パーキンソン病のラットモデルにおけるレボドパ誘発性ジスキネジアの誘導と評価

我々のプロトコールは、パーキンソン病のラットモデルにおけるレボドパ誘発性ジスキネジアの信頼性の高い誘導および包括的な評価のための詳細な方法を提供する。私たちのジスキネジア評価尺度の主な利点は、特定の異常な不随意運動の強度とその行動を示すのに費やされた時間の両方を定量化できることです。レボドパ誘発性ジスキネジーの信頼できる動物モデルは、パーキンソン病患者の副作用を軽減または排除するための効果的な治療法を見つけるという最終目標を実現する上で重要である。

ラットを毎週秤量して実験の準備を開始し、体重変化に基づいて適切な薬剤量を算出する。ラットに栄養的に完全で非常に嗜好性の高いおやつを提供する。L-DOPA治療の初日に、ラットを施設の動物ケアおよび使用委員会が承認した濃縮で供給された単一の住宅に移した。

また、研究中ずっとラットを単一のハウジングに維持して、行動評価に対する仲間の干渉を避けます。ジスキネジア評価日には、行動評価の妨げにならないように、ケージ内の水筒、食料ラック、濃縮物を取り出し、ケージをスチールワイヤーラックに約45度の角度で置き、識別タグを上にひっくり返します。L-DOPA注射の前に、アンバーバイアル中の凍結乾燥L-DOPAとベンセラジドミックスを予め秤量した滅菌生理食塩水に適切な量を加え、10秒間よく振る。

調製直後に、26ゲージ針に取り付けられた個々のシリンジに各動物のためのL-DOPA-ベンセラジド混合物の必要量を充填し、各シリンジに個々の動物識別でラベルを付ける。最初のケージを注射ベンチに持ち込んだ後、ラットをケージから取り出して注射面に置きます。利き手ではない手を使用して、手のひらを表面に当ててラットの頭と肩を拘束し、親指と人差し指で肩甲骨の上に横たわる背中の皮膚をこすります。

利き手を使用して、指の間の皮下腔にL-DOPAボリュームを注入し、筋肉内注射を避けるために針を体に平行に保ちます。注射後、ラットをケージに入れます。次に、タイマーを1〜2分間設定し、すべてのラットが注射されるまで、1〜2分ごとに1匹のラットを注入する手順を繰り返します。

評価日に、ケージの隣にタイマーを配置して、評価期間中の特定の行動の頻度を推定しながら、レボドパ誘発性ジスキネジアまたはLID行動強度を観察します。LID行動の初期発症、ピーク挙動、および所望の時点数における衰退段階を含む、ジストニックおよび過運動性ジスキネジア運動の強度および頻度を評価する。1 分間の評価間隔を使用する場合は、タイマーを 1 分間に設定して最初のラットを評価し、1 分間隔ですべてのラットで評価を続けます。

パーキンソン病ラットにおける異常な不随意行動のLID評価は、行動の強度および頻度を含むように分類された。ラットでは、ジストニック、運動亢進、ステレオタイプ行動を含む一連の異常な不随意運動が観察された。代表的な分析は、実験タイムラインおよび投薬スケジュール全体にわたってピーク用量LIDとして提示されたデータの例を提供する。

LIDのピーク用量は、群平均LIDスコアが最も大きかった時間として定義した。さらに、LID評価データを、異なるL−DPOA濃度で各毎日の評価時間経過にわたって調べ、群を結合し、個々の動物としてプロットした。行動学的に評価された被験者の死後組織は、レボドパ誘発性ジスキネジアに関連する分子機構、およびそのような分子機構に対する治療介入の影響を探求するために使用することができる。

レボドパ誘発性ジスキネジアの動物モデルは、この行動病の根底にあると考えられるいくつかのメカニズムを解明するのに有用であった。このような理解は、いくつかの標的の前臨床的および臨床的評価につながっている。