우리의 프로토콜은 파킨슨 병의 쥐 모델에서 레보도파 유도 운동 이상증의 신뢰할 수있는 유도 및 포괄적 인 평가를위한 상세한 방법을 제공합니다. 우리의 운동 장애 등급 척도의 가장 큰 장점은 주어진 비정상적인 비자발적 운동의 강도와 그 행동을 나타내는 데 소요 된 시간을 정량화 할 수 있다는 것입니다. 레보도파로 인한 운동 이상증의 신뢰할 수있는 동물 모델은 파킨슨 병 환자의 부작용을 줄이거 나 제거하는 효과적인 치료법을 찾는 최종 목표를 실현하는 데 중요합니다.
매주 쥐를 칭량하여 실험을 위한 준비를 시작하여 체중 변화에 기초하여 적절한 약물 양을 계산한다. 쥐에게 영양학적으로 완전하고 맛이 좋은 음식을 제공하십시오. L-DOPA 치료 첫날, 쥐를 기관 동물 관리 및 사용위원회가 승인 한 농축과 함께 제공되는 단일 주택으로 옮깁니다.
그리고 행동 평가에 대한 동료 간섭을 피하기 위해 연구 전반에 걸쳐 쥐를 단일 주택으로 유지하십시오. 운동 장애 등급 일에는 행동 평가에 대한 간섭을 피하기 위해 물병, 음식 랙 및 케이지의 농축을 제거하고 케이지를 약 45도 각도로 강철 와이어 랙에 놓은 다음 식별 태그를 위쪽으로 뒤집습니다. L-DOPA 주사 전에, 적절한 부피의 멸균 식염수를 호박색 바이알에 미리 칭량된 동결건조된 L-DOPA 및 벤세라지드 혼합물에 첨가하고 10초 동안 잘 진탕시킨다.
준비 직후, 각 동물에 대해 필요한 부피의 L-DOPA-Benserazide 믹스를 26 게이지 바늘로 장착된 개별 주사기에 채우고 각 주사기에 개별 동물 식별부로 라벨을 붙인다. 첫 번째 케이지를 주입 벤치로 가져온 후 새장에서 쥐를 제거하여 주입 표면에 놓습니다. 비 지배적 인 손을 사용하여 손바닥으로 쥐의 머리와 어깨를 표면에 대고 제지하고 견갑골 위에 엄지 손가락과 검지로 뒤의 피부를 비웃습니다.
지배적 인 손을 사용하여 손가락 사이의 피하 공간에 L-DOPA 볼륨을 주입하고 바늘을 신체와 평행하게 유지하여 근육 주사를 피하십시오. 주사 후 쥐를 새장으로 옮깁니다. 다음으로, 타이머를 하나 내지 두 분 동안 설정하고, 모든 래트가 주입될 때까지 한 두 분마다 한 마리의 쥐를 주입하는 절차를 반복한다.
평가 당일에, 케이지 옆에 타이머를 위치시켜 레보도파-유도된 운동이상증 또는 LID 거동 강도를 관찰하면서 평가 기간 동안 임의의 주어진 행동의 빈도를 추정한다. LID 거동, 피크 거동 및 원하는 수의 시점에서 쇠퇴의 단계를 포함하는 운동 이상증 및 운동 이상증 운동의 강도와 빈도를 평가하십시오. 일분 평가 간격을 사용하는 경우, 첫 번째 쥐를 평가하도록 타이머를 1분 동안 설정하고 일분 간격으로 모든 래트를 통해 등급을 계속하십시오.
파킨슨병 쥐의 비정상적인 비자발적 행동에 대한 LID 등급은 행동의 강도와 빈도를 포함하도록 분류되었다. 긴장 이상, 운동 이상, 고정 관념 행동을 포함한 다양한 비정상적인 비자발적 운동이 쥐에서 관찰되었습니다. 대표적인 분석은 전체 실험 타임라인 및 투여량 스케줄에 걸쳐 피크 용량 LID로서 제시된 데이터의 예를 제공한다.
피크 용량 LID는 그룹 평균 LID 점수가 가장 큰 시간으로 정의되었다. 추가적으로, LID 등급 데이터는 상이한 L-DPOA 농도에서 각각의 일일 등급 시간 과정에 걸쳐 조사되었고, 그룹들은 개별 동물로서 조합되고 플롯팅되었다. 행동적으로 평가된 피험자로부터의 사후 조직은 레보도파-유도된 운동이상증과 관련된 분자 메카니즘, 및 이러한 분자 메카니즘에 대한 치료적 개입의 영향을 탐구하는데 사용될 수 있다.
레보도파-유도된 운동이상증의 동물 모델은 이러한 행동 병의 기초가 되는 것으로 생각되는 몇 가지 메커니즘을 밝히는데 유용하였다. 이러한 이해는 여러 표적에 대한 전임상 및 임상 평가를 이끌어 냈습니다.
