海馬および前頭前野における樹状突起脊椎の可視化のための迅速なゴルジ染色

比較的単純ですが、ゴルジ体含浸技術にはいくつかのトリッキーな手順があり、それらを適切に行わないと、分析に適さない細胞になります。この技術は、ゴルジ体含浸ニューロンの迅速で再現性のある標識を提供する。さらに、平均の小さな標準誤差により、実験間の比較が可能になります。

このテクニックの最も難しい部分は、異常な一貫性と固定があるため、クライオスタットセクションを切断することであり、したがって、スライドを平らにすることは少し難しい作業です。まず、冷却前のクライオスタットチャックの上に少量の組織培地を置きます。ブロックの片側を手袋をはめた手でわずかに解凍し、組織媒体の上に置くことによって、脳ブロックをクライオスタットチャックに取り付ける。

ナイフとブロックに凍結スプレーを使用してください。アンチロールプレートまたはブラシを使用して、切断中にセクションを平らに保ちます。クライオスタット上の 100 マイクロメートルの切片を摂氏マイナス 22 度で切断します。

可能であれば、室温スライドを使用してマウントを解凍し、すぐにセクションに対向させます。または、スライドをクライオスタットに保管して、凍結させます。冷たい鉗子または冷たいペイントブラシでセクションを移し、マウントを解凍します。

3〜4つのコロナセクションを沈下部に取り付けます。スライスの間の紙拭き取りでナイフをきれいにします。ナイフをさらに洗浄する必要がある場合は、次のスライスを切る前に100%エタノールを使用し、乾燥させます。

スライドはラックに配置し、ソリューションがセクションにアクセスできるように十分な間隔を空けます。切片を蒸留水に2回4分間入れてから、ゴルジ体含浸液に10分間入れます。カバースリップを分離して、カバースリップがセクションに 1 つだけ配置されるようにします。

スライドにガラスカバースリップを置く前に、スライドガラスを多量のマウントメディアで覆います。カバーが滑ると、乾いたスライドは3〜5日間、無孔質紙にフラグを立て、特に固着を避けるために初日以降はわずかに動かします。後でスライドをスライドホルダーに移し、理想的にはスライドを少なくとも3週間乾かしてから検査します。

内側前頭前野と海馬のCA1領域の両方の錐体ニューロンにおける樹状突起脊椎密度を解析するために、画像解析プログラムを用いて樹状突起長を測定する。ハンドカウンターを使用して樹状突起の棘を数え、棘の長さと数の両方を記録します。解析には、含浸させた状態で細胞体と樹状突起を持つニューロンと、連続していて隣接する細胞と区別可能な樹状突起を選択します。

図には、海馬のCA1領域におけるゴルジ体含浸細胞が低出力および高出力で示されている例を示す。図は、CA1および内側前頭前野における環境濃縮後の思春期雄および雌ラットの錐体細胞上で基底樹状樹状脊椎密度を上昇させた実験を示す。切断時にセクションを十分に冷たく保つことは困難であり、そのために大量の凍結スプレーを使用します。

その後、セクションをスライドに乗せて平らに乾燥させることは困難です。この技術は、神経解剖学的特徴を調べるために使用されます。これらは、単独で、または他の神経解剖学的トレース方法と組み合わせて使用することができる。