Este protocolo describe un modelo animal grande de donación después de la muerte circulatoria seguida de perfusión regional normotérmica toracoabdominal que imita con precisión el trasplante clínico de corazón. Esto podría usarse para evaluar estrategias potenciales en investigación traslacional. La principal ventaja de este protocolo es que proporciona un modelo preclínico adecuado para el trasplante cardíaco dadas las similitudes anatómicas y quirúrgicas de las técnicas entre el cerdo verraco y el corazón humano.
Comience usando una pluma de cauterio para realizar una incisión en la línea media en un animal anestesiado desde la región cervical media hasta la xifoidea. Luego, divida la grasa subcutánea, capa por capa, a lo largo de la línea media usando electrocauterio para llegar al peristernón. Después de cortar alrededor de la muesca esternal, use un dedo para retraer y barrer los tejidos blandos de debajo del esternón.
Abra el esternón con una sierra para huesos, asegurándose de que el esternón esté completamente dividido, teniendo cuidado con la vena debajo de la parte superior del hueso esternal. Luego, cauterice el esternón o aplique cera ósea para asegurar una hemostasia adecuada. Luego, usando electrocauterio, diseccionar y extraer el timo levantándolo del pericardio y cauterizar los vasos que irrigan el timo desde la aorta y la vena cava superior para prevenir el sangrado.
Corte cuidadosamente el pericardio abierto con cauterio. Mientras corta, inserte los dedos debajo del pericardio para evitar lesiones en el corazón. Luego, administrar 300 unidades por kilogramo de heparina por vía intravenosa para lograr la anticoagulación sistémica.
Si la prueba está disponible, asegúrese de que el tiempo de coagulación activado sea superior a 300 segundos. Administrar un bolo de tres miligramos por kilogramo de propofol por vía intravenosa. Luego, detenga la ventilación mecánica y desconecte el tubo endotraqueal.
Controlar la presión arterial y la saturación periférica de oxígeno. Cuando la presión sistólica es inferior a 50 milímetros de mercurio, inicie el tiempo de isquemia caliente funcional. Establecer paro circulatorio cuando hay asistolia y ausencia de pulsatilidad arterial.
Después de la retirada de las terapias de soporte vital y la confirmación de la muerte, retraiga el tracto de salida del ventrículo derecho inferiormente, la arteria pulmonar a la izquierda y la aorta a la derecha. Luego, disecciona cuidadosamente el espacio pulmonar de la aorta usando cauterio. Aplique una pinza cruzada grande sobre los vasos supraaórticos para evitar y excluir la perfusión cerebral.
A continuación, utilizando el Metzenbaum y pinzas de ángulo recto, diseccionar delicadamente entre la vena cava superior y la arteria innominada y entre la vena cava inferior y el pericardio. Y rodee la vena cava superior e inferior con una cinta umbilical o una simple sutura de seda cero y asegúrelos con un torniquete. Usando una sutura 3-0, coloque dos suturas concéntricas de cuerda de bolso en la aorta adventicia ascendente distal, evitando suturas de espesor total.
Luego, coloque una sutura de cuerda de bolso en la aurícula derecha antes de asegurar todas las suturas con un torniquete. A continuación, configure y prepare el sistema de perfusión regional normotérmica. Luego, cannule la aorta usando una cánula arterial francesa de 17 a 21 y asegúrela en su lugar apretando el torniquete, sosteniendo la sutura de la cuerda del bolso.
Cree una incisión de cinco milímetros en el centro de la cuerda del bolso en la aurícula derecha y extiéntela con un pequeño instrumento en ángulo, como un ángulo recto o un chasquido. Cubra la incisión con un dedo para evitar sangrado excesivo. A continuación, use una cánula venosa de doble etapa para canular la aurícula derecha.
Luego, asegure la cánula apretando las suturas de la cuerda del bolso con un torniquete. Conecte las cánulas a la línea venosa del circuito de perfusión regional normotérmico utilizando un conector de media a tres pulgadas de más de ocho pulgadas, asegurando una desaireación completa para evitar una esclusa de aire en el sistema. Asegurar que ha transcurrido un mínimo de 15 minutos entre la declaración de defunción y el inicio de la perfusión regional normotérmica para abarcar el tiempo necesario en la preparación de la práctica clínica, el drapeado y el acceso al corazón.
15 minutos después de iniciar el tiempo de isquemia caliente funcional, iniciar la perfusión regional normotérmica y ajustar los caudales progresivamente para alcanzar un índice de perfusión de 2,5 litros por minuto por metro cuadrado. Reinicie la ventilación mecánica con una fracción del 50% de oxígeno inspirado y seis mililitros por kilogramo de volumen corriente. Cuando se cumplan los criterios de destete, detener la perfusión regional normotérmica.
Retire la cánula de la aurícula derecha y apriete rápidamente la sutura de la cuerda del bolso para minimizar la pérdida de sangre. Asegure la sutura con nudos. Luego siga el mismo procedimiento para extraer la cánula aórtica.
Analizar la función cardíaca a través de la ecocardiografía utilizando una sonda transesofágica estándar y una sonda transtorácica colocada directamente en el corazón. Los resultados representativos de la función cardíaca demostraron una disminución significativa de la función cardíaca después de la donación después de la muerte circulatoria. Sin embargo, estos órganos demostraron una recuperación funcional similar después del trasplante en comparación con los corazones trasplantados convencionalmente.
Las mediciones de oximetría cerebral durante la perfusión regional normotérmica con los vasos supraaórticos pinzados confirmaron la ausencia de perfusión cerebral adecuada, mientras que las mediciones de distensibilidad pulmonar durante la perfusión regional normotérmica y después del destete del soporte no mostraron cambios significativos desde el inicio. El desarrollo de esta técnica introdujo la importancia de evaluar la trasplantabilidad de otros órganos como los pulmones, los riñones y el hígado en el contexto de la donación después de la muerte circulatoria y la perfusión regional normotérmica.
