示されます。探触子を動かすには、円形の[移動先]ボタンをクリックし、画像化するマウスの領域をクリックします。
所定のステップサイズの方向矢印を使用して、探触子の位置を微調整します。コントロールパネルウィンドウの横にある矢印をクリックして[設定]トレイを開き、[スキャンプロトコル]をクリックしてスキャン設定を開きます。理想的な焦点深度を決定し、タイムゲイン補正(TGC)のスライダを調整して、腎臓を最もよく見るように画像コントラストを変更します。
目的の設定が完了したら、矢印をもう一度クリックして[設定]トレイを閉じます。スタティック取得ボタンを押して、3Dスキャンを開始します。スキャンが完了したら、青いダウンロード矢印をクリックしてプレビューモードでスキャンを開き、画質を確認します。
スキャンの 3D フレーム間を移動するには、ウィンドウの上部にある赤い矢印をドラッグします。ズームインまたはズームアウトするには、Control キーを押しながらマウスのスクロール ボタンを使用します。[Mモード]タブをクリックして、心臓イメージングを有効にします。
ハートファインダーボタンを押して心臓を見つけます。ヒートマップを使用して、探触子の位置を最適化します。円形の「移動先」ボタンを使用して、探触子を左心室に移動します。
ライブビューに移動し、矢印ボタンを使用して乳頭筋の間にトランスデューサを配置し、トランスデューサの適切な配置をライブビューで確認できます。探触子が適切な位置になったら、シーケンスの集録をクリックします。スキャンが完了したら、動物を乾かして自宅のケージに戻します。
さまざまな平面を表す色付きの線を移動して、すべての平面で腎臓を見つけます。[追加] をクリックして、新しいセグメンテーションを追加します。ファイルのマークアップ名を指定します。
[サーフェスカット]ボタンを使用して、複数の平面で腎臓の外縁の周りにポイントを追加します。[適用]をクリックして、腎臓全体にセグメンテーションを生成します。各平面の異なるフレームをスクロールし、[編集]をクリックしてポイントを正しい場所にドラッグして、不正確な領域を編集します。
ポイント配置ツールを使用して、心臓組織の各層の収縮期と拡張期をトレースします。心臓組織の他の層で続行します。Edit 関数を使用して、トレースを変更します。
[適用] を選択して、心臓パラメーターを計算します。[定量化] タブを表示し、[統計のエクスポート] を選択して、すべてのデータを csv ファイルとしてエクスポートします。腎臓のセグメンテーションから取得した表面積と体積のデータ、および異常を測定するために使用されるノギスツールを使用して、嚢胞体積を正確に測定できることが観察されました。
年齢一致対照マウスと実験マウスとの間で腎臓総体積に明確な差が認められた。ボリュームレンダリングの3Dビジュアライゼーションは、3D空間内の回転を含むシステム内で実行されました。後心外膜層は明るい白色に見え、後心内膜層と同様のパターンをたどった。
前心内膜層は、最も高い輪郭に沿ってトレースされた。前心外膜層は、動物の傾向のある位置のために画像の下部に直線的に見えた。正常なマウス腎臓を、超音波を用いて嚢胞性マウス腎臓および適度に石灰化したマウス腎臓と比較した。
高品質の画像を取得するための最も重要なステップは、髪が完全に除去されていることを確認することです。髪の毛が残っていると、画像に干渉が発生し、画質が低下します。
