Recolección dinámica en tiempo real de líquido extracelular del hipocampo de ratas conscientes utilizando un sistema de microdiálisis

El líquido extracelular del hipocampo y la multitud mediante la técnica de microdiálisis cerebral contribuyen a monitorear la enfermedad micro específica de las enfermedades nerviosas centrales. La técnica de microdiálisis cerebral logra la inquisición dinámica y continua de líquido cerebral intersticial en regiones cerebrales específicas de ratas no anestesiadas. Comience fijando la rata anestesiada en un localizador cerebral estereotáxico y limpie el área quirúrgica afeitada con un hisopo de povidona yodada y etanol tres veces antes de la operación.

Luego haga una incisión facial craneal de 1,5 centímetros por el medio con tijeras quirúrgicas y retire el periostio con tijeras quirúrgicas y fórceps oftálmicos. Considerando el bregma como la posición basal, usando un taladro craneal perforar el endocráneo para perforar una abertura de dos milímetros en la región CA1 del hipocampo. Ahora fije la aguija del catéter en la pinza de un localizador cerebral estereotáxico y ajuste la posición de la carcasa de microdiálisis en las posiciones ventral anteroposterior, mediolateral y dorsal.

Ajuste la válvula dorsoventral del localizador estéreo cerebral e implante la carcasa de microdiálisis en la región CA1 a una profundidad de 3,5 milímetros. Perfore tres aberturas más con un diámetro de dos milímetros de tal manera que las tres aberturas formen un triángulo en el que la abertura de la sonda esté ubicada centralmente. El implante atornilla en las aberturas a una profundidad de un milímetro y fije el catéter de la sonda con cemento dental.

Luego use una sutura quirúrgica 4-O para cerrar la piel. Conecte la microjeringa de la bomba de microdiálisis con el dispositivo de actividad despierta ACSF y el colector de muestras criogénicas de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Luego, para descargar el aire en la tubería, configure la bomba de microdiálisis a una velocidad de un microlitro por minuto.

Luego conecte la tubería y la sonda de microdiálisis cerebral y opere la bomba de microdiálisis a una velocidad de un microlitro por minuto para inyectar ACSF en la sonda hasta que la superficie de la sonda esté ligeramente húmeda. Sumerja la sonda en una solución inyectable de heparina sódica para su uso posterior. Para recoger el HECF de la rata despierta, inserte la sonda de microdiálisis cerebral en el catéter de la sonda y coloque la rata en una cámara con relleno para asegurarse de que las ratas sean libres de moverse.

Encienda el controlador giratorio multicanal para evitar entrelazar las tuberías de microdiálisis durante el movimiento libre de la rata. Luego encienda la bomba de microjeringa y bombee el ACSF a una velocidad de un microlitro por minuto. Después de un equilibrio de 60 minutos del sistema de recolección de HECF de microdiálisis, recolecte HECF periódicamente.

Después de la terminación del muestreo, saque la sonda de microdiálisis cerebral del catéter de la sonda. Sumerja la sonda en agua desionizada y lave con agua desionizada durante 12 horas para eliminar las deposiciones de sal varadas de la tubería y la sonda. Retire la sonda y colóquela en una solución de tripinas al 0,05% a cuatro grados centígrados.

El líquido extracelular del hipocampo adquirido por la técnica de microdiálisis cerebral es similar al agua, incoloro y transparente a la frecuencia de muestreo establecida. Los procedimientos más importantes son implantar la microdiálisis cuidadosamente en la región CA1 e insertar la sonda en el catéter pop. La técnica de microdiálisis simplemente permite ayudar al cambio dinámico de los marcadores de la enfermedad en regiones específicas del cerebro, la sustancia de la eficacia del fármaco y el catabolismo tisular de los componentes del fármaco.