Этот протокол описывает модель донорства на больших животных после смерти кровообращения с последующей торакоабдоминальной нормотермической регионарной перфузией, которая точно имитирует клиническую трансплантацию сердца. Это может быть использовано для оценки потенциальных стратегий в трансляционных исследованиях. Основное преимущество этого протокола заключается в том, что он обеспечивает подходящую доклиническую модель для трансплантации сердца, учитывая анатомические и хирургические методы, сходство между кабаном, свиньей и человеческим сердцем.
Начните с использования ручки для прижигания, чтобы выполнить разрез по средней линии на анестезированном животном от средней шейки матки до мечевидной кости. Затем разделите подкожно-жировую клетчатку, слой за слоем, вдоль средней линии, используя электрокоагуляцию, чтобы достичь перигрудины. Разрезав вокруг грудинной выемки, пальцем втяните и выметите мягкие ткани из-под грудины.
Откройте грудину с помощью костной пилы, убедившись, что грудина полностью разделена, при этом будьте осторожны с веной под верхней частью грудинной кости. Затем прижигают грудину или наносят костный воск, чтобы обеспечить адекватный гемостаз. Затем с помощью электрокоагуляции препарируют и удаляют тимус, поднимая его из перикарда, и прижигают сосуды, которые снабжают тимус из аорты и верхней полой вены, чтобы предотвратить кровотечение.
Аккуратно разрежьте перикард прижиганием. Во время разрезания вставьте пальцы под перикард, чтобы избежать травмирования сердца. Затем введите 300 единиц на килограмм гепарина внутривенно для достижения системной антикоагуляции.
Если тест доступен, убедитесь, что активированное время свертывания составляет более 300 секунд. Введите болюс пропофола три миллиграмма на килограмм внутривенно. Затем прекратите искусственную вентиляцию легких и отсоедините эндотрахеальную трубку.
Контролируйте артериальное давление и периферическое насыщение кислородом. Когда систолическое давление составляет менее 50 миллиметров ртутного столба, начинается функциональная тепловая ишемия. Устанавливают остановку кровообращения при наличии асистолии и отсутствии артериальной пульсации.
После отмены поддерживающей жизнь терапии и подтверждения смерти втяните выходной тракт правого желудочка вниз, легочную артерию - слева, а аорту - справа. Затем аккуратно рассекают легочное пространство аорты с помощью прижигания. Наложите большой поперечный зажим на надаортальные сосуды, чтобы избежать и исключить церебральную перфузию.
Затем с помощью щипцов Метценбаума и прямого угла аккуратно рассеките между верхней полой веной и безымянной артерией, а также между нижней полой веной и перикардом. А верхнюю и нижнюю полую вену обведите пупочной лентой или простым шелковым швом и закрепите жгутом. Используя шов 3-0, наложите два концентрических кисетных шва на дистальную восходящую адвентицию аорты, избегая наложения швов на всю толщину.
Затем наложите кисетный шов на правое предсердие, прежде чем закрепить все швы жгутом. Затем настройте и заправьте нормотермическую регионарную перфузионную систему. Затем канюлитируйте аорту с помощью французской артериальной канюли от 17 до 21 и закрепите ее на месте, затянув жгут, удерживая кисетный шов.
Сделайте пятимиллиметровый разрез в центре шнура кошелька в правом предсердии и расширьте его с помощью небольшого углового инструмента, например, прямого угла или защелки. Закройте разрез пальцем, чтобы избежать чрезмерного кровотечения. Затем используйте двухступенчатую венозную канюлю для канюляции правого предсердия.
Затем закрепите канюлю, затянув кисетные швы с помощью жгута. Подключите канюли к венозной линии нормотермического регионального перфузионного контура с помощью разъема диаметром от трех до восьми дюймов, обеспечивая полное отключение воздуха, чтобы избежать воздушной пробки в системе. Обеспечение того, чтобы между объявлением смерти и началом нормотермической регионарной перфузии прошло не менее 15 минут, чтобы охватить время, необходимое для клинической практики: подготовка, драпировка и доступ к сердцу.
Через 15 минут после начала функциональной теплой ишемии инициируйте нормотермическую регионарную перфузию и постепенно регулируйте скорость потока, чтобы достичь индекса перфузии 2,5 литра в минуту на квадратный метр. Перезапустите механическую вентиляцию легких с 50%-ной долей вдыхаемого кислорода и шестью миллилитрами на килограмм дыхательного объема. При соблюдении критериев отлучения от груди прекращают нормотермическую регионарную перфузию.
Извлеките канюлю из правого предсердия и быстро затяните кисетный шов, чтобы свести к минимуму кровопотерю. Закрепите шов узлами. Затем выполните ту же процедуру, чтобы удалить канюлю аорты.
Проанализируйте сердечную функцию с помощью эхокардиографии с использованием стандартного чреспищеводного зонда и трансторакального зонда, размещенного непосредственно на сердце. Репрезентативные результаты сердечной функции продемонстрировали значительное снижение функции сердца после донорства после смерти от кровообращения. Тем не менее, эти органы продемонстрировали аналогичное функциональное восстановление после трансплантации по сравнению с сердцами, пересаженными традиционным способом.
Измерения церебральной оксиметрии во время нормотермической регионарной перфузии с пережатыми супрааортальными сосудами подтвердили отсутствие адекватной церебральной перфузии, в то время как измерения податливости легких во время нормотермической регионарной перфузии и после отлучения от поддержки не показали существенных изменений по сравнению с исходным уровнем. Развитие этого метода показало важность оценки трансплантируемости других органов, таких как легкие, почки и печень, в контексте донорства после смерти кровообращения и нормотермической регионарной перфузии.
