linearization-of-the-bradford-protein-assay

Linearization of the Bradford Protein Assay

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

Tel Aviv University

&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-alpha (TNF-&alpha;) &#x7684;&#x4E25;&#x683C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x9884;&#x9632;&#x6162;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x5408;&#x6210;&#x78F7;&#x8102;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7B80;&#x79F0;&#x547D;&#x540D;&#x78F7;&#x9170;&#x80FA;&#x6A21;&#x62DF;-1 (PCERA-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x7BA1;&#x7406;&#x4EE5;&#x524D;&#x627E;&#x6765;&#x6291;&#x5236;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS)-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x542B;&#x91CF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5; PCERA-1 &#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x6297;&#x708E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x80DE;&#x5916; PCERA-1 &#x5148;&#x5929;&#x6291;&#x5236;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; TNF-&alpha; &#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; RAW264.7&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x800C;&#x53C8;&#x4E92;&#x76F8;&#x5F71;&#x54CD;&#x8C03;&#x8282;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x6297;&#x708E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 10 (IL-10)&#x3002;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7531;&#x78F7;&#x8102;&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;-1-&#x78F7;&#x9178; (&#x5206;&#x6237;)&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x9798;&#x6C28;&#x9187; 1-&#x78F7;&#x9178; (S1P) &#x548C;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178; (LPA) &#x6765;&#x6267;&#x884C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; Toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; 4 &#xFF08;TLR4&#xFF09; TLR2 &#x548C; TLR7 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x65F6;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8BF1;&#x5BFC; PCERA-1&#x3002;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x8868;&#x73B0;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; PCERA 1 &#x4E0D;&#x4F1A;&#x963B;&#x6B62;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50; (NF) &#x6FC0;&#x6D3B;-&#x6D3B;&#x5316;&#x548C;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684; LPS&#xFF0C;&#x5B83;&#x63D0;&#x5347;&#x4E86;&#x80DE;&#x5185;&#x8425;&#x4E00;&#x7EA7;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;PCERA-1 &#x7684;&#x6297;&#x708E;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x6700;&#x7EC8;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x6291;&#x5236;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;PCERA-1 &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x53EF;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x624B;&#x6BB5;&#x963B;&#x6B62;&#x708E;&#x75C7;&#x3002;

&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;-1-&#x78F7;&#x9178;&#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;PCERA-1&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x6291;&#x5236;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&alpha; &#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x3002;

Tight regulation of the production of the key pro-inflammatory cytokine tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) is essential for the prevention of chronic inflammatory diseases. In vivo administration of a synthetic phospholipid, named hereafter phospho-ceramide analogue-1 (PCERA-1), was previously found to suppress lipopolysaccharide (LPS)-induced TNF-alpha blood levels. We therefore investigated the in vitro anti-inflammatory effects of PCERA-1. Here, we show that extracellular PCERA-1 potently suppresses production of the pro-inflammatory cytokine TNF-alpha in RAW264.7 macrophages, and in addition, independently and reciprocally regulates the production of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 (IL-10). Specificity is demonstrated by the inability of the phospholipids ceramide-1-phosphate (C1P), sphingosine-1-phosphate (S1P) and lysophosphatidic acid (LPA) to perform these activities. Similar TNF-alpha suppression and IL-10 induction by PCERA-1 were observed in macrophages when activated by Toll-like receptor 4 (TLR4), TLR2 and TLR7 agonists. Regulation of cytokine production is demonstrated at the mRNA and protein levels. Finally, we show that, while PCERA-1 does not block activation of nuclear factor (NF)-kappaB and mitogen-activated protein kinases by LPS, it elevates the intracellular cAMP level. In conclusion, the anti-inflammatory activity of PCERA-1 seems to be mediated by a cell membrane receptor, upstream of cAMP production, and eventually TNF-alpha suppression and IL-10 induction. Thus, identification of the PCERA-1 receptor may provide new pharmacological means to block inflammation.

A ceramide-1-phosphate analogue, PCERA-1, simultaneously suppresses tumour necrosis factor-alpha and induces interleukin-10 production in activated macrophages.

Une r&#xE9;glementation stricte de la production de la cl&#xE9; pro-inflammatoire de n&#xE9;crose tumorale de cytokines facteur-alpha (TNF-alpha) est essentiel pour la pr&#xE9;vention des maladies inflammatoires chroniques. L&#x26;#39;administration in vivo d&#x26;#39;un phospholipide synth&#xE9;tique, d&#xE9;nomm&#xE9;e ci-apr&#xE8;s phospho-c&#xE9;ramide analogique-1 (PPRE-1), a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment trouv&#xE9; pour supprimer le lipopolysaccharide (LPS) induits par les niveaux sanguins de TNF-alpha. Nous avons donc &#xE9;tudi&#xE9; in vitro l&#x26;#39;effet anti-inflammatoire de PPRE-1. Ici, nous montrons que extracellulaire PPRE-1 supprime puissamment la production de la cytokine pro-inflammatoire TNF-alpha dans les macrophages RAW264.7, et en plus, ind&#xE9;pendamment et r&#xE9;ciproquement r&#xE9;gule la production de la cytokine anti-inflammatoire interleukine-10 (IL-10 ). La sp&#xE9;cificit&#xE9; est d&#xE9;montr&#xE9; par l&#x26;#39;incapacit&#xE9; des phospholipides c&#xE9;ramide-1-phosphate (C1P), la sphingosine-1-phosphate (S1P) et l&#x26;#39;acide lysophosphatidique (LPA) pour effectuer ces activit&#xE9;s. Comme le TNF-alpha r&#xE9;pression et l&#x26;#39;IL-10 par l&#x26;#39;induction du PPRE-1 ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es dans les macrophages lorsqu&#x26;#39;ils sont activ&#xE9;s par Toll-like receptor 4 (TLR4), TLR2 et TLR7 agonistes. R&#xE9;gulation de la production de cytokines est d&#xE9;montr&#xE9; dans les niveaux d&#x26;#39;ARNm et de prot&#xE9;ines. Enfin, nous montrons que, tout en PPRE-1 ne bloque pas l&#x26;#39;activation du facteur nucl&#xE9;aire (NF)-kappaB prot&#xE9;ines kinases et activ&#xE9;e par le mitog&#xE8;ne par le LPS, elle &#xE9;l&#xE8;ve le taux d&#x26;#39;AMPc intracellulaire. En conclusion, l&#x26;#39;activit&#xE9; anti-inflammatoire de la PPRE-1 semble &#xEA;tre m&#xE9;di&#xE9;e par un r&#xE9;cepteur membranaire cellulaire, en amont de la production d&#x26;#39;AMPc, et l&#x26;#39;induction &#xE0; terme la suppression du TNF-alpha et IL-10. Ainsi, l&#x26;#39;identification du PPRE-1 r&#xE9;cepteur peut fournir de nouveaux moyens pharmacologiques pour bloquer l&#x26;#39;inflammation.

Un analogique C&#xE9;ramide-1-phosphate, du PPRE-1, supprime m&#xEA;me temps facteur de n&#xE9;crose tumorale-alpha et l&#x26;#39;interleukine-10 induit la production dans les macrophages activ&#xE9;s

Enge Verordnung der Produktion von der wichtigsten Pro-inflammatorische Zytokin Tumor Nekrose Faktor-Alpha (TNF-Alpha) ist entscheidend f&uuml;r die Vermeidung von chronisch entz&uuml;ndlichen Erkrankungen. In-vivo Verwaltung von einer synthetischen Phospholipid, benannt nachstehend Phospho-Ceramid analog-1 (PCERA-1), wurde bereits festgestellt, dass Lipopolysaccharid (LPS) unterdr&uuml;cken-induzierte TNF-Alpha-Blutspiegel. Wir untersuchten deshalb die in-vitro-entz&uuml;ndungshemmenden Wirkungen von PCERA-1. Hier zeigen wir, dass extrazellul&auml;re PCERA-1 stark unterdr&uuml;ckt die Produktion von der Pro-inflammatorische Zytokin TNF-Alpha in RAW264.7 Makrophagen und dar&uuml;ber hinaus, unabh&auml;ngig und gegenseitig die Produktion von entz&uuml;ndungshemmenden Zytokin Interleukin-10 (IL-10 reguliert). Besonderheit zeigt sich durch die Unf&auml;higkeit der Phospholipide Ceramid-1-Phosphat (C1P), Sphingosin-1-Phosphat (S1P) und Lysophosphatidic S&auml;ure (LPA) diese Aktivit&auml;ten durchf&uuml;hren. &Auml;hnliche Unterdr&uuml;ckung von TNF-Alpha und IL-10 Induktion von PCERA-1 wurden in Makrophagen aktiviert durch Toll-Like Receptor 4 (TLR4), TLR2 und TLR7 Agonisten beobachtet. Regulierung der Zytokin-Produktion zeigt sich auf der mRNA und Protein. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass w&auml;hrend PCERA-1 Aktivierung des nuklearen Faktor (NF) nicht blockiert-KappaB und Mitogen-aktivierte Proteinkinasen von LPS, es erh&ouml;ht den intrazellul&auml;ren cAMP-Ebene. Zusammenfassend scheint die entz&uuml;ndungshemmende Aktivit&auml;t des PCERA-1 durch eine Zellmembran-Rezeptor vermittelt upstream cAMP-Produktion, und schlie&szlig;lich Unterdr&uuml;ckung der TNF-Alpha und IL-10 Induktion. Identifizierung von PCERA-1-Rezeptor kann somit neue pharmakologische Mittel, um die Entz&uuml;ndung zu blockieren bieten.

Ein Ceramid-1-Phosphat-Analog, PCERA-1, gleichzeitig unterdr&uuml;ckt die Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha und Interleukin-10 Produktion in aktivierten Makrophagen induziert.

Stretto regolamento della produzione della chiave delle citochine pro-infiammatorie tumore necrosi fattore-alfa (TNF-alfa) &egrave; essenziale per la prevenzione delle malattie infiammatorie croniche. Somministrazione in vivo di un fosfolipide sintetico, in appresso denominato fosfo-ceramide analogico-1 (PCERA-1), &egrave; stato trovato in precedenza per sopprimere il lipopolisaccaride (LPS)-indotta da livelli ematici di TNF-alfa. Abbiamo quindi studiato gli effetti anti-infiammatori in vitro di PCERA-1. Qui, vi mostriamo che extracellulare PCERA-1 sopprime potentemente la produzione delle citochine pro-infiammatorie TNF-alfa nei macrofagi RAW264.7 e in pi&ugrave;, in modo indipendente e mutuamente regola la produzione delle citochine anti-infiammatorie interleukin-10 (IL-10). Specificit&agrave; &egrave; dimostrato dalla incapacit&agrave; di fosfolipidi ceramide-1-fosfato (C1P), sfingosina-1-fosfato (S1P) e acido lysophosphatidic (LPA) per eseguire queste attivit&agrave;. Simile soppressione di TNF-alfa e IL-10 ad induzione da PCERA-1 sono stati osservati nei macrofagi quando attivato dal recettore Toll-like 4 (TLR4), TLR2 e TLR7 agonisti. Regolamento di produzione di cytokine &egrave; dimostrato ai livelli di mRNA e proteine. Infine, ci mostrano che, mentre PCERA-1 non bloccare l&#39;attivazione del fattore nucleare (NF)-kappaB e chinasi mitogene-attivato da LPS, eleva il livello di cAMP intracellulare. In conclusione, l&#39;attivit&agrave; antinfiammatoria di PCERA-1 sembra essere mediata da un recettore di membrana delle cellule, a monte della produzione cAMP e alla fine soppressione di TNF-alfa e IL-10 induzione. Cos&igrave;, identificazione del recettore PCERA-1 pu&ograve; fornire nuovi mezzi farmacologici per bloccare l&#39;infiammazione.

Un analogo ceramide-1-fosfato, PCERA-1, contemporaneamente sopprime fattore-alfa di necrosi del tumore e induce la produzione di interleuchina-10 nei macrofagi attivati.

&#x30AD;&#x30FC;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3B1;&#xFF08;TNF-&#x3B1;&#xFF09;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4EE5;&#x5F8C;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;-&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;-1&#xFF08;PCERA-1&#xFF09;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;in vivo&#x6295;&#x4E0E;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x30EA;&#x30DD;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF08;LPS&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;TNF-&#x3B1;&#x306E;&#x8840;&#x4E2D;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PCERA-1&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x691C;&#x8A0E;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5916;PCERA-1&#x306F;&#x5F37;&#x529B;RAW264.7&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;TNF-&#x3B1;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;10&#xFF08;IL-10&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#xFF09;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;-1  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;C1P&#xFF09;&#x3001;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B4;&#x30B7;&#x30F3;-1  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;S1P&#xFF09;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;LPA&#xFF09;&#x306E;&#x7121;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Toll&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;4&#xFF08;TLR4&#xFF09;&#x3001;TLR2&#x304A;&#x3088;&#x3073;TLR7&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;PCERA-1&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;TNF-&#x3B1;&#x6291;&#x5236;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IL-10&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x3001;mRNA&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PCERA-1&#x306F;LPS&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6838;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#xFF08;NF&#xFF09;-&#x3BA;B&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4E0A;&#x6607;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PCERA-1&#x306E;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;cAMP&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x3067;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x306F;TNF-&#x3B1;&#x6291;&#x5236;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IL-10&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;PCERA-1&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;-1  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;PCERA-1&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x58CA;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50;-&#x3B1;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;10&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;

&#xD0A4; &#xD504;&#xB85C;-&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC778;&#xC790;-&#xC54C;&#xD30C; (TNF-&#xC54C;&#xD30C;) &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xAF49; &#xADDC;&#xC81C; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xC608;&#xBC29;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB984;&#xC774; &#xC778; &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; 1 (PCERA-1) &#xD569;&#xC131; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xAD00;&#xB9AC; lipopolysaccharide (LPS) &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;-TNF-&#xC54C;&#xD30C; &#xD53C; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; PCERA-1 &#xCCB4; &#xC678; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; PCERA 1 potently RAW264.7 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; TNF-&#xC54C;&#xD30C; &#xD504;&#xB85C;-&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C;, &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xD504; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; 10 (IL-10)&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC;-1-&#xC778;&#xC0B0; (C1P)&#xC758; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xB41C;&#xB2E4; sphingosine-1-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; (S1P) &#xBC0F; lysophosphatidic &#xC0B0; (LPA) &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xC218;&#xD589;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; TNF-&#xC54C;&#xD30C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; PCERA-1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; IL-10 &#xC720;&#xB3C4; agonists &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; 4 (TLR4) TLR2 &#xBC0F; tlr7&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Cytokine &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;, &#xD45C;&#xC2DC; PCERA-1 &#xD575; &#xC778;&#xC790; (NF)&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0; &#xB3D9;&#xC548;-Kappab&#xC640; LPS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases &#xB04C;&#xC5B4;&#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCEA0;&#xD504; &#xC218;&#xC900;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, PCERA-1&#xC758; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xAC19;&#xB2E4; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xCEA0;&#xD504; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xAD6D; TNF-&#xC54C;&#xD30C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; IL-10 &#xC720;&#xB3C4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, PCERA-1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC;-1-&#xC778;&#xC0B0; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; PCERA-1, &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; 10 &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

Estricta regulaci&#xF3;n de la producci&#xF3;n de la clave pro-inflamatorias necrosis tumoral citoquinas factor-alfa (TNF-alfa) es esencial para la prevenci&#xF3;n de las enfermedades inflamatorias cr&#xF3;nicas. La administraci&#xF3;n in vivo de un fosfol&#xED;pido sint&#xE9;tico, denominado en lo sucesivo fosfo-ceramida anal&#xF3;gico-1 (PCERA-1), se encontr&#xF3; previamente para suprimir lipopolisac&#xE1;rido (LPS)-inducido por TNF-alfa niveles en sangre. Por ello, investig&#xF3; in vitro, efectos anti-inflamatorios de PCERA-1. Aqu&#xED;, se muestra que extracelular PCERA-1 potentemente suprime la producci&#xF3;n de la citoquina pro-inflamatoria TNF-alfa en RAW264.7 macr&#xF3;fagos, y adem&#xE1;s, de forma independiente y rec&#xED;procamente regula la producci&#xF3;n de la citoquina anti-inflamatoria interleuquina-10 (IL-10 ). La especificidad se demuestra por la incapacidad de los fosfol&#xED;pidos de la ceramida-1-fosfato (C1P), esfingosina-1-fosfato (S1P) y &#xE1;cido lisofosfat&#xED;dico (LPA) para llevar a cabo estas actividades. Similar supresi&#xF3;n de TNF-alfa y IL-10 la inducci&#xF3;n por PCERA-1 se observ&#xF3; en los macr&#xF3;fagos cuando son activados por receptores Toll-like 4 (TLR4), TLR2 y agonistas TLR7. La regulaci&#xF3;n de la producci&#xF3;n de citoquinas se demuestra en los niveles de ARNm y prote&#xED;nas. Por &#xFA;ltimo, nos muestran que, mientras que PCERA-1 no bloquea la activaci&#xF3;n del factor nuclear (NF)-kappaB y de quinasas activadas por mit&#xF3;genos prote&#xED;na-por LPS, se eleva el nivel intracelular de AMPc. En conclusi&#xF3;n, la actividad anti-inflamatoria de PCERA-1 parece estar mediado por un receptor de membrana celular, aguas arriba de la producci&#xF3;n de cAMP, y, finalmente, el TNF-alfa e IL supresi&#xF3;n 10-inducci&#xF3;n. As&#xED;, la identificaci&#xF3;n de la PCERA-1 receptor puede proporcionar nuevos medios farmacol&#xF3;gicos para bloquear la inflamaci&#xF3;n.

Un anal&#xF3;gica ceramida-1-fosfato, PCERA-1, Simult&#xE1;neamente Suprime factor de necrosis tumoral-alfa e induce la producci&#xF3;n de interleucina-10 en macr&#xF3;fagos activados

&#x78F7;&#x9170;&#x80FA;&#x6A21;&#x62DF;-1 (PCERA-1) &#x5DF2;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x6291;&#x5236;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x80BF;&#x7624;&#x574F;&#x6B7B;&#x56E0;&#x5B50; &alpha; (TNFalpha) &#x7684;&#x6700;&#x5F3A;&#x5927;&#x52BF;&#x529B;&#x4EE5;&#x53CA;&#x56E0;&#x6B64;&#x5047;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x708E;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x836F;&#x7269;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F53;&#x5185;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76EE;&#x6807; PCERA-1&#xFF0C;&#x4E0D;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x5176;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5176;&#x4ED6;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A; PCERA 1 &#x6291;&#x5236;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS)-TNFalpha RAW264.7 &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x56E0;&#x6B64;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;PCERA-1 &#x76EE;&#x6807; TNFalpha &#x751F;&#x4EA7;&#x521D;&#x7EA7;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x56E0;&#x6B64;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BF9;&#x5185;&#x6BD2;&#x7D20;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; TNFalpha&#x3001; &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; (IL)-10 &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 p 40&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4F53;&#x5916; PCERA-1 &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; PCERA-1 &#x6291;&#x5236;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; TNFalpha &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 p 40&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7; IL-10&#xFF0C;LPS &#x8D28;&#x7591;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x8179;&#x8154;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x566C; (BMDM) &#x4E0E;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;)-&gamma;&#x3002;PCERA-1 &#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x76F8;&#x4E92;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;PCREA-1 &#x4EC5;&#x7565;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD; TNFalpha &#x751F;&#x4EA7;&#x5168;&#x8840;&#x6D4B;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x51E1; LPS &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E3B;&#x8981;&#x7531;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x79BB;&#x4F53;&#x7684;&#x8840;&#x6DB2;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60F0;&#x6027;&#x5230; PCERA-1&#xFF0C;&#x4F46;&#x6536;&#x8D2D;&#x540E;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x96C6;&#x843D;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50; (M-CSF) PCERA 1 &#x54CD;&#x5E94;-&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x836F;&#x4EE3;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5206;&#x5E03;&#x7684; PCERA-1 &#x97F3;&#x91CF;&#x592A;&#x4F4E;&#xFF0C;&#x800C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x836F;&#x7269;&#x88AB;&#x8FC5;&#x901F;&#x4EA4;&#x6362;&#x8179;&#x819C;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x8840;&#x6DB2;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x540E;&#x7684; PCERA-1 &#x589E;&#x52A0;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x548C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x8179;&#x8154;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6297;&#x708E;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; PCERA-1 &#x673A;&#x68B0;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; PCERA-1 &#x4E0E;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20; E2 (PGE2) &#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x548C;&#x8FD9; PCERA-1 &#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0D;&#x4ECB;&#x5BFC; EP2&#xFF0C;PGE2 &#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x7531;&#x6C27;&#x5316;&#x78F7;&#x8102;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; TNFalpha &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 p 40&#xFF0C;&#x4E0E;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10&#x3001; &#x72EC;&#x7ACB;&#x548C;&#x76F8;&#x4E92;&#x8C03;&#x5236;&#x8868;&#x660E; PCERA 1 &#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x708E;&#x75C7;&#x76F8;&#x5173;&#x75BE;&#x75C5;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x836F;&#x7269;&#x3002;

TNFalpha&#x3001; &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10&#x3001; &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-12 p 40 &#x6C34;&#x5E73;&#x7531;&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;-1-&#x78F7;&#x9178;&#x6A21;&#x62DF;&#x8C03;&#x5236;&#x3001; PCERA-1&#x3001; &#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4E8B;&#x540E;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

Phospho-ceramide analog-1 (PCERA-1) has been described as a potent in vivo suppressor of the pro-inflammatory cytokine tumor necrosis factor alpha (TNFalpha), and thus as a putative drug for the treatment of inflammatory diseases. However, the in vivo cell target of PCERA-1 has not been identified, and its in vivo effect on secretion of other relevant cytokines has not been reported. We have previously shown that PCERA-1 suppresses lipopolysaccharide (LPS)-induced TNFalpha production in RAW264.7 macrophages in vitro. We therefore hypothesized that PCERA-1 targets TNFalpha production by primary macrophages. In this study we thus investigated the effect of PCERA-1 on LPS-induced release of TNFalpha, interleukin (IL)-10 and IL-12p40, in vivo, and ex vivo. We found that PCERA-1 suppressed production of the pro-inflammatory cytokines, TNFalpha and IL-12p40, and increased production of the anti-inflammatory cytokine, IL-10, in LPS-challenged mice, and in primary peritoneal macrophages as well as bone marrow-derived macrophages (BMDM) stimulated with LPS and interferon (IFN)-gamma. These activities of PCERA-1 were independent of each other. In contrast, PCREA-1 only slightly affected TNFalpha production in the whole blood assay, where LPS-induced cytokines are mainly produced by monocytes. Moreover, isolated blood monocytes were inert to PCERA-1, but acquired responsiveness to PCERA-1 upon macrophage colony stimulating factor (M-CSF)-induced differentiation into macrophages. Pharmacokinetic analysis in mice showed that while the volume of distribution of PCERA-1 is low, the drug was rapidly exchanged between the peritoneum and the systemic circulation. Together, these results suggest that sensitivity to PCERA-1 increases upon differentiation of blood monocytes into tissue macrophages, and imply a mechanistic role for peritoneal macrophages in the in vivo anti-inflammatory activity of PCERA-1. Finally, we show that the mechanism of activity of PCERA-1 and prostaglandin E2 (PGE2) is distinct, and that PCERA-1 signaling is not mediated by EP2, a PGE2 receptor which is also activated by oxidized phospholipids. The independent and reciprocal modulation of production of TNFalpha and IL-12p40, vs. IL-10, suggests that PCERA-1 may be a candidate drug for the treatment of inflammation-linked diseases.

Modulation of TNFalpha, IL-10 and IL-12p40 levels by a ceramide-1-phosphate analog, PCERA-1, in vivo and ex vivo in primary macrophages.

Phospho-c&#xE9;ramide analogique-1 (PPRE-1) a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crit comme un puissant suppresseur de in vivo de la cytokine pro-inflammatoire des tumeurs alpha du facteur de n&#xE9;crose (TNF), et donc comme un m&#xE9;dicament putatif pour le traitement des maladies inflammatoires. Toutefois, la cellule cible en vivo de PPRE-1 n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;, et son effet in vivo sur la s&#xE9;cr&#xE9;tion d&#x26;#39;autres cytokines pertinentes n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9;e. Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que PPRE-1 supprime le lipopolysaccharide (LPS) induite par le TNFalpha dans la production RAW264.7 macrophages in vitro. Nous avons donc &#xE9;mis l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que PPRE-1 objectifs de production de TNF-alpha par les macrophages primaires. Dans cette &#xE9;tude nous avons donc &#xE9;tudi&#xE9; l&#x26;#39;effet de PPRE-1 induite par le LPS sur la lib&#xE9;ration de TNF-alpha, l&#x26;#39;interleukine (IL) -10 et de l&#x26;#39;IL-12p40, in vivo, et ex vivo. Nous avons constat&#xE9; que PPRE-1 supprim&#xE9; la production des cytokines pro-inflammatoires, TNF et IL-12p40, et augmentation de la production de la cytokine anti-inflammatoire, l&#x26;#39;IL-10, en LPS-souris stimul&#xE9;es, et dans l&#x26;#39;enseignement primaire des macrophages p&#xE9;riton&#xE9;aux ainsi que l&#x26;#39;os macrophages d&#xE9;riv&#xE9;s de la moelle (BMDM) stimul&#xE9;es avec du LPS et de l&#x26;#39;interf&#xE9;ron (IFN)-gamma. Ces activit&#xE9;s de PPRE-1 &#xE9;taient ind&#xE9;pendants les uns des autres. En revanche, PCREA-1 que l&#xE9;g&#xE8;rement affect&#xE9; la production de TNF-alpha dans le dosage sanguin de l&#x26;#39;ensemble, o&#xF9; induite par le LPS cytokines sont surtout produites par les monocytes. En outre, les monocytes sanguins isol&#xE9;s &#xE9;taient inertes &#xE0; PPRE-1, mais a acquis la r&#xE9;activit&#xE9; aux PPRE-1 sur le facteur stimulant colonie granulocyte macrophage (M-CSF) induite par la diff&#xE9;renciation en macrophages. L&#x26;#39;analyse pharmacocin&#xE9;tique chez la souris ont montr&#xE9; que tandis que le volume de distribution de PPRE-1 est faible, le m&#xE9;dicament a &#xE9;t&#xE9; rapidement &#xE9;chang&#xE9; entre le p&#xE9;ritoine et la circulation syst&#xE9;mique. Ensemble, ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la sensibilit&#xE9; &#xE0; PPRE-1 augmente lors de la diff&#xE9;renciation de monocytes sanguins dans les macrophages tissulaires, et impliquent un r&#xF4;le m&#xE9;canique pour les macrophages p&#xE9;riton&#xE9;aux de l&#x26;#39;in vivo l&#x26;#39;activit&#xE9; anti-inflammatoire des PPRE-1. Enfin, nous montrons que le m&#xE9;canisme de l&#x26;#39;activit&#xE9; des PPRE-1 et la prostaglandine E2 (PGE2) est distincte, et que PPRE-1 de signalisation n&#x26;#39;est pas m&#xE9;di&#xE9;e par EP2, un r&#xE9;cepteur de PGE2 qui est &#xE9;galement activ&#xE9;e par des phospholipides oxyd&#xE9;s. La modulation ind&#xE9;pendante et r&#xE9;ciproque de la production de TNF-alpha et IL-12p40, l&#x26;#39;IL-10 vs, sugg&#xE8;re que PPRE-1 peut &#xEA;tre un candidat-m&#xE9;dicament pour le traitement de l&#x26;#39;inflammation des maladies li&#xE9;es &#xE0;.

Modulation du TNFalpha, IL-10 et IL-12p40 niveaux par un analogue de c&#xE9;ramide-1-phosphate, du PPRE-1, in vivo et ex vivo dans les macrophages primaires

Phospho-Ceramid Analog-1 (PCERA-1) wurde beschrieben als ein potenter in Vivo Entst&ouml;rer der Pro-inflammatorische Zytokin Tumornekrosefaktor Alpha (TNFalpha), und damit als vermeintliche Medikament zur Behandlung von entz&uuml;ndlichen Erkrankungen. Jedoch in-vivo Zelle vorbei PCERA-1 wurde nicht erkannt, und seine in-vivo Wirkung auf die Sekretion von anderen relevanten Zytokine wurde nicht berichtet. Wir haben bereits gezeigt, dass PCERA-1 Lipopolysaccharid (LPS) unterdr&uuml;ckt-induzierte TNFalpha-Produktion in in-vitro-RAW264.7 Makrophagen. Wir daher die Hypothese, dass PCERA-1-Ziele-TNFalpha-Produktion von prim&auml;ren Makrophagen. In dieser Studie untersuchten wir somit die Wirkung der PCERA-1 auf LPS-induzierte Freisetzung von TNFalpha, Interleukin (IL) -10 und IL - 12 p 40, in vivo und ex Vivo. Wir fanden, dass PCERA-1 Produktion der Pro-inflammatorische Zytokine, TNFalpha und IL - 12 p 40 und erh&ouml;hte Produktion von der Anti-inflammatory Cytokine unterdr&uuml;ckt IL-10, LPS gehandicapte M&auml;usen und in prim&auml;ren peritonealen Makrophagen sowie Knochenmark abgeleiteten Makrophagen (BMDM) stimuliert mit LPS und Interferon (IFN)-Gamma. Diese T&auml;tigkeit der PCERA-1 wurden unabh&auml;ngig voneinander. PCREA-1 betroffen dagegen nur leicht TNFalpha-Produktion in der Vollblut-Assay, in denen LPS-induzierte Zytokine vor allem von Monozyten hergestellt werden. Dar&uuml;ber hinaus isoliert Blut Monozyten wurden inert bis PCERA-1, sondern erwarb Reaktionsf&auml;higkeit zu PCERA-1 auf Makrophagen-Kolonie-anregende Faktor (M-CSF)-induzierte Differenzierung in Makrophagen. Pharmakokinetischen Analyse an M&auml;usen zeigten, dass w&auml;hrend das Volumen der Verteilung von PCERA-1 niedrig ist, das Medikament rasch zwischen Peritoneum und den K&ouml;rperkreislauf ausgetauscht wurde. Diese Ergebnisse zusammen, schlagen die Empfindlichkeit gegen&uuml;ber PCERA-1 erh&ouml;ht nach Differenzierung des Blut-Monozyten in Gewebe Makrophagen und implizieren eine mechanistische Rolle f&uuml;r peritonealen Makrophagen in der in-vivo entz&uuml;ndungshemmende Aktivit&auml;t des PCERA-1. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass der Mechanismus der Aktivit&auml;t des PCERA-1 und Prostaglandin E2 (PGE2) unterscheidet, und dieser PCERA-1-Signalisierung von EP2, ein PGE2-Rezeptor, der auch durch oxidierte Phospholipide aktiviert wird nicht vermittelt wird. Die unabh&auml;ngige und gegenseitige Beeinflussung der Produktion von TNFalpha und IL - 12 p 40, vs. IL-10, legt nahe, dass PCERA-1 ein Kandidat-Medikament zur Behandlung von Krankheiten mit Entz&uuml;ndung verbunden sein kann.

TNFalpha, IL-10 und IL - 12 p 40-Level durch ein Ceramid-1-Phosphat-Analog-Modulation, PCERA-1, in Vivo und Ex Vivo in prim&auml;ren Makrophagen.

Fosfo-ceramide analogico-1 (PCERA-1) &egrave; stato descritto come un potente in vivo soppressore di citochine pro-infiammatorie fattore di necrosi tumorale alfa (TNFalpha) e cos&igrave; come un farmaco putativo per il trattamento delle malattie infiammatorie. Tuttavia, non &egrave; stato identificato il bersaglio cellulare in vivo di PCERA-1, e l&#39;effetto in vivo sulla secrezione di altre citochine pertinente non &egrave; stata segnalata. Abbiamo precedentemente dimostrato che PCERA-1 sopprime lipopolisaccaride (LPS)-indotta da TNFalpha produzione in macrofagi RAW264.7 in vitro. Abbiamo quindi ipotizzato che produzione di TNFalpha obiettivi PCERA-1 dai macrofagi primari. In questo studio abbiamo quindi studiato l&#39;effetto di PCERA-1 sul rilascio di LPS-indotta di TNFalpha, interleuchina (IL) -10 e IL-12 p 40, in vivo ed ex vivo. Abbiamo trovato che PCERA-1 soppressa produzione di citochine pro-infiammatorie, TNFalpha e IL-12 p 40 e aumento della produzione di citochine anti-infiammatorie, IL-10, nei topi LPS-sfidati e nei macrofagi peritoneali primarie cos&igrave; come derivate da midollo osseo macrofagi (BMDM) stimolate con LPS e interferone (IFN)-gamma. Queste attivit&agrave; di PCERA-1 erano indipendenti uno da altro. Al contrario, PCREA-1 solo leggermente influenzato TNFalpha produzione nel dosaggio sangue intero, dove citochine indotta da LPS sono principalmente prodotte dai monociti. Inoltre, isolato sangue monociti erano inerti a PCERA-1, ma acquisita reattivit&agrave; a PCERA-1 sulla colonia di macrofagi (M-CSF) fattore stimolante-indotto differenziazione in macrofagi. Analisi farmacocinetica nei topi hanno mostrato che mentre il volume di distribuzione di PCERA-1 &egrave; basso, il farmaco &egrave; stato scambiato rapidamente tra il peritoneo e la circolazione sistemica. Insieme, questi risultati suggeriscono che sensibilit&agrave; agli aumenti di PCERA-1 sulla differenziazione dei monociti del sangue in macrofagi dei tessuti e implicano un ruolo meccanicistico per macrofagi peritoneali nell&#39;attivit&agrave; anti-infiammatori in vivo di PCERA-1. Infine, ci mostrano che il meccanismo dell&#39;attivit&agrave; di PCERA-1 e di prostaglandina E2 (PGE2) si &egrave; distinto, e che PCERA-1 segnalazione non &egrave; mediato da EP2, un recettore di PGE2 che viene attivato anche da fosfolipidi ossidati. La modulazione reciproca e indipendente della produzione di TNFalpha e IL-12 p 40, contro IL-10, suggerisce che PCERA-1 pu&ograve; essere un farmaco candidato per il trattamento di malattie legate a infiammazione.

La modulazione dei livelli p 40 TNFalpha, IL-10 e IL-12 da un analog ceramide-1-fosfato, PCERA-1, in vivo ed ex vivo in macrofagi primari.

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TNF&#x3B1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IL-12p40&#x3001;&#x5BFE;IL-10&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x76F8;&#x4E92;&#x5909;&#x8ABF;PCERA-1&#x306F;&#x708E;&#x75C7;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x5019;&#x88DC;&#x85AC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

TNF&#x3B1;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3001;IL-10&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;in vivo&#x304A;&#x3088;&#x3073;ex vivo&#x3067;&#x306E;&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;-1  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;PCERA-1&#x306B;&#x3088;&#x308B;IL-12p40&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;

&#xC778; &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; 1 (PCERA-1) &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC9C8;&#xD658;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD558; &#xACE0; &#xD504;&#xB85C;-&#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine &#xC885;&#xC591; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC694;&#xC778; &#xC54C;&#xD30C; (TNFalpha)&#xC758; &#xBE44;&#xBCF4; &#xC5B5;&#xC555;&#xC5D0; &#xC801; &#xC815;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, PCERA 1 in vivo &#xC140; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;, &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD00;&#xB828; cytokines&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; PCERA 1 lipopolysaccharide (LPS) &#xC5B5;&#xC81C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;-RAW264.7 &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; TNFalpha &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC8FC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8; PCERA-1 &#xB300;&#xC0C1; TNFalpha &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC124;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; LPS &#xC720;&#xBC1C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; TNFalpha, &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; (IL)-10&#xACFC; IL-12 p 40, vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo ex PCERA-1&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. PCERA-1 &#xD504;&#xB85C; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokines, TNFalpha &#xBC0F; IL-12 40 p &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; IL-10, LPS &#xB3C4;&#xC804; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBCF5; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xACE8; &#xC218; &#xC720;&#xB798; &#xC138;&#xD3EC; (BMDM) &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN)&#xC640; LPS &#xC790;&#xADF9;&#xB41C;-&#xAC10;&#xB9C8;. PCERA-1&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC11C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xBC18;&#xBA74;, PCREA-1 &#xC57D;&#xAC04; TNFalpha &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; LPS &#xC720;&#xBC1C; cytokines monocytes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC740; &#xC804;&#xCCB4; &#xD608;&#xC561; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC808;&#xC5F0;&#xB41C; &#xD53C; monocytes PCERA-1, &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xC790;&#xADF9; &#xC778;&#xC790; (M-CSF)&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; PCERA-1 &#xC751;&#xB2F5; &#xC778;&#xC218;-&#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950; pharmacokinetic &#xBD84;&#xC11D; PCERA 1&#xC758; &#xC720;&#xD1B5; &#xB7C9;&#xC774; &#xC801;&#xC740;, &#xC57D;&#xC740; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD50;&#xD658; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC21C;&#xD658; &#xBCF5; &#xB9C9; &#xC0AC;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC870;&#xC9C1; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0; monocytes&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; PCERA 1 &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xAC10;&#xB3C4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5; &#xB300; &#xC2DD; PCERA-1&#xC758; in vivo &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC758;&#xBBF8; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9; PCERA-1&#xC640; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; E2 (PGE2)&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0; EP2, &#xB610;&#xD55C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xB294; PGE2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xADF8; PCERA-1 &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. TNFalpha &#xBC0F; IL-12 40 p IL-10 &#xB300;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870; PCERA 1 &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC;-1-&#xC778;&#xC0B0; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; TNFalpha, IL-10&#xACFC; IL-12 p 40 &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;, &#xC8FC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xBCF4;&#xC640; ex vivo&#xC5D0;&#xC11C; PCERA-1.

Fosfo-ceramida anal&#xF3;gico-1 (PCERA-1) ha sido descrito como un potente supresor en vivo de la citoquina pro-inflamatoria factor de necrosis tumoral alfa (TNF), y por lo tanto como un f&#xE1;rmaco putativo para el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Sin embargo, el objetivo en c&#xE9;lulas in vivo de PCERA-1 no ha sido identificado, y su efecto in vivo sobre la secreci&#xF3;n de otras citoquinas pertinentes no ha sido reportado. Hemos demostrado anteriormente que PCERA-1 suprime lipopolisac&#xE1;rido (LPS) inducida por la producci&#xF3;n de TNF en RAW264.7 macr&#xF3;fagos in vitro. Por lo tanto, la hip&#xF3;tesis de que PCERA-1 objetivos producci&#xF3;n TNF por los macr&#xF3;fagos primarios. En este estudio se investig&#xF3; el efecto tanto de PCERA-1 sobre LPS-inducida por la liberaci&#xF3;n de TNF, interleucina (IL) -10 e IL-12p40, in vivo, y ex vivo. Hemos encontrado que PCERA-1 suprime la producci&#xF3;n de las citocinas pro-inflamatorias, TNFalfa e IL-12p40, y el aumento de producci&#xF3;n de la citoquina anti-inflamatoria, la IL-10, en LPS-impugnadas ratones, y en macr&#xF3;fagos peritoneales primarios, as&#xED; como hueso macr&#xF3;fagos derivados de m&#xE9;dula (BMDM) estimuladas con LPS e interfer&#xF3;n (IFN)-gamma. Estas actividades de PCERA-1 eran independientes uno de otro. Por el contrario, PCREA-1 s&#xF3;lo ligeramente afectado la producci&#xF3;n de TNF en el ensayo de sangre entera, donde LPS-inducida por las citoquinas son producidas principalmente por los monocitos. Adem&#xE1;s, los monocitos aislados de sangre eran inertes a PCERA-1, pero adquirido la capacidad de respuesta a PCERA-1 sobre el factor estimulante de colonias de macr&#xF3;fagos (M-CSF)-diferenciaci&#xF3;n inducida en macr&#xF3;fagos. El an&#xE1;lisis farmacocin&#xE9;tico en ratones mostraron que mientras que el volumen de distribuci&#xF3;n de PCERA-1 es baja, la droga fue intercambiar r&#xE1;pidamente entre el peritoneo y la circulaci&#xF3;n sist&#xE9;mica. En conjunto, estos resultados sugieren que la sensibilidad a PCERA-1 aumenta la diferenciaci&#xF3;n de los monocitos de la sangre en los macr&#xF3;fagos del tejido, e implican una funci&#xF3;n mec&#xE1;nica de los macr&#xF3;fagos peritoneales en el in vivo la actividad antiinflamatoria de los PCERA-1. Por &#xFA;ltimo, se demuestra que el mecanismo de la actividad de PCERA-1 y la prostaglandina E2 (PGE2) es distinto, y que PCERA-1 de se&#xF1;alizaci&#xF3;n no est&#xE1; mediada por EP2, un receptor de PGE2, que tambi&#xE9;n es activado por fosfol&#xED;pidos oxidados. La modulaci&#xF3;n independiente y rec&#xED;proca de la producci&#xF3;n de TNF e IL-12p40, vs IL-10, sugiere que PCERA-1 puede ser un f&#xE1;rmaco candidato para el tratamiento de la inflamaci&#xF3;n-enlazadas enfermedades.

La modulaci&#xF3;n de TNF, IL-10 e IL-12p40 Niveles por una anal&#xF3;gica ceramida-1-fosfato, PCERA-1, en vivo y ex vivo en macr&#xF3;fagos primarios

&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; IL-10 &#x53EF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x5355;&#x53CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x5982;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS)&#xFF0C;&#x6216;&#x901A;&#x8FC7;&#x5404;&#x79CD;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x901A;&#x8FC7;&#x8425;&#x76F8;&#x5173;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x884C;&#x4E8B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x66FE;&#x62A5;&#x9053;&#x5408;&#x6210;&#x78F7;&#x9170;&#x80FA;&#x6A21;&#x62DF;-1 (PCERA-1) &#x589E;&#x52A0; cAMP &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x5411;&#x4E0B;&#x8C03;&#x8282;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; TNFalpha &#x548C;&#x5411;&#x4E0A;&#x8C03;&#x8282;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; PCERA-1 &#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x8425;&#x5728;&#x5185;&#x6BD2;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A; PCERA-1 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x589E;&#x6548;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x5355;&#x53CD;&#x5C0F;&#x9F20; RAW264.7 &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x3002;&#x4F9D;&#x4ECE;&#x663E;&#x7136; mRNA &#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x4E00;&#x7EA7;&#x3002;IL-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x7531; LPS &#x548C; PCERA-1 &#x662F;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;p38 MAP &#x6FC0;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x3002;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x548C; PCERA-1 &#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x8425;&#x5730;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5242;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; p38 &#x7684;&#x5408;&#x4F5C;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;PCERA-1 &#x6D3B;&#x6027;&#x53EF;&#x4EE5;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x6A21;&#x62DF;&#x6A21;&#x4EFF;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x6291;&#x5236;&#x5242; H89 &#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; PCERA-1 &#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;LPS &#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x57FA;&#x5E95;&#x8425;&#x7EA7;&#x522B;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x63D0;&#x5347;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176; (PDE) &#x6291;&#x5236;&#x5242;-4 &#x54AF;&#x5229;&#x666E;&#x5170;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8BF1;&#x5BFC; LPS &#x5371;&#x91CD;&#x53D6;&#x51B3;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x8425;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x548C; co-stimulus &#x7684;&#x5355;&#x53CD;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x548C;&#x8425;&#x63D0;&#x5347;&#x4EE3;&#x7406;&#x7ED3;&#x679C;&#x534F;&#x540C; PKA &#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x4F9D;&#x8D56; p38 &#x7684; IL-10 &#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x3002;

IL-10 &#x534F;&#x540C;&#x8BF1;&#x5BFC; LPS &#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;-1-&#x78F7;&#x9178;&#x6A21;&#x62DF; PCERA-1 &#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8425;&#x5730;&#x548C; p38 &#x5730;&#x56FE;&#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;

Expression of the anti-inflammatory cytokine IL-10 can be induced either by TLR agonists such as lipopolysaccharide (LPS), or by various endogenous stimuli, in particular those acting via a cAMP-dependent signaling pathway. We have previously reported that the synthetic phospho-ceramide analogue-1 (PCERA-1) increases cAMP level and subsequently down-regulates production of TNFalpha and up-regulates production of IL-10 in LPS-stimulated macrophages. The objective of this study was to determine the mechanism of activity of PCERA-1 and the role of cAMP in LPS-induced IL-10 production. We show here that PCERA-1 induces IL-10 production in synergism with various TLR agonists in mouse RAW264.7 macrophages. Cooperativity is evident both at the mRNA and protein levels. IL-10 production by LPS and PCERA-1 is mediated by the cAMP pathway and by the p38 MAP kinase. Phosphorylation of p38 is cooperatively accomplished by LPS and PCERA-1 or other cAMP inducers. Furthermore, the activity of PCERA-1 can be partially mimicked by a cell-permeable analog of cAMP, and blocked by the protein kinase A (PKA) inhibitor H89. Finally, in the absence of PCERA-1, the residual IL-10 induction by LPS depends on the basal cAMP level as it can be largely elevated by the phosphodiesterase (PDE)-4 inhibitor rolipram. Our results thus indicate that IL-10 induction by LPS critically depends on basal cAMP level, and that a co-stimulus by a TLR agonist and a cAMP-elevating agent results in synergistic PKA-dependent and p38-dependent IL-10 production.

Synergistic IL-10 induction by LPS and the ceramide-1-phosphate analog PCERA-1 is mediated by the cAMP and p38 MAP kinase pathways.

Expression de l&#x26;#39;anti-inflammatoire cytokine IL-10 peut &#xEA;tre induite soit par des agonistes TLR comme lipopolysaccharide (LPS), ou par diff&#xE9;rents stimuli endog&#xE8;nes, en particulier ceux qui agissent par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;une voie de signalisation AMPc-d&#xE9;pendante. Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment rapport&#xE9; que le synth&#xE9;tique phospho-c&#xE9;ramide analogique-1 (PPRE-1) augmente le niveau d&#x26;#39;AMPc et par la suite r&#xE9;gule &#xE0; la baisse la production de TNF-alpha et la mise r&#xE9;gule la production d&#x26;#39;IL-10 dans LPS-macrophages stimul&#xE9;s. L&#x26;#39;objectif de cette &#xE9;tude &#xE9;tait de d&#xE9;terminer le m&#xE9;canisme de l&#x26;#39;activit&#xE9; des PPRE-1 et le r&#xF4;le de l&#x26;#39;AMPc induite par le LPS dans IL-10. Nous montrons ici que PPRE-1 induit la production d&#x26;#39;IL-10 en synergie avec des agonistes TLR diff&#xE9;rents souris RAW264.7 macrophages. La coop&#xE9;rativit&#xE9; est &#xE9;vident &#xE0; la fois aux niveaux d&#x26;#39;ARNm et de prot&#xE9;ines. IL-10 par le LPS et PPRE-1 est m&#xE9;di&#xE9;e par la voie de l&#x26;#39;AMPc et par la kinase MAP p38. La phosphorylation de la p38 est accompli en collaboration par le LPS et PPRE-1 ou d&#x26;#39;inducteurs autre camp. En outre, l&#x26;#39;activit&#xE9; de PPRE-1 peut &#xEA;tre partiellement imit&#xE9;e par un analogue de la cellule-perm&#xE9;able de l&#x26;#39;AMPc, et bloqu&#xE9;e par la prot&#xE9;ine kinase A de la s&#xE9;rotonine (PKA) H89. Enfin, en l&#x26;#39;absence de PPRE-1, l&#x26;#39;IL-10 r&#xE9;siduelle d&#x26;#39;induction par le LPS d&#xE9;pend du niveau d&#x26;#39;AMPc basale, car il peut &#xEA;tre en grande partie &#xE9;lev&#xE9; par la phosphodiest&#xE9;rase (PDE) rolipram inhibiteur de -4. Nos r&#xE9;sultats indiquent que l&#x26;#39;IL-10 par induction par le LPS d&#xE9;pend essentiellement de niveau cAMP basale, et que le co-stimulation par un agoniste RLC et un agent de r&#xE9;sultats AMPc-&#xE9;l&#xE9;vatrices dans synergique PKA-d&#xE9;pendante et p38-d&#xE9;pendante d&#x26;#39;IL-10.

IL-10 synergique induction par le LPS et le c&#xE9;ramide-1-phosphate analogique PPRE-1 est m&#xE9;di&#xE9;e par le camp et voies de p38 MAP kinase

Ausdruck der Anti-inflammatory Cytokine IL-10 l&auml;sst induzierte TLR Agonisten wie Lipopolysaccharid (LPS), oder durch verschiedene endogene Reize, insbesondere diejenigen, die &uuml;ber ein Lager-abh&auml;ngigen Signalweg. Wir haben bereits berichtet, dass die synthetischen Phospho-Ceramid analog-1 (PCERA-1) cAMP erh&ouml;ht und anschlie&szlig;end nach unten-TNFalpha reguliert und oben-die Produktion von IL-10 in LPS stimuliert Makrophagen reguliert. Das Ziel dieser Studie war den Mechanismus der Aktivit&auml;t des PCERA-1 und die Rolle des Lagers in LPS-induzierte IL-10 Produktion festzustellen. Hier zeigen wir, dass PCERA-1, IL-10 Produktion in Synergismus mit verschiedenen TLR Agonisten in Maus RAW264.7 Makrophagen induziert. Kooperativit&auml;t ist offensichtlich auf der mRNA und Protein. IL-10 Produktion von LPS und PCERA-1 ist durch das cAMP Weg und die p38 MAP Kinase vermittelt. Phosphorylierung von p38 erfolgt kooperativ durch LPS und PCERA-1 oder anderen cAMP Induktoren. Dar&uuml;ber hinaus kann die Aktivit&auml;t des PCERA-1 teilweise nachgeahmt durch eine Zelle-durchl&auml;ssigen Analog des Lagers und der Protein-Kinase A (PKA) Hemmer H89 geblockt. Schlie&szlig;lich h&auml;ngt keine PCERA-1, die verbleibende IL-10-Induktion von LPS die basale cAMP-Ebene wie es weitgehend mit der Phosphodiesterase (PDE)-4-Hemmer Rolipram angehoben werden. Unsere Ergebnisse zeigen somit, dass IL-10 Induktion von LPS kritisch basale cAMP Ebene abh&auml;ngt und eine Co-stimulus durch eine TLR-Agonist und ein Lager-erhebend-Agent synergistische PKA-abh&auml;ngige und p38-abh&auml;ngige IL-10-Produktion f&uuml;hrt.

Synergistische IL-10 Induktion von LPS und die analoge Ceramid-1-Phosphat-PCERA-1 ist durch das cAMP und p38 MAP Kinase Wege vermittelt.

Espressione del cytokine anti-infiammatorie che il-10 pu&ograve; essere indotta da agonisti TLR come il lipopolisaccaride (LPS), o da vari stimoli endogeni, in particolare quelli che agiscono attraverso una via di segnalazione cAMP-dipendente. In precedenza abbiamo segnalato che il sintetico fosfo-ceramide analogico-1 (PCERA-1) aumenta il livello di campo e successivamente gi&ugrave;-regola la produzione di TNFalpha e up-regola la produzione di IL-10 in macrofagi LPS-stimolata. L&#39;obiettivo di questo studio era di determinare il meccanismo dell&#39;attivit&agrave; di PCERA-1 e il ruolo dell&#39;accampamento nella produzione di IL-10 LPS-indotta. Mostriamo qui che PCERA-1 induce la produzione di IL-10 in sinergia con vari agonisti TLR in macrofagi RAW264.7 del mouse. Cooperativit&agrave; &egrave; evidente sia ai livelli di mRNA e proteine. Produzione del-10 da LPS e PCERA-1 &egrave; mediata da via del campo e la chinasi mappa p38. Fosforilazione di p38 cooperativamente &egrave; compiuta da LPS e PCERA-1 o altri induttori cAMP. Inoltre, l&#39;attivit&agrave; di PCERA-1 pu&ograve; essere parzialmente imitato da una cellula permeabile analog dell&#39;accampamento e bloccato dall&#39;inibitore della proteina chinasi A (PKA) H89. Infine, in assenza di PCERA-1, l&#39;induzione residua di IL-10 da LPS dipende il livello basale di cAMP come pu&ograve; essere elevata in gran parte dal rolipram-4 inibitore della fosfodiesterasi (PDE). Cos&igrave; i nostri risultati indicano che IL-10 ad induzione da LPS dipende criticamente livello basale di campo, e che un co-stimulus da un agonista TLR e un agente cAMP-elevando risultati in sinergica PKA-dipendente e p38-dipendente la produzione di IL-10.

Induzione di IL-10 sinergica di LPS e il ceramide-1-fosfato analogico PCERA-1 &egrave; mediata dai percorsi di chinasi cAMP e p38 mappa.

&#x6297;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;IL-10&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DD;&#x591A;&#x7CD6;&#xFF08;LPS&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;TLR&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;cAMP&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x6F14;&#x6280;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;-1&#xFF08;PCERA-1&#xFF09;&#x306F;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x4E0B;&#x65B9;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;LPS&#x523A;&#x6FC0;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IL-10&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;PCERA-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;LPS&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;IL-10&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;cAMP&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PCERA-1&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;RAW264.7&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;TLR&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;IL-10&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5354;&#x540C;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;mRNA&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; LPS&#x3068;PCERA-1&#x306B;&#x3088;&#x308B;IL-10&#x7523;&#x751F;&#x306F;&#x3001;cAMP&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x3088;&#x3073;p38 MAP&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; p38&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x5354;&#x529B;&#x3057;&#x3066;LPS&#x3068;PCERA-1&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;cAMP&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PCERA-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;cAMP&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3067;&#x6A21;&#x5023;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;A&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;H89&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;PCERA-1&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;LPS&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6B8B;&#x7559;IL-10&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x4E3B;&#x306B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PDE&#xFF09;-4&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30ED;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4E0A;&#x6607;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x57FA;&#x790E;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;LPS&#x306B;&#x3088;&#x308B;IL-10&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x57FA;&#x790E;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;TLR&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5171;&#x540C;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E57;PKA&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;p38&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;IL-10&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;cAMP&#x4E0A;&#x6607;&#x5264;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x306A;IL-10 LPS&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3068;&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;-1  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;PCERA-1&#x306F;&#x3001;cAMP&#x304A;&#x3088;&#x3073;p38 MAP&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;

IL-10 &#xC218; &#xD56D; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; TLR agonists lipopolysaccharide (LPS) &#xB4F1; &#xB610;&#xB294; &#xD2B9;&#xD788;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD; &#xC790;&#xADF9; &#xCEA0;&#xD504; &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD589;&#xB3D9; &#xB4E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xC131; &#xC778; &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; 1 (PCERA-1) &#xCEA0;&#xD504; &#xB808;&#xBCA8; &#xC99D;&#xAC00;, &#xC774;&#xD6C4; &#xB2E4;&#xC6B4; Tnfalpha&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xC744; &#xCD5C;&#xB300; LPS &#xC790;&#xADF9; &#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; IL-10&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC870;&#xC808;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740; PCERA 1 &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; LPS &#xC720;&#xBC1C; IL-10 &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; PCERA 1 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; RAW264.7 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; TLR agonists &#xC131;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; IL-10 &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. Cooperativity&#xC740; &#xBD84;&#xBA85; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB450;. LPS&#xC640; PCERA-1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; IL-10 &#xC0DD;&#xC0B0; &#xCEA0;&#xD504; &#xD1B5;&#xB85C; &#xBC0F; p38 &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. P38&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD611;&#xB825; LPS&#xC640; PCERA 1 &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xCEA0;&#xD504; inducers&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, PCERA-1 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC218; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xC0AC; &#xC788;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA) &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; h89&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, PCERA-1&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;, LPS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC794;&#xB958; IL-10 &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAE30;&#xC800; &#xCEA0;&#xD504; &#xB808;&#xBCA8; &#xD3EC;&#xC2A4; (PDE)-4 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; rolipram&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB192;&#xC740; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; IL-10 &#xC720;&#xB3C4; LPS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE44;&#xD310;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xC800; &#xCEA0;&#xD504; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; TLR &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC640; &#xCEA0;&#xD504; &#xC62C;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; co-stimulus &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; PKA &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F; p38 &#xC885;&#xC18D; IL-10 &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCEA0;&#xD504; &#xBC0F; p38 &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xACBD;&#xB85C; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; IL-10 &#xC720;&#xB3C4; LPS&#xC640; &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC;-1-&#xC778;&#xC0B0; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; PCERA-1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Expresi&#xF3;n de la anti-inflamatorio de citoquinas IL-10 puede ser inducida tanto por agonistas TLR tales como lipopolisac&#xE1;rido (LPS), o por diversos est&#xED;mulos end&#xF3;genos, en particular aquellos que act&#xFA;an a trav&#xE9;s de una v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n dependiente de cAMP. Hemos informado anteriormente de que la s&#xED;ntesis de fosfato de ceramida anal&#xF3;gico-1 (PCERA-1) aumenta el nivel de AMPc y, posteriormente, regula a la baja producci&#xF3;n de TNF-y hasta regula la producci&#xF3;n de IL-10 en macr&#xF3;fagos estimulados por LPS. El objetivo de este estudio fue determinar el mecanismo de la actividad de PCERA-1 y el papel de cAMP en LPS-inducida por IL-10. Mostramos aqu&#xED; que PCERA-1 induce la producci&#xF3;n de IL-10, en sinergia con los agonistas TLR diferentes rat&#xF3;n RAW264.7 macr&#xF3;fagos. Cooperatividad es evidente tanto en los niveles de ARNm y prote&#xED;nas. IL-10 por LPS y PCERA 1-est&#xE1; mediada por la v&#xED;a de AMPc y por la quinasa p38 MAP. La fosforilaci&#xF3;n de p38 se realiza en cooperaci&#xF3;n por LPS y PCERA 1-o de otros inductores de cAMP. Adem&#xE1;s, la actividad de PCERA-1 puede ser parcialmente imitado por un an&#xE1;logo permeable a las c&#xE9;lulas de cAMP, y bloqueada por el inhibidor de la prote&#xED;na quinasa A (PKA) H89. Finalmente, en la ausencia de PCERA-1, el residuo de IL-10 inducci&#xF3;n por LPS depende del nivel de AMPc basal, ya que puede ser en gran parte elevada por la fosfodiesterasa (PDE) rolipram inhibidor -4. Nuestros resultados indican que la IL-10 la inducci&#xF3;n por LPS depende fundamentalmente del nivel de AMPc basal, y que un compa&#xF1;ero de est&#xED;mulo por un agonista del TLR y se produce un agente que eleven la cAMP en sin&#xE9;rgico dependiente de PKA y p38 dependiente de la IL-10.

Sin&#xE9;rgica de inducci&#xF3;n de IL-10 por el LPS y la ceramida-1-fosfato anal&#xF3;gica PCERA-1 est&#xE1; mediada por el CAMP y p38 MAP quinasa

CREB &#x5185;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8BC4;&#x4F30; LPS &#x5BF9;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C; CREB&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x3001; &#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A; LPS &#x63D0;&#x5347; intra-cellular cAMP RAW264.7 &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6162;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E;&#x4F4E;&#x91CF;&#x5E94;&#x5927;&#x4E8E;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x4E24;&#x540D;&#x7279;&#x5DE5;&#x4EBA;&#x5458;&#x523A;&#x6FC0; CREB &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728; Ser 133 &#x7A0B;&#x5EA6;&#x7C7B;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x673A;&#x5236; &#xFF1B;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x5927;&#x591A; PKA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20; &#xFF1B;&#x7F13;&#x6162;&#x548C;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x4ECB;&#x5BFC; MSK1&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; CREB &#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; CRE &#x8C03;&#x8282;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x62A5;&#x9053;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x5242; p38 &#x548C; MSK1&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; PKA &#x5B8C;&#x5168;&#x963B;&#x6B62;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x548C; TNFalpha &#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x4E0E;&#x4F17;&#x4E0D;&#x540C;&#xFF0C;PKA H89 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x963B;&#x6B62; TNFalpha &#x751F;&#x4EA7;&#x3001; &#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5176;&#x5BF9;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8BF1;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781; CREB &#x8FC7;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E86;&#x5BF9;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0; TNFalpha &#x751F;&#x4EA7;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F1A;&#x963B;&#x6B62;&#x5F02;&#x4E19;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x5BF9; TNFalpha &#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x4ECB;&#x5BFC; PKA &#x78F7;&#x9178;&#x5316; CREB &#x4FC3;&#x8FDB; TNFalpha &#x5236;&#x6B62;&#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8BF1;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x800C;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x8D77;&#x7684;&#x5185;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4ECB;&#x5BFC; MSK1 &#x662F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x975E;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

&#x5728;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; TNFalpha &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10 &#x8868;&#x8FBE; RAW264.7 &#x8102;&#x591A;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; CREB &#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The role of CREB in LPS signaling is controversial. The objective of this study was to evaluate the effect of LPS on phosphorylation and transcriptional activation of CREB, in comparison to isoproterenol, a beta-adrenergic receptor agonist. We show here that LPS elevates intra-cellular cAMP level in RAW264.7 macrophages, with slower kinetics and lower magnitude than isoproterenol. The two agents stimulated CREB phosphorylation on Ser-133 to a similar extent, but with a different mechanism; rapid and mostly PKA-mediated for isoproterenol; slow and MSK1-mediated for LPS. Interestingly, LPS-stimulated phosphorylation of CREB did not result in transcriptional activation of a CRE-regulated luciferase reporter, in contrast to stimulation by isoproterenol. Furthermore, inhibitors of p38 and MSK1, but not PKA, completely blocked the production of IL-10 and TNFalpha in LPS-stimulated macrophages. Distinctively, the PKA inhibitor H89 blocked the suppressive effect of isoproterenol on TNFalpha production, as well as its stimulatory effect on IL-10 induction, in LPS-stimulated macrophages. Likewise, while over-expression of dominant negative CREB had no effect on LPS-stimulated TNFalpha production, it blocked the suppressive effect of isoproterenol on TNFalpha production in the LPS-stimulated macrophages. Our results thus indicate that PKA-mediated phosphorylation of CREB promotes TNFalpha suppression and IL-10 induction, whereas the same phosphorylation event initiated by LPS and mediated by MSK1 is non-functional for transcriptional modulation.

Role of CREB in modulation of TNFalpha and IL-10 expression in LPS-stimulated RAW264.7 macrophages.

Le r&#xF4;le de la prot&#xE9;ine CREB dans LPS signalisation est controvers&#xE9;e. L&#x26;#39;objectif de cette &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;&#xE9;valuer l&#x26;#39;effet du LPS sur la phosphorylation et l&#x26;#39;activation transcriptionnelle de la prot&#xE9;ine CREB, en comparaison &#xE0; l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol, un agoniste des r&#xE9;cepteurs b&#xEA;ta-adr&#xE9;nergiques. Nous montrons ici que le LPS &#xE9;l&#xE8;ve taux d&#x26;#39;AMPc intra-cellulaire dans les macrophages RAW264.7, avec une cin&#xE9;tique plus lente et plus faible ampleur que l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol. Les deux agents stimulation de la phosphorylation de CREB sur Ser-133 &#xE0; un degr&#xE9; similaire, mais avec un m&#xE9;canisme diff&#xE9;rent; rapide et la plupart du temps PKA-m&#xE9;diatis&#xE9;e pour l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol; lent et MSK1 m&#xE9;diation pour le LPS. Fait int&#xE9;ressant, LPS-stimulation de la phosphorylation de la prot&#xE9;ine CREB n&#x26;#39;a pas entra&#xEE;n&#xE9; dans l&#x26;#39;activation transcriptionnelle d&#x26;#39;un journaliste CRE-lucif&#xE9;rase r&#xE9;glement&#xE9;, contrairement &#xE0; une stimulation par l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol. En outre, des inhibiteurs de la p38 et MSK1, mais pas la PKA, a compl&#xE8;tement bloqu&#xE9; la production d&#x26;#39;IL-10 et TNF-alpha dans le LPS-macrophages stimul&#xE9;s. Typiquement, l&#x26;#39;inhibiteur de la PKA H89 bloque l&#x26;#39;effet suppressif de l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol sur la production de TNF-alpha, ainsi que son effet stimulant sur l&#x26;#39;IL-10 par induction, en LPS-macrophages stimul&#xE9;s. De m&#xEA;me, tandis que la surexpression de la prot&#xE9;ine CREB dominant n&#xE9;gatif n&#x26;#39;a eu aucun effet sur le LPS-stimul&#xE9; la production de TNF-alpha, il a bloqu&#xE9; l&#x26;#39;effet suppressif de l&#x26;#39;isoprot&#xE9;r&#xE9;nol sur la production de TNF-alpha dans les macrophages stimul&#xE9;s par LPS. Nos r&#xE9;sultats indiquent donc que la phosphorylation m&#xE9;di&#xE9;e par la PKA de CREB favorise la suppression du TNFalpha et l&#x26;#39;IL-10 par induction, tandis que l&#x26;#39;&#xE9;v&#xE9;nement de phosphorylation initi&#xE9;es par les LPS et m&#xE9;di&#xE9;e par MSK1 est non-fonctionnel pour la modulation de la transcription.

R&#xF4;le de la prot&#xE9;ine CREB dans la modulation du TNFalpha et l&#x26;#39;IL-10 expression dans LPS-stimul&#xE9;s RAW264.7 macrophages

Die Rolle des CREB in LPS Signalisierung ist umstritten. Das Ziel dieser Studie war es, den Effekt der LPS auf Phosphorylierung und transkriptionelle Aktivierung von CREB, im Vergleich zu Isoproterenol, ein adrenergenen Rezeptor-Agonisten zu bewerten. Wir zeigen hier, dass LPS hebt intra-cellular cAMP Ebene in RAW264.7 Makrophagen, mit langsameren Kinetik und geringeren Haushaltsproblemen als Isoproterenol. Die beiden Agenten stimuliert CREB Phosphorylierung auf Ser-133 &auml;hnlichen Umfang, aber mit einen anderen Mechanismus; schnelle und vor allem PKA-vermittelte f&uuml;r Isoproterenol; langsam und MSK1-vermittelte f&uuml;r LPS. Interessanterweise LPS stimuliert Phosphorylierung von CREB nicht transkriptionelle Aktivierung des CRE-regulierten Luciferase Reporter, im Gegensatz zur Stimulation durch Isoproterenol f&uuml;hren. Dar&uuml;ber hinaus blockiert Inhibitoren der p38 und MSK1, aber nicht PKA, v&ouml;llig die Produktion von IL-10 und TNFalpha in LPS stimuliert Makrophagen. Markant, blockiert die PKA-Inhibitor H89 die unterdr&uuml;ckende Wirkung von Isoproterenol auf TNFalpha-Produktion, sowie seine stimulierende Wirkung auf IL-10 Induktion, in LPS stimuliert Makrophagen. Ebenso w&auml;hrend &Uuml;berexpression des dominierenden negativen CREB keinen Einfluss auf LPS stimuliert TNFalpha-Produktion hatte, blockiert es die unterdr&uuml;ckende Wirkung von Isoproterenol auf TNFalpha-Produktion in der LPS stimuliert Makrophagen. Unsere Ergebnisse zeigen damit, dass die PKA-vermittelte Phosphorylierung von CREB f&ouml;rdert TNFalpha Unterdr&uuml;ckung und IL-10 Induktion, wogegen das gleiche Ereignis der Phosphorylierung von LPS initiiert und durch vermittelt MSK1 nicht-funktionale transkriptionelle Modulation.

Rolle des CREB Modulation des TNFalpha und IL-10 Ausdruck in RAW264.7 LPS stimuliert Makrophagen.

Il ruolo di CREB in LPS di segnalazione &egrave; controverso. L&#39;obiettivo di questo studio era di valutare l&#39;effetto di LPS su fosforilazione e attivazione trascrizionale di CREB, rispetto all&#39;isoproterenolo, un agonista del recettore alterazioni. Mostriamo qui che LPS eleva il livello di cAMP intracellulare in RAW264.7 macrofagi, con cinetica pi&ugrave; lenta e bassa magnitudo di isoproterenolo. I due agenti ha stimolato la fosforilazione di CREB su Ser-133 in misura simile, ma con un meccanismo diverso; rapido e soprattutto PKA-mediato per isoproterenolo; lento e MSK1-mediato per LPS. &Egrave; interessante notare, LPS-stimolata fosforilazione di CREB non ha risultato nell&#39;attivazione trascrizionale di un reporter di luciferase CRE-regolato, in contrasto con la stimolazione con isoproterenolo. Inoltre, gli inibitori della p38 e MSK1, ma non PKA, completamente bloccato la produzione di IL-10 e TNFalpha in macrofagi stimolati LPS. Tipicamente, l&#39;inibitore PKA H89 bloccato l&#39;effetto soppressivo di isoproterenolo sulla produzione TNFalpha, cos&igrave; come il suo effetto stimolatorio sull&#39;induzione di IL-10, in macrofagi stimolati LPS. Allo stesso modo, mentre la sovraespressione del CREB negativo dominante ha avuto alcun effetto sulla produzione di LPS-stimolato TNFalpha, bloccato l&#39;effetto soppressivo di isoproterenolo sulla produzione TNFalpha nei macrofagi LPS-stimolata. Cos&igrave; i nostri risultati indicano che promuove la PKA-mediata fosforilazione di CREB TNFalpha repressione e induzione di IL-10, considerando che lo stesso evento di fosforilazione avviata dal LPS e mediata da MSK1 non &egrave; funzionale per la modulazione trascrizionale.

Ruolo di CREB nella modulazione dell&#39;espressione TNFalpha e IL-10 in macrofagi stimolati LPS RAW264.7.

LPS&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CREB&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x4F59;&#x5730;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x3B2;-&#x30A2;&#x30C9;&#x30EC;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CREB&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;LPS&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;LPS&#x304C;&#x9045;&#x3044;&#x52D5;&#x614B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4F4E;&#x3044;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3067;&#x3001;RAW264.7&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;cAMP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4E0A;&#x6607;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x793A;&#x3059;&#x3002; 2&#x3064;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x307E;&#x3067;&#x306E;Ser-133&#x4E0A;&#x306E;CREB&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3001;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;pKa&#x306B;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E3B;&#x306B;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x3001;LPS&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3068;MSK1&#x5A92;&#x4ECB;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;CREB&#x306E;LPS&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;CRE&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x306F;&#x81F3;&#x3089;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;p38&#x3068;MSK1&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;PKA&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;LPS&#x523A;&#x6FC0;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IL-10&#x304A;&#x3088;&#x3073;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x72EC;&#x7279;&#x306E;&#x3001;PKA&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;H89&#x306B;&#x306F;&#x3001;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;LPS&#x523A;&#x6FC0;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;IL-10&#x8A98;&#x5C0E;&#x3078;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;CREB&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;LPS&#x523A;&#x6FC0;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;LPS&#x523A;&#x6FC0;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30EC;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;MSK1&#x306B;&#x3088;&#x308B;LPS&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x540C;&#x4E00;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x975E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;CREB&#x306E;PKA&#x4EF2;&#x4ECB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x304C;&#x3001;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IL-10&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TNF&#x3B1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;IL-10 LPS&#x523A;&#x6FC0;RAW264.7&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CREB&#x306E;&#x5F79;&#x5272;

CREB LPS &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xB17C;&#xC7C1;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; LPS&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; isoproterenol, beta-adrenergic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;, CREB&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; lp&#xB9CC; &#xB290;&#xB9B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; isoproterenol &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; RAW264.7 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; intra-cellular &#xCEA0;&#xD504; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xB04C;&#xC5B4;&#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xC790;&#xADF9; &#xC778; CREB &#xC0B0;&#xD654; Ser-133&#xC5D0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC815;&#xB3C4; &#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; PKA isoproterenol;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC7AC; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; MSK1 LPS&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC7AC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, CREB&#xC758; LPS &#xC790;&#xADF9; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; isoproterenol &#xB2EC;&#xB9AC; CRE &#xADDC;&#xC81C; &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xAE30;&#xC790;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, p38 &#xBC0F; MSK1, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; PKA&#xC758; &#xC800; &#xD574;&#xC81C; &#xC644;&#xC804;&#xD788; LPS &#xC790;&#xADF9; &#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; IL-10&#xACFC; Tnfalpha&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xAC1C;&#xC131;, PKA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; H89 isoproterenol TNFalpha &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xC555; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; IL-10 &#xC720;&#xB3C4;, LPS &#xC790;&#xADF9; &#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC758; stimulatory &#xD6A8;&#xACFC; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; CREB&#xC758; over-expression LPS &#xC790;&#xADF9; TNFalpha &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, LPS &#xC790;&#xADF9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; TNFalpha &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; isoproterenol &#xC9C4;&#xC555; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCC28;&#xB2E8;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; CREB&#xC758; PKA &#xC911;&#xC7AC; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xCD09;&#xC9C4; TNFalpha &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; IL-10 &#xC720;&#xB3C4;, msk1&#xB294; transcriptional &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xAC19;&#xC740; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; LPS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

LPS &#xC790;&#xADF9; RAW264.7 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; TNFalpha &#xBC0F; IL-10 &#xC2DD;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; CREB&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

El papel de CREB en el LPS de se&#xF1;alizaci&#xF3;n es objeto de controversia. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de LPS sobre la fosforilaci&#xF3;n y la activaci&#xF3;n transcripcional de CREB, en comparaci&#xF3;n con el isoproterenol, un agonista de los receptores beta-adren&#xE9;rgicos. Mostramos aqu&#xED; que el LPS eleva el nivel intracelular de cAMP en RAW264.7 los macr&#xF3;fagos, m&#xE1;s lentos y la cin&#xE9;tica de menor magnitud que el isoproterenol. Los dos agentes estimul&#xF3; la fosforilaci&#xF3;n de CREB en Ser-133 a una medida similar, pero con un mecanismo diferente; r&#xE1;pido y principalmente PKA mediada por isoproterenol-; lento y MSK1 mediada por LPS. Curiosamente, LPS-estimulado fosforilaci&#xF3;n de CREB no dio lugar a la activaci&#xF3;n transcripcional de un reportero CRE-regulada luciferasa, en contraste con la estimulaci&#xF3;n por el isoproterenol. Adem&#xE1;s, los inhibidores de p38 y MSK1, pero no PKA, bloque&#xF3; completamente la producci&#xF3;n de IL-10 y TNF en LPS-macr&#xF3;fagos estimulados. Claramente, el inhibidor de PKA H89 bloqueado el efecto supresor de isoproterenol en la producci&#xF3;n de TNF, as&#xED; como su efecto estimulante sobre la IL-10 de inducci&#xF3;n, en LPS-macr&#xF3;fagos estimulados. Del mismo modo, mientras que la sobre expresi&#xF3;n de dominante negativo CREB no tuvo efecto sobre LPS-estimulado la producci&#xF3;n de TNF, que bloquean el efecto supresor de isoproterenol en la producci&#xF3;n de TNF en los macr&#xF3;fagos estimulados por LPS. Nuestros resultados indican as&#xED; que la fosforilaci&#xF3;n mediada por PKA de CREB promueve supresi&#xF3;n TNF e IL-10 de inducci&#xF3;n, mientras que el evento de fosforilaci&#xF3;n misma iniciada por LPS y mediada por MSK1 no es funcional para la modulaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n.

Orna Ernst

Department of Biochemistry

Tel Aviv University

Linearization of the Bradford Protein Assay

Orna Ernst

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Tel Aviv University

Linearization of the Bradford Protein Assay

Department of Biochemistry