Protokolümüz, Parkinson hastalığının bir sıçan modelinde levodopa kaynaklı diskinezinin güvenilir bir indüksiyonu ve kapsamlı bir şekilde derecelendirilmesi için ayrıntılı bir yöntem sağlar. Diskinezi derecelendirme skalamızın temel avantajı, hem belirli bir anormal istemsiz hareketin yoğunluğunun hem de bu davranışı sergilemek için harcanan zamanın miktarının ölçülmesine izin vermesidir. Levodopa kaynaklı diskinezinin güvenilir hayvan modelleri, Parkinson hastalığı olan bireylerde yan etkiyi azaltmak veya ortadan kaldırmak için etkili tedaviler bulmanın nihai hedefini gerçekleştirmede kritik öneme sahiptir.
Ağırlık değişikliklerine göre uygun ilaç miktarını hesaplamak için fareleri haftalık olarak tartarak deney hazırlığına başlayın. Sıçanlara besleyici olarak eksiksiz ve son derece lezzetli muameleler sağlayın. L-DOPA tedavisinin ilk gününde, sıçanları kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi onaylı zenginleştirme ile sağlanan tek konutlara aktarın.
Ve davranışsal değerlendirmelere akran müdahalesini önlemek için sıçanları çalışma boyunca tek bir yuvada tutun. Diskinezi derecelendirme günlerinde, davranışsal değerlendirmelere müdahale etmemek için su şişelerini, yiyecek raflarını ve kafesteki zenginleştirmeyi çıkarın ve kafesleri yaklaşık 45 derecelik bir açıyla çelik tel rafa yerleştirin, ardından tanımlama etiketlerini yukarı doğru çevirin. L-DOPA enjeksiyonundan önce, kehribar şişedeki önceden tartılmış liyofilize L-DOPA ve benserazid karışımına uygun miktarda steril salin ekleyin ve 10 saniye boyunca iyice çalkalayın.
Hazırlıktan hemen sonra, her hayvan için L-DOPA-Benserazide karışımının gerekli hacmini, 26 gauge iğne ile monte edilmiş ayrı ayrı şırıngalara doldurun ve her bir şırıngayı ayrı bir hayvan tanımlaması ile etiketleyin. İlk kafesi enjeksiyon tezgahına getirdikten sonra, enjeksiyon yüzeyine yerleştirmek için sıçanı kafesinden çıkarın. Sıçanın başını ve omuzlarını avuç içi ile yüzeye karşı dizginlemek için baskın olmayan eli kullanın ve kürek kemiğinin üzerinde baş parmak ve işaret parmağı ile sırttaki cildi fırçalayın.
L-DOPA hacmini parmaklar arasındaki deri altı boşluğuna enjekte etmek için baskın eli kullanın ve kas içi enjeksiyonu önlemek için iğneyi vücuda paralel tutun. Enjeksiyondan sonra, sıçanı kafese taşıyın. Daha sonra, zamanlayıcıyı bir ila iki dakika boyunca ayarlayın ve tüm sıçanlar enjekte edilene kadar her bir ila iki dakikada bir sıçan enjekte etme prosedürünü tekrarlayın.
Değerlendirme gününde, derecelendirme süresi boyunca herhangi bir davranışın sıklığını tahmin ederken, levodopa kaynaklı diskinezi veya LID davranış yoğunluğunu gözlemlemek için kafesin yanına bir zamanlayıcı yerleştirin. Distonik ve hiperkinetik diskinezi hareketlerinin yoğunluğunu ve sıklığını, LID davranışının ilk başlangıcı, pik davranışı ve istenen sayıda zaman noktasında düşüş fazı dahil olmak üzere derecelendirin. Bir dakikalık derecelendirme aralıkları kullanıyorsanız, ilk sıçanı derecelendirmek için bir dakika için bir zamanlayıcı ayarlayın ve derecelendirmeye bir dakikalık aralıklarla tüm sıçanlar boyunca devam edin.
Parkinson sıçanlarında anormal istemsiz davranışlar için LID derecesi, davranışların yoğunluğunu ve sıklığını içerecek şekilde kategorize edildi. Sıçanlarda distonik, hiperkinetik ve stereotipik davranışlar da dahil olmak üzere bir dizi anormal istemsiz hareket gözlenmiştir. Temsili analiz, tüm deneysel zaman çizelgesi ve dozaj programı boyunca pik doz LID olarak sunulan verilerin bir örneğini sunar.
Pik doz LID, grup ortalama LID skorunun en yüksek olduğu bir zaman olarak tanımlandı. Ek olarak, LID derecelendirme verileri, her bir günlük derecelendirme süresi boyunca, farklı L-DPOA konsantrasyonlarında, gruplar birleştirilerek ve bireysel hayvanlar olarak çizilerek incelenmiştir. Davranışsal olarak değerlendirilen deneklerden alınan postmortem doku, levodopa kaynaklı diskinezilerle ilişkili moleküler mekanizmaları ve terapötik müdahalelerin bu moleküler mekanizmalar üzerindeki etkisini araştırmak için kullanılabilir.
Levodopa kaynaklı diskinezinin hayvan modelleri, bu davranışsal hastalığın altında yattığı düşünülen çeşitli mekanizmaların aydınlatılmasında yararlı olmuştur. Bu anlayış, çeşitli hedeflerin klinik öncesi ve klinik değerlendirmesine yol açmıştır.
