このプロトコルは、循環死後の寄付の大型動物モデルとそれに続く胸腹部正常熱局所灌流について説明します 臨床心臓移植を正確に模倣します。これは、トランスレーショナルリサーチにおける潜在的な戦略を評価するために使用できます。このプロトコルの主な利点は、イノシシ豚と人間の心臓の間の解剖学的および外科的技術の類似性を考えると、心臓移植に適した前臨床モデルを提供することです。
焼灼ペンを使用して、麻酔をかけた動物の頸部中央部から剣状突起までの正中線切開を行うことから始めます。次に、皮下脂肪を、電気焼灼を使用して正中線に沿って層ごとに分割し、胸骨周囲に到達します。胸骨ノッチの周りを切った後、指を使って胸骨の下から軟組織を引っ込めて掃きます。
胸骨の上部の下の静脈に注意しながら、胸骨が完全に分割されていることを確認しながら、骨のこぎりで胸骨を開きます。次に、胸骨を焼灼するか、骨ワックスを塗布して適切な止血を確保します。次に、電気焼灼を使用して胸腺を心膜から持ち上げて解剖して除去し、大動脈と上大静脈から胸腺を供給する血管を焼灼して出血を防ぎます。
心膜を焼灼で慎重に切り開きます。切断中は、心臓の損傷を防ぐために心膜の下に指を挿入します。次に、ヘパリン1キログラムあたり300単位を静脈内投与して、全身抗凝固療法を達成します。
テストが利用可能な場合は、活性化凝固時間が300秒を超えていることを確認してください。プロポフォール1キログラムあたり3ミリグラムのボーラスを静脈内投与します。.次に、機械的換気を停止し、気管内チューブを外します。
動脈圧と末梢酸素飽和度を監視します。収縮期血圧が水銀柱50ミリメートル未満の場合、機能的温虚血時間を開始する。収縮期があり、動脈拍動がない場合に循環停止を確立します。
生命維持療法の中止と死亡の確認後、右心室流出路を下方に、肺動脈を左に、大動脈を右に引っ込める。次に、焼灼を使用して大動脈肺腔を慎重に解剖します。大動脈上血管に大きなクロスクランプを適用して、脳灌流を回避および排除します。
次に、メッツェンバウムと直角鉗子を使用して、上大静脈と内耳の間、および下大静脈と心膜の間を繊細に解剖します。そして、臍帯テープまたは単純なゼロシルク縫合糸を使用して上大静脈と下大静脈を一周し、止血帯で固定します。3-0縫合糸を使用して、遠位上行大動脈外膜に2つの同心円状の巾着縫合糸を配置し、全層縫合糸を避けます。
次に、止血帯ですべての縫合糸を固定する前に、右側の心房に巾着糸縫合糸を配置します。次に、正常熱局所灌流システムをセットアップしてプライミングします。次に、17〜21のフランスの動脈カニューレを使用して大動脈をカニューレ挿入し、止血帯を締めて巾着糸縫合糸を保持して所定の位置に固定します。
右心房の財布のひもの中央に5ミリメートルの切開を作成し、直角やスナップなどの小さな角度の付いた器具を使用して拡張します。過度の出血を避けるために切開部を指で覆います。次に、2段静脈カニューレを使用して右心房をカニューレ挿入します。
次に、止血帯を使用して巾着紐縫合糸を締めてカニューレを固定します。8インチ以上のコネクタを使用して、カニューレを正常熱局所灌流回路の静脈ラインに接続し、システム内のエアロックを回避するために完全な脱気を確実にします。死亡宣言から正常温局所灌流の開始までに最低15分が経過し、臨床診療の準備、ドレープ、心臓へのアクセスに必要な時間が含まれるようにします。
機能的温虚血時間を開始してから15分後、正常温局所灌流を開始し、流量を徐々に調整して、毎分2.5リットル/平方メートルの灌流指数に達する。吸気酸素の50%分画とキログラムあたり6ミリリットルの一回換気で機械的換気を再開します。離乳基準が満たされたら、正常熱局所灌流を停止します。
右心房からカニューレを取り外し、巾着縫合糸をすばやく締めて失血を最小限に抑えます。縫合糸を結び目で固定します。次に、同じ手順に従って大動脈カニューレを取り外します。
標準的な経食道プローブと心臓に直接配置された経胸壁プローブを使用した心エコー検査による心機能の分析。心機能の代表的な結果は、循環死後の提供後の心機能の有意な低下を示しました。しかし、これらの臓器は、従来の移植心臓と比較して、移植後の同様の機能回復を示しました。
大動脈上血管をクランプした正常温局所灌流中の脳酸素濃度測定では、適切な脳灌流がないことが確認されましたが、正常熱局所灌流中およびサポートからの離乳後の肺コンプライアンス測定では、ベースラインからの有意な変化は見られませんでした。この技術の開発により、循環死および正常熱局所灌流後の提供の文脈で、肺、腎臓、肝臓などの他の臓器の移植可能性を評価することの重要性が導入されました。
