根の滲出液中の根茎細菌の化学誘引物質の迅速な同定のための改良された気化症アッセイ

この論文は、改良された走化性アッセイを用いて根滲出液中の根本細菌の化学誘引物質の同定を報告した。気体化性インプラント根の作動は、植物の成長のための根のコロニー形成、根粒菌の促進、および植物 - 微生物相互作用の有用な派閥を提供するために重要である。細菌走化性を分析するために多くの方法が用いられた。

例えば、水泳プレート法、キャピラリー様法、マイクロ流体スリップチップ装置等が挙げられる。スイミングプレート法の実験サイクルは長かった。Cappilary様法の実験誤差が打ち出されたが、マイクロ流体スリップチップ装置は実験に費用がかかる。

根圏増殖促進細菌の走化性運動を誘導できる化学誘引物質を、複雑な工程を踏まずに滅菌スライドガラスを用いて迅速に同定する簡便な方法を確立しました。この方法は、プレートカウントの誤差を低減し、実験サイクルを短縮した。化学誘引物質の同定に関しては、2~3日を節約でき、実験材料のコストも削減できる。

栽培室内にイネ種子をランダムに分配し、培養が1週間発生し、滅菌水を2回加える。同様のサイズのイネの苗木を選択し、50ミリリットルのMs液体培地に植物を植える。摂氏22度で48時間インキュベートし、敗血症条件下に置く。

イネ根滲出液はMs培地に放出されます。液体クロマトグラフィー質量分析は、UHPLCシステムを用いて行った。化学誘引剤水溶液を調製し、それが無菌であることを確認する。

化学誘引剤溶液を0.22マイクロメートルのバクテリアフィルターでろ過します。この化学誘引性水溶液は、LCMS試験から得られた単一物質を水に溶解した。例としてシトリックス酸溶液を用いた。

すべてのアクションはランプの側面で実行する必要があります。スライドガラスの中央の位置に1センチメートル間隔で印を付けます。スライドガラスが炎の上で数回滅菌されていることを確認します。

スライドガラスの左側にある30マイクロリットルの化学誘引溶液で、細菌が対数段階まで培養されたことを確認する。スライドガラスの右側に30マイクロリットルの細菌溶液を加える。接種ループを用いて接種ループを数回炎上で殺菌し、化学誘引剤水溶液を菌液に接続し、クリーンベンチ上で室温で20分間保持する。

20分後、ろ紙で接続ラインを切断する。1.5 ミリリットルの遠心チューブが滅菌されていることを確認します。スライドガラスの左側に化学誘引剤水溶液を集める。

この溶液を1.5ミリリットルの滅菌遠沈管に移す。適切な量の細胞前色素を遠心チューブに加える。2分後、細菌計数および顕微鏡観察のための許容液体を計血チャンバで集める。

誘引された生微生物の数を以下の式を用いて求める。より高いRCIは、化学誘引剤に対する強い反応を示す。結果は、クエン酸およびカフェ酸が最も高い走化性指数を有することを示した。

新しい走化性アッセイ法の結果は、クエン酸、カフェ酸およびガラクトースの実験の細菌缶濃度が対照群および陽性対照のそれよりも有意に高かったことを書いた。クエン酸は最も強い走化性を書いた。実験結果は、従来の方法の結果と一致した。

このビデオプロトコルは、植物と微生物の相互作用を明らかにするための貴重なリソースとして提示することができます。