顕微透析システムを用いた意識ラットからの海馬細胞外液のリアルタイム動的採取

脳微小透析技術による海馬細胞外液および群集は、中枢神経疾患の疾患特異的微小のモニタリングに寄与する。脳マイクロダイアリシス技術は、麻酔されていないラットの特定の脳領域における間質性脳液の動的かつ継続的な探究を達成する。麻酔をかけたラットを定位固定脳ロケーターに固定することから始め、手術前にポビドンヨードとエタノール綿棒で剃毛した手術部位を3回拭きます。

次に、外科用ハサミで中央から1.5センチメートルの頭蓋顔面切開を行い、外科用ハサミと眼科用鉗子を使用して骨膜を取り除きます。ブレグマを基底位置として考え、頭蓋ドリルを使用して内頭蓋を貫通し、海馬CA1領域に2ミリメートルの開口部を穿孔します。次に、カテーテルスティレットを脳定位固定装置ロケーターのグリッパーに固定し、前後、中外側、および背側の腹側でマイクロ透析ケーシングの位置を調整します。

脳ステレオロケーターの背腹側弁を調整し、微小透析ケーシングを3.5ミリメートルの深さのCA1領域に移植します。直径2ミリメートルの開口部をさらに3つ開けて、3つの開口部がプローブ開口部が中央に位置する三角形を形成するようにします。1ミリメートルの深さで開口部にネジを埋め込み、プローブカテーテルを歯科用セメントで固定します。

次に、4-O外科用縫合糸を使用して皮膚を閉じます。製造元の指示に従って、マイクロ透析ポンプマイクロシリンジをACSF覚醒活動装置および極低温サンプルコレクターに接続します。次に、パイプライン内の空気を排出するために、微小透析ポンプを毎分1マイクロリットルの速度に設定する。

次に、パイプラインと脳微小透析プローブを接続し、微小透析ポンプを毎分1マイクロリットルの速度で操作して、プローブの表面がわずかに湿るまでプローブにACSFを注入します。その後の使用のために、プローブをヘパリンナトリウム注射溶液に浸します。覚醒中のラットからHECFを収集するには、脳微小透析プローブをプローブカテーテルに挿入し、ラットをパッド付きのチャンバーに入れて、ラットが自由に動き回れるようにします。

マルチチャンネルスイベルコントローラーをオンにして、ラットの自由な動きの間にマイクロ透析パイプラインが絡み合わないようにします。次に、マイクロシリンジポンプをオンにし、毎分1マイクロリットルの速度でACSFをポンピングします。微小透析HECF収集システムの60分間の平衡化後、HECFを定期的に収集します。

サンプリング終了後、脳微小透析プローブをプローブカテーテルから取り出します。プローブを脱イオン水に浸し、脱イオン水で12時間洗浄して、パイプラインとプローブから座礁した塩の堆積物を取り除きます。プローブを取り外し、摂氏4度の0.05%トリプシン溶液に入れます。

脳微小透析技術によって獲得された海馬細胞外液は、設定されたサンプリングレートで水様、無色、透明です。最も重要な手順は、マイクロダイアリシスをCA1領域に注意深く移植し、プローブをポップカテーテルに挿入することです。マイクロダイアリシスは、特定の脳領域における疾患マーカーの動的変化、薬物の有効性の物質、および薬物成分の組織異化作用を補助することを可能にする。