マウスにおける腹膜透析カテーテル留置のための逆行性移植アプローチ

腹膜透析のマウスモデルに関する以前のプロトコルは、長期間の使用を妨げる制限に苦しんでいます。カテーテルの巻き取りや脱落などのこれらの制限は、この研究で対処されています。この技術は、機械的な理由によるPDカテーテルの機能不全を防ぎ、腹膜線維症などの病状を研究するためにPDカテーテルを長期間使用することを可能にします。

この技術は、腹膜線維症の分子病因と新しい治療法を調べるためのより良いマウスモデルを提供します。ヒトにおけるPDの主な制限。PDは、ESKDの小児患者における腎代替療法の主力です。

この最適化されたモデルは、ヒトのPDに関するすべての問題を調査するためのより良いテストベッドを提供します。動物モデルの生成には学習曲線があります。このステップバイステップのビデオは、腹膜透析の耐久性のあるモデルを正常に生成するために、この技術を実装する際に個人を支援します。

まず、完全に麻酔をかけた8〜12週齢のC57ブラック/ 6Jマウスを左横位置に置きます。原稿に指定されているようにマウスを剃った後、マウスの右側を加熱ブランケットにさらして手術領域を消毒します。次に、滅菌外科用ドレープをマウスの上に置きます。

アクセスポートポケットをマウステールの1センチ上に割り当てます。非支配的な人差し指とサムフィンガーで、尾の近くの割り当てられた領域に取り付けセグメントを保持します。カテーテルを皮膚の上に配置し、腹腔内にカテーテルのチューブを挿入する場所を推定します。

次に、前正中線近くのチューブの最小の曲げを尊重して、チューブ挿入に割り当てられた場所に印を付けます。マウスのイヤータガーでリザーバーセクションのフレームにサイドホールを開けます。尾の1センチメートル上に水平に1センチメートル幅の皮膚切開を行います。

次に、下にある筋肉層から皮下面を鈍く解剖して、カテーテル配置用のポーチを作成し、取り付けポートが理想的なポートポケットに自由に存在するようにします。カスタマイズされたサイドホールからの3-0縫合糸を過ぎます。チューブコースの頭蓋骨を維持しながら、通過した縫合糸を締めて、アクセスポートを筋肉床に固定します。

正中線近くの正式にマークされた領域に1センチメートルの切開を行います。切開された腹壁の筋肉の周りに4-0の丸い吸収性縫合糸を備えた緩い財布ひも縫合糸を置きます。右正中線に近い筋肉層を1センチ切開し、切開部内のカテーテルの近位フェルトを通過させます。

準備した管にカテーテルチューブを通します。準備した巾着糸縫合糸をチューブの周りに締め付け、2番目のフェルトを筋肉層の上の巾着紐の外側に保ち、3-0吸収性縫合糸で皮膚を閉じます。配置されたカテーテルが機能していることを確認してください。

ポートの特定のフーバー針に取り付けられた1ミリリットルのシリンジで機能を確認してください。通常の生理食塩水を取り付けポートに注入します。抵抗に対する耐性がゼロの滑らかな流れを確認した後、3-0の吸収性縫合糸でポートリザーバー周辺の皮膚切開を閉じます。

フーバー針でポートに入り、100マイクロリットルの生理食塩水をポートに注入して、特許コースを確認します。次に、200マイクロリットルのリポ多糖を注入し、続いてチューブ灌漑用の生理食塩水100マイクロリットルを注入し、抵抗がないことを確認します。7日間のLPS注射と2週間のカテーテル移植の後、腹膜生検を計画します。

麻酔が成功したことを確認したら、膀胱から剣状骨下まで正中線の皮膚切開を行います。次に、筋膜下面を冷たいPBSで灌流します。腹膜の完全性を損なうことなく、飛行機が完全に解剖されていることを確認してください。

ヘマトキシリンおよびエオジン染色切片の分析は、腹膜下腔における細胞外マトリックス(ECM)の大幅な増加を示した。対照マウスの腹膜下腔の平均ECMは、LPS曝露マウスの半分であった。マッソンのトリクローム染色は、表面積に正規化された強度密度として測定される線維症を検出します。

血管の変化および腹膜下腔の拡大を内皮細胞マーカーCD31を用いて解析し、無作為に選択された高倍率視野画像における積分密度として測定した。対照と比較して、LPS誘発マウスは、腹膜下線維症の3倍の増加、血管の約8〜9倍の増加、およびSPとマークされた腹膜下腔の2倍の増加が観察されました。カテーテルを皮膚の上に配置し、チューブの曲がりを避けながら、カテーテル挿入のポイントをマークします。

挿入は内部正中線の近くにある必要があります。より耐久性のあるマウスPDカテーテル留置法を提供することで、研究者は腹膜の障害を調査して標的とする長期実験を設計および実行することができます。