このプロトコルは、質量分析計で分子の活性化時に生成されるフラグメントのイオン移動度プロファイルを記録し、異性体構造を区別する方法を記述しています。このプロトコルは、グリカンをその主要な構造的特徴のいくつかに関して11のグループに分類することを可能にし、したがって、そうでなければ得ることが困難な情報を提供する。それは非常に一般的であり、多くの研究分野で関心のある代謝産物や薬物など、多くの分子ファミリーに適した分子ネットワークを構築するのに役立ちます。
このアプローチは、イオン移動度分析における新しい概念を最大限に活用し、質量分析だけでは2つの構造を区別できない場合に有用であろう。この実験には、質量分析とイオン移動度の優れたコマンドが必要です。ただし、実験者は、各手順に注意深く従えば、メソッドの実装に成功するはずです。
手順を実演するのは、私の研究室の博士課程の学生であるサイモン・オリヴィエです。まず、TuneページからシングルパスIMSシーケンスを設定し、計測器をモビリティモードにして、サイクリックシーケンス制御ウィンドウを開きます。この新しいウィンドウの「サイクリック機能」タブから「詳細モード」を選択し、「バンドルの追加」を選択してから、「シングル/マルチパス」を選択します。
モビリティ イベントのシーケンスが同じウィンドウの [シーケンス] タブに表示されるのを待ちます。すべてのキャリブラントイオンがサイクリックIMS競馬場の周りを1回通過するようにシーケンスを調整します。ただし、注入時間またはイジェクト時間と集録時間は変更しないでください。ただし、分離時間を 1 ミリ秒に下げてください。
キャリブレーション混合気の一部のイオンが表示された到着時間ウィンドウに収まらない場合は、[ADC 設定]タブでビンあたりのプッシュ数を増やして、IMSと直交加速度TOFアナライザのプッシャーとの同期を変更します。「サイクリックシーケンスコントロール」ウィンドウで 2 分間の集録を記録するには、「集録」をクリックして「集録設定」ポップアップウインドウを開き、「ファイル名」、「説明」、および「集録の長さ」(分) を入力して、「保存」をクリックします。MS Tuneページから計測器をTOFモードに切り替えて、信号の安定性を確認します。
サンプルの完全なMS取得を1分間記録すると、同位体パターンと潜在的な汚染物質の存在を確認するのに役立ちます。メインのTuneページのQuad/MSプロファイルタブから計測器をMSMSモードにします。四重極での単離のためにMSMS質量フィールドでターゲット鉄の質量を選択します。
1分間の集録を記録して、データ処理時に前駆体の分離を確認します。目的の異性体のモビリティベースの選択を実行するには、サイクリックシーケンスコントロールウィンドウで計測器をモビリティモードに切り替え、「サイクリック機能」タブから「バンドルを追加」を選択し、「スライス」を選択します。モビリティ イベントの複雑なシーケンスが [シーケンス] タブに表示されるのを待ちます。
取り出しイベントと取得イベントを最初の分離イベントの直後に配置し、[実行] をクリックします。リアルタイムで表示される初期分離の結果を探します。IMS ピークの解決が満足のいくものになるまで、シーケンス内のこのイベントの時間値を変更して、マルチパス分離の最初の分離イベントの継続時間を長くします。
参照用に1分間の集録を記録します。「一時停止」をクリックし、「取り出し」イベントと「取得」イベントを「取り出し」、「プリストアへの取り出し」、および「保留」および「取り出し」イベントの下に配置します。ターゲットピークが「イジェクトからプリストアへ」領域にあり、その他のイオンが「イジェクト」領域または「ホールドアンドイジェクト」領域にあるように、イベントの継続時間を調整します。
イジェクト イベントと取得イベントは、シーケンスの最後に、プレストアからの再注入イベントと 2 番目の個別のイベントの下に配置します。[実行]をクリックして、選択した母集団を表示します。分離の品質を確認します。
参照用に1分間の集録を記録します。「シーケンス」タブのユーザー定義イベント時刻の横にある列で、すべてのイベントの集計時刻を探します。CCS キャリブレーションを実行するための [プレストアから再注入] イベントの行で見つかった時間 Abs に注意してください。
イジェクトと集録を直接進める Separate イベントの継続時間を 1 ミリ秒に設定します。[ストア前から再挿入] 行で、[アクティブ化を有効にする] ボックスをオンにし、組み込みコントロールを使用して断片化を最適化します。フラグメンテーションが内蔵コントロールで満足のいくものでない場合は、[アクティブ化を有効にする]ボックスのチェックを外し、再注入電圧を手動で最適化し、プリアレイ勾配を増加させ、結果が満足できるまでアレイオフセット電圧を下げます。
「集録」ポップアップウィンドウで 2 分間の集録を記録するには、「ドリフト時間を保持」オプションにチェックマークを付けて、到着時刻のみを含むファイルを生成します。一方、Z 上の M は_dt.rawとラベル付けされています。アラビノキシラン五糖混合物のMS分析を実施した後、スペクトルはMオーバーZ 685.24に単一のピークを有する同位体パターンを表示し、2つの化合物が本質的に異性体であることを示唆した。環状IMS細胞を通して五糖の付加物を分離し、異なる到着時間で3つのピークを分離した。
純粋なXA3XXは83ミリ秒と90ミリ秒でピークを示し、XA2XXは94ミリ秒でピークを示します。IMS分離の第1段階の後、XA3XXに属するイオンが放出され、94ミリ秒のピークがIMS-IMS分析のために選択された。活性化せずにイオンを再注入した後、3パス分離を行い、199ミリ秒にXA2XXのピークが得られた。
生成されたIMS-IMS MSデータは、Z次元上の到着時間とMを使用してデコンボレーションされ、IMS-IMSスペクトルが生成されました。相対強度が0.2%を超えるピークはCCSキャリブレーション用にエクスポートされ、重心付きCCSキャリブレーションされたIMS-IMSスペクトルが得られました。前駆体イオンの単離を確認することは常に重要であり、さもなければ、スペクトルは目的の化合物と汚染物質との混合物から来るかもしれない。
以前はIMS-IMSスペクトルを使用してネットワークを構築し、化合物を分類していましたが、化合物の識別をデータベースから検索するためにも使用できました。この手法は非常に最近のものですが、グリコミクスやアナリストが異性体分子に直面するあらゆる状況で非常に有用であると期待しています。
