Coleta Dinâmica em Tempo Real de Fluido Extracelular do Hipocampo de Ratos Conscientes Usando um Sistema de Microdiálise

O fluido extracelular hipocampal e a lotação pela técnica de microdiálise cerebral contribuem para monitorar a micro doença específica das doenças do sistema nervoso central. A técnica de microdiálise cerebral alcança a dinâmica e a contínua inquisição de fluido cerebral intersticial em regiões específicas do cérebro de ratos não anestesiados. Comece fixando o rato anestesiado em um localizador cerebral estereotáxico e limpe a área cirúrgica raspada com um cotonete de iodopovidona e etanol três vezes antes da operação.

Em seguida, faça uma incisão cranial facial de 1,5 centímetro até o meio com tesoura cirúrgica e remova o periósteo com tesoura cirúrgica e pinça oftálmica. Considerando o bregma como posição basal, usando uma broca craniana perfura o endocrânio para perfurar uma abertura de dois milímetros na região CA1 do hipocampo. Agora fixe a estileta do cateter na garra de um localizador cerebral estereotáxico e ajuste a posição do invólucro de microdiálise nas posições anteroposterior, médio-lateral e ventral dorsal.

Ajustar a válvula dorsoventral do localizador estéreo cerebral e implantar o invólucro de microdiálise na região CA1 a uma profundidade de 3,5 milímetros. Perfure mais três aberturas com um diâmetro de dois milímetros de tal forma que as três aberturas formem um triângulo no qual a abertura da sonda está localizada centralmente. Parafusos de implante nas aberturas a uma profundidade de um milímetro e fixar o cateter sonda com cimento dental.

Em seguida, use uma sutura cirúrgica de 4-O para fechar a pele. Conecte a microseringa da bomba de microdiálise com o dispositivo de atividade acordada ACSF e o coletor de amostras criogênicas de acordo com as instruções do fabricante. Em seguida, para descarregar o ar na tubulação, ajuste a bomba de microdiálise a uma taxa de um microlitro por minuto.

Em seguida, conecte a tubulação e a sonda de microdiálise cerebral e opere a bomba de microdiálise a uma taxa de um microlitro por minuto para injetar ACSF na sonda até que a superfície da sonda esteja levemente úmida. Imergir a sonda em uma solução de injeção de heparina sódica para uso subsequente. Para coletar o HECF do rato acordado, insira a sonda de microdiálise cerebral no cateter de sonda e coloque o rato em uma câmara com acolchoamento para garantir que os ratos estejam livres para se movimentar.

Ligue o controlador giratório multicanal para evitar o entrelaçamento das tubulações de microdiálise durante o movimento livre do rato. Em seguida, ligue a bomba de microseringa e bombeie o ACSF a uma taxa de um microlitro por minuto. Após um equilíbrio de 60 minutos do sistema de coleta de HECF de microdiálise, coletar o HECF periodicamente.

Após o término da amostragem, retire a sonda de microdiálise cerebral do cateter de sonda. Imergir a sonda em água deionizada e lavar com água deionizada por 12 horas para remover deposições de sal encalhado da tubulação e da sonda. Retire a sonda e coloque-a em uma solução de 0,05% a quatro graus Celsius.

O líquido extracelular hipocampal adquirido pela técnica de microdiálise cerebral é semelhante à água, incolor e transparente na taxa de amostragem definida. Os procedimentos mais importantes são implantar a microdiálise cuidadosamente na região CA1 e inserir a sonda no cateter pop. A técnica de microdiálise simples permite auxiliar a mudança dinâmica de marcadores de doenças em regiões específicas do cérebro, a substância da eficácia da droga e o catabolismo tecidual dos componentes da droga.