このプロトコルは、循環死後に寄贈された心臓の使用を可能にする異なる心臓保護コンディショニング戦略の評価を促進することによって、限られた移植臓器供給問題を対象とする。中程度に設定された加熱パッドの上に動物を置きます。麻酔をした成体ラットのつまみつまみへの応答の欠如を確認した後、直腸温度プローブを挿入する。
経皮パルスオキシメータセンサーを後足に取り付け、ラットを吸収パッドで覆い、体温を維持します。首に3〜4センチメートルの中線皮膚切開を行い、鈍い先端湾曲したはさみを使用して皮下組織を鈍く解剖し、右のステルノイド筋肉を露出させます。非外傷性鉗子を使用して、右頸動脈、頸静脈、および迷走神経が同定されるまで筋肉を横に動かす。
はさみを使用して、頸動脈から迷走神経を慎重に分離します。右頸静脈にヘパリン1キログラムあたり2,000の国際単位を注入し、針の引き込み後に注射部位に圧力をかけ、血液漏れを避ける。頸動脈の周りに2つの5-0シルク縫合糸を渡すために湾曲した鉗子を使用してください。
遠位縫合糸をしっかりと取り付けて、露出した動脈の優れた局面で頸動脈を閉塞させ、近位縫合糸を外に保ち、ラットをステレオ顕微鏡の下に置く。その後、マイクロサージャリーハサミを使用して、頸動脈の前壁に1ミリメートルの切開を慎重に行い、大動脈弓に向かって22ゲージの1インチ閉じた静脈内カテーテルを挿入します。これらの手順では、拡大およびマイクロ解剖ツールの使用を強くお勧めします。
きれいな分野は、出血を避けるために近位縫合糸を引き張ることによって達成することができる。心臓の寄付は、ex vivo心臓プレジア装置を組み立てる必要があります。DCDプロトコルを開始するには、まず動物を挿管し、蚊の鉗子を使って気管を締め付け、痛ましい段階を開始する。
ピーク収縮期血圧が水銀または収縮期または心室細動の30ミリメートルを下回ったときに機能的なWITを数え始める、のいずれか最初に来る。WITの最後に、必要に応じてAlmレトラクターで胸部を開いたままにして、内側の裂管を行います。心臓を肺静脈および他の胸部構造から分離して、心臓切除術を完了する。
すぐにエキビボシステムへの迅速な輸送のための氷冷クレブス溶液で心臓を水没させる。2-0シルク縫合糸を使用して大オルタをランゲンドルフ装置にしっかりと固定し、ストップコックを開きます。今完全にカニューレへの流れを開き、最初の再灌流と安定化時間を開始します。
心房が圧力センサーに向くように心臓を回転させ、必要に応じて左心室心房の開口部を広げるために肺静脈を解剖する。次に、圧力センサーに接続されたラテックスバルーンを挿入し、バルーンが心室の内側に完全に配置されていることを確認します。末方面圧力が水銀の15ミリメートルに達するまでゆっくりと生理音でバルーンを満たします。
冠状血管を穿刺することなく、心臓の前面にペーシング電極を挿入します。自発的な拍動が観察されたら、ペーシングを毎分300拍に設定します。10分間の安定化の後、連続的な心室内圧測定記録を開始し、再調整および評価段階を開始する。
1時間後、ランゲンドルフ装置から心臓を取り出し、まっすぐな高炭素鋼のブレードを使用して心房を取り外します。右心室を下に向けた後、厚さ1~2ミリメートルの横心室スライスを切ります。組織の3番目のスライスから右心室を切り出し、下流の生化学的分析のために左心室を凍結します。
残りのセクションをPBSで作りたての5%TTC溶液に37°Cで10分間水没させます。翌朝、サンプルを新鮮なPBSで2回洗浄し、イメージングのために新鮮なPBSにサンプルを沈めます。実行可能な組織は、色でレンガの赤で表示されます。
排泄後、血圧は予測可能なパターンで急速に低下し、予想される死亡時間は5分未満である。ここでは、WIT の 0、10、および 15 分後の再調整開始時の平均圧力対時間曲線を示します。収縮関数は時間の経過とともに改善され、WITの短期間の使用は契約が正常に戻ることを可能にし、形態学的損傷は検出できない。
心プレギアと安定化段階で加えられたコンディショニング剤の使用は、このモデルにおけるWITの15分によって発生する損傷が、心保護剤による変調に適していることを示した。この技術は、すべての関連する変数の完全な制御を可能にし、薬理学的および非薬理学的介入試験を可能にし、臨床翻訳を促進する、より大きなモデルで再生することができる。
