Наш протокол предоставляет подробный метод для надежной индукции и всесторонней оценки дискинезии, вызванной леводопой, на крысиной модели болезни Паркинсона. Основным преимуществом нашей шкалы оценки дискинезии является то, что она позволяет количественно оценить как интенсивность данного аномального непроизвольного движения, так и количество времени, затраченного на проявление этого поведения. Надежные животные модели дискинезии, вызванной леводопой, имеют решающее значение для реализации конечной цели поиска эффективных методов лечения для уменьшения или устранения побочного эффекта у людей с болезнью Паркинсона.
Начните подготовку к эксперименту, взвешивая крыс еженедельно, чтобы рассчитать соответствующее количество препарата на основе изменений веса. Обеспечьте крыс питательными и очень вкусными лакомствами. В первый день лечения L-DOPA переведите крыс в одно помещение, снабженное институциональным обогащением Комитета по уходу и использованию животных.
И держите крыс в одном доме на протяжении всего исследования, чтобы избежать вмешательства сверстников в поведенческие оценки. В дни оценки дискинезии удалите бутылки с водой, стойки для еды и обогащение в клетке, чтобы избежать вмешательства в поведенческие оценки, и поместите клетки на стальную проволочную стойку под углом примерно 45 градусов, а затем переверните идентификационные бирки вверх. Перед инъекцией L-DOPA добавьте соответствующий объем стерильного физиологического раствора в предварительно взвешенную смесь L-DOPA и бенсеразида во флаконе с янтарным и хорошо встряхните в течение 10 секунд.
Сразу после приготовления заполните необходимый объем смеси L-DOPA-Benserazide для каждого животного отдельными шприцами, установленными иглой 26 калибра, и пометьте каждый шприц индивидуальной идентификацией животных. После того, как вы принесете первую клетку на инъекционную скамью, выньте крысу из клетки, чтобы поместить ее на поверхность инъекции. Используйте недоминирующую руку, чтобы удерживать голову и плечи крысы ладонью о поверхность и сжимать кожу на спине, перекрывающей лопатки большим и указательным пальцами.
Используйте доминирующую руку для введения объема L-DOPA в подкожное пространство между пальцами, удерживая иглу параллельно телу, чтобы избежать внутримышечной инъекции. После инъекции переместите крысу в клетку. Затем установите таймер на одну-две минуты и повторяйте процедуру инъекции одной крысы каждые одну-две минуты, пока все крысы не будут введены.
В день рейтинга расположите таймер рядом с клеткой, чтобы наблюдать за дискинезией, вызванной леводопой, или интенсивностью поведения LID, оценивая частоту любого данного поведения в течение рейтингового периода. Оцените интенсивность и частоту движений дистонической и гиперкинетической дискинезии, включая начальное начало поведения LID, пиковое поведение и фазу снижения в желаемом количестве временных точек. Если вы используете одноминутные интервалы оценки, установите таймер на одну минуту, чтобы оценить первую крысу и продолжить рейтинг через всех крыс с интервалом в одну минуту.
Рейтинг LID для аномального непроизвольного поведения у крыс с болезнью Паркинсона был классифицирован так, чтобы включать интенсивность и частоту поведения. У крыс наблюдался ряд аномальных непроизвольных движений, включая дистоническое, гиперкинетическое и стереотипное поведение. Репрезентативный анализ дает пример данных, представленных в виде пиковой дозы LID за весь экспериментальный график и график дозирования.
Пиковая доза LID была определена как время, когда средний балл LID в группе был наибольшим. Кроме того, данные рейтинга LID были изучены в течение каждого ежедневного курса рейтингового времени при различных концентрациях L-DPOA с группами, объединенными и построенными как отдельные животные. Посмертная ткань поведенчески оцененных субъектов может быть использована для изучения молекулярных механизмов, связанных с дискинезиями, вызванными леводопой, и влияния терапевтических вмешательств на такие молекулярные механизмы.
Животные модели дискинезии, вызванной леводопой, были полезны для выяснения нескольких механизмов, которые, как считается, лежат в основе этого поведенческого заболевания. Такое понимание привело к доклинической и клинической оценке нескольких целей.
