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A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

Merck & Co., Inc

&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; (rhAd) &#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5305;&#x62EC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x975E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x8D77;&#x6E90;&#x3002;RhAd &#x5411;&#x91CF;&#x7531;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x86CB;&#x767D;&#x751F;&#x4EA7;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE; 293 (&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293) &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x7B49;&#x5176;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x7684;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E3B;&#x8981;&#x88AB;&#x5F52; rhAd &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x758F;&#x6F0F;&#x548C;&#x652F;&#x6301;&#x75C5;&#x6BD2; DNA &#x590D;&#x5236;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684; El &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F80;&#x5F80;&#x60A3;&#x6709;&#x56E0;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x53D8;&#x6548;&#x5E94; (CPE)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230;&#x635F;&#x5BB3;&#x548C;&#x6587;&#x5316;&#x6D3B;&#x529B;&#x5C06;&#x4F1A;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x65B0;&#x5408;&#x6210;&#x591A;&#x80BD;&#x53EF;&#x80FD;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5904;&#x7406;&#x6B63;&#x786E;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x7EA7;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80CE;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5982;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x5728;&#x641C;&#x7D22; rhAd &#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E3B;&#x673A;&#x66F4;&#x5F3A;&#x5065;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x8BD5;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9694;&#x79BB;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2; K1 (CHO K1) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x591A;&#x8F6E;&#x7956; K1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5229;&#x7528;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; rhAd&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x540E;, &#x7684;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x4E30;&#x5BCC;&#x4E86;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5C11;&#x7684; CHO &#x7EC6;&#x80DE;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x9AD8;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x4E2A;&#x522B;&#x514B;&#x9686;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x66F4;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x4E86;&#x9694;&#x7EDD;&#x9AD8;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x4E32;&#x884C;&#x7A00;&#x91CA;&#x6CD5;&#x3002;&#x5355;&#x4E2A;&#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x6307;&#x5B9A; CHO-K1-C5&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x6BD4;&#x7236;&#x6BCD;&#x6C60; rhAd &#x611F;&#x67D3;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x7EB5;&#x5BB9;&#xFF0C;&#x5386;&#x4EFB;&#x4E2D;&#x6210;&#x529F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E3B;&#x673A;&#x3002;

&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Recombinant human adenovirus (rhAd) has been used extensively for functional protein expression in mammalian cells including those of human and nonhuman origin. High-level protein production by rhAd vectors is expected in their permissive host cells, such as the human embryonic kidney 293 (HEK293) cell line. This is attributed primarily to the permissiveness of HEK293 to rhAd infection and their ability to support viral DNA replication by providing the missing El proteins. However, the HEK293 cells tend to suffer from cytopathic effect (CPE) as a result of virus replication. Under these circumstances, the host cell function is compromised and the culture viability will be reduced. Consequently, newly synthesized polypeptides may not be processed properly at posttranslational levels. Therefore, the usefulness of HEK293 cells for the expression of complex targets such as secreted proteins could be limited. In the search for a more robust cell line as a production host for rhAd expression vectors, a series of screening experiments was performed to isolate clones from Chinese hamster ovary-K1 (CHO-K1) cells. First, multiple rounds of infection of CHO-K1 cells were performed utilizing an rhAd expressing GFP. After each cycle of infection, a small population of CHO cells with high GFP levels was enriched by FACS. Second, individual clones more permissive to human adenovirus infection were isolated from the highly enriched subpopulation by serial dilution. A single clone, designated CHO-K1-C5, was found to be particularly permissive to rhAd infection than the parental pool and has served as a production host in the successful expression of several secreted proteins.

Development of a Chinese hamster ovary cell line for recombinant adenovirus-mediated gene expression.

Ad&#xE9;novirus recombinant humain (RHAD) a &#xE9;t&#xE9; largement utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines fonctionnelles dans les cellules de mammif&#xE8;res, y compris ceux d&#x26;#39;origine humaine et non humaine. La production de prot&#xE9;ines de haut niveau par les vecteurs RHAD est pr&#xE9;vu dans leurs cellules h&#xF4;tes permissives, comme le rein embryonnaire humain 293 lign&#xE9;e cellulaire (HEK293). Ceci est principalement attribuable &#xE0; la permissivit&#xE9; de HEK293 &#xE0; l&#x26;#39;infection RHAD et leur capacit&#xE9; &#xE0; soutenir r&#xE9;plication de l&#x26;#39;ADN viral en fournissant les prot&#xE9;ines manquantes El. Cependant, les cellules HEK293 ont tendance &#xE0; souffrir de l&#x26;#39;effet cytopathog&#xE8;ne (CPE) &#xE0; la suite de la r&#xE9;plication du virus. Dans ces circonstances, la fonction cellule h&#xF4;te est compromise et la viabilit&#xE9; de la culture sera r&#xE9;duit. Par cons&#xE9;quent, des polypeptides nouvellement synth&#xE9;tis&#xE9;s ne peuvent pas &#xEA;tre trait&#xE9;s correctement au niveau post-traductionnelles. Par cons&#xE9;quent, l&#x26;#39;utilit&#xE9; des cellules HEK293 pour l&#x26;#39;expression de cibles complexes telles que les prot&#xE9;ines s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;es pourrait &#xEA;tre limit&#xE9;e. Dans la recherche d&#x26;#39;une lign&#xE9;e cellulaire plus robuste comme un h&#xF4;te de production pour les vecteurs d&#x26;#39;expression RHAD, une s&#xE9;rie d&#x26;#39;exp&#xE9;riences de d&#xE9;pistage a &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9; pour isoler des clones de l&#x26;#39;ovaire de hamster chinois-K1 (CHO-K1) des cellules. Tout d&#x26;#39;abord, plusieurs tours de l&#x26;#39;infection des cellules CHO-K1 ont &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;es en utilisant une GFP RHAD exprimer. Apr&#xE8;s chaque cycle de l&#x26;#39;infection, une petite population de cellules CHO avec des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s GFP a &#xE9;t&#xE9; enrichi par FACS. Deuxi&#xE8;mement, les clones individuels plus permissives &#xE0; l&#x26;#39;infection ad&#xE9;novirus humain ont &#xE9;t&#xE9; isol&#xE9;s &#xE0; partir de la sous-population hautement enrichi par dilution en s&#xE9;rie. Un clone unique, d&#xE9;sign&#xE9; CHO-K1-C5, a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9;e particuli&#xE8;rement permissives &#xE0; l&#x26;#39;infection RHAD que la piscine parentale et a servi comme un h&#xF4;te de production dans l&#x26;#39;expression r&#xE9;ussie de plusieurs prot&#xE9;ines s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;es.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une lign&#xE9;e cellulaire d&#x26;#39;ovaire de hamster chinois pour l&#x26;#39;expression recombinante Gene ad&#xE9;novirus

Entwicklung eines chinesischen Hamsters Linie f&#xFC;r die rekombinante Adenovirus-vermittelten Genexpression.

Adenovirus umano ricombinante (rhAd) &egrave; stato usato estesamente per l&#39;espressione della proteina funzionale nelle cellule dei mammiferi, compresi quelli di origine umana e non umana. Produzione di proteine ad alto livello di rhAd vettori &egrave; previsto in loro cellule permissive host, ad esempio la linea di cellule renali embrionali umane (HEK293) 293. Ci&ograve; &egrave; attribuita principalmente per il permissivismo di HEK293 per rhAd infezione e loro capacit&agrave; di sostenere la replicazione del DNA virale fornendo proteine El mancante. Tuttavia, le cellule HEK293 tendono a soffrire di effetto citopatico (CPE) a seguito di replicazione del virus. In queste circostanze, la funzione di cellula ospite &egrave; compromessa e la vitalit&agrave; della cultura sar&agrave; ridotto. Di conseguenza, polipeptidi recentemente sintetizzati non possono essere trasformati correttamente ai livelli post traduzionale. Pertanto, l&#39;utilit&agrave; delle cellule HEK293 per l&#39;espressione di obiettivi complessi come proteine secrete potrebbe essere limitato. Alla ricerca di una linea cellulare pi&ugrave; robusta come un host di produzione per i vettori di espressione rhAd, una serie di esperimenti di screening &egrave; stata eseguita per isolare i cloni di cellule di criceto cinese ovaia-K1 (CHO-K1). Primo, pi&ugrave; cicli di infezione delle cellule CHO-K1 sono stati eseguiti utilizzando un rhAd che esprimono GFP. Dopo ogni ciclo di infezione, una piccola popolazione di cellule CHO con alti livelli GFP &egrave; stata arricchita da FACS. In secondo luogo, singoli cloni pi&ugrave; permissivi all&#39;infezione da adenovirus umano sono stati isolati dalla sottopopolazione altamente arricchita da diluizione seriale. Un singolo clone, designato CHO-K1-C5, &egrave; stato trovato per essere particolarmente permissive all&#39;infezione rhAd rispetto alla piscina dei genitori e ha servito come un host di produzione nell&#39;espressione di successo di parecchie proteine secrete.

Sviluppo di una linea cellulare dell&#39;ovaio di criceto cinese per l&#39;espressione recombinant adenovirus-mediata del gene.

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30D2;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;rhAd&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x30D2;&#x30C8;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; rhAd&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x814E;&#x81D3;293&#xFF08;HEK293&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306A;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;rhAd&#x611F;&#x67D3;&#x306B;HEK293&#x306E;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3001;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30EB;&#xB7;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;DNA&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5909;&#x6027;&#x52B9;&#x679C;&#xFF08;CPE&#xFF09;&#x306B;&#x82E6;&#x3057;&#x3080;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x72B6;&#x6CC1;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x6CCC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;HEK293&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x306F;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; rhAd&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x56FA;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;-K1&#xFF08;CHO-K1&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5358;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002; CHO-K1&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;rhAd&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;GFP&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x5404;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;GFP&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;CHO&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5C0F;&#x96C6;&#x56E3;&#x3092;FACS&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x5BDB;&#x5927;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306B;&#x5E0C;&#x91C8;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x96C6;&#x56E3;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CHO-K1-C5&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x89AA;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;rhAd&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x306B;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x52D9;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (rhAd)&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; nonhuman &#xADFC;&#xC6D0;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; 293 (HEK293) &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xB4F1; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD00;&#xB300; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; rhAd &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0;&#xAE09; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC608;&#xC815;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; rhAd &#xAC10;&#xC5FC; HEK293 &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD568; &#xBC0F; &#xB204;&#xB77D; &#xB41C; &#xC5D8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; HEK293 &#xC138;&#xD3EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; cytopathic &#xD6A8;&#xACFC; (CPE)&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD669;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xBB38;&#xD654; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC0C8;&#xB85C; &#xD569;&#xC131; &#xB41C; polypeptides posttranslational &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB4F1; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; HEK293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131; &#xC81C;&#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RhAd &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9;, &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC758; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C;-K1 (&#xC870;-K1) &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD074;&#xB860;&#xC744; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8;, &#xC870; K1 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; GFP&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; Rhad&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xAC01; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xD6C4; &#xC0C1;&#xBD80; GFP &#xAC00;&#xC9C4; &#xC870; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC778;&#xAD6C; FACS&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD48D;&#xC131; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB458;&#xC9F8;, &#xAC1C;&#xBCC4; &#xD074;&#xB860; &#xC778;&#xAC04; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB354; &#xAD00;&#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xCD95;&#xB41C; subpopulation&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xB82C; &#xD76C;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC870;-k 1-c 5&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xBD80;&#xBAA8;&#xC758; &#xC218;&#xC601;&#xC7A5; &#xBCF4;&#xB2E4; rhAd &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xAD00;&#xB300; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C;&#xB355;&#xC158; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC5ED;&#xC784; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911;&#xC7AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Adenovirus recombinante humana (de RHAD) se ha utilizado ampliamente para expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na funcional en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros, incluidas las de origen humano y no humano. Alto nivel de producci&#xF3;n de prote&#xED;nas a trav&#xE9;s de vectores de RHAD se espera en sus c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped permisivas, como la 293 del ri&#xF1;&#xF3;n de embri&#xF3;n humano l&#xED;nea celular (HEK293). Esto se atribuye principalmente a la permisividad de HEK293 a la infecci&#xF3;n de RHAD y su capacidad para apoyar la replicaci&#xF3;n del ADN viral mediante la prestaci&#xF3;n de los desaparecidos de El prote&#xED;nas. Sin embargo, las c&#xE9;lulas HEK293 tienden a sufrir de efecto citop&#xE1;tico (ECP) como resultado de la replicaci&#xF3;n del virus. Bajo estas circunstancias, la funci&#xF3;n de la c&#xE9;lula hu&#xE9;sped se ve comprometida y la viabilidad del cultivo se reducir&#xE1;. En consecuencia, los polip&#xE9;ptidos reci&#xE9;n sintetizados pueden no ser procesados &#x200B;&#x200B;adecuadamente en los niveles posteriores a la traducci&#xF3;n. Por lo tanto, la utilidad de las c&#xE9;lulas HEK293 para la expresi&#xF3;n de objetivos complejos, tales como prote&#xED;nas secretadas podr&#xED;a ser limitada. En la b&#xFA;squeda de una l&#xED;nea celular m&#xE1;s robusto como un hu&#xE9;sped para la producci&#xF3;n de vectores de expresi&#xF3;n de RHAD, una serie de experimentos de cribado se realiz&#xF3; para aislar clones de ovario-K1 h&#xE1;mster chino (CHO-K1) c&#xE9;lulas. En primer lugar, m&#xFA;ltiples rondas de infecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas CHO-K1 se realizaron utilizando un GFP de RHAD expresar. Despu&#xE9;s de cada ciclo de la infecci&#xF3;n, una peque&#xF1;a poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas CHO con altos niveles de GFP fue enriquecida por FACS. En segundo lugar, los clones individuales m&#xE1;s permisivas a la infecci&#xF3;n por adenovirus humano se aislaron a partir de la subpoblaci&#xF3;n altamente enriquecido por diluci&#xF3;n en serie. Un solo clon, designado CHO-K1-C5, se encontr&#xF3; que era particularmente permisivo a la infecci&#xF3;n de RHAD de la piscina parental y ha servido como un host de producci&#xF3;n en la expresi&#xF3;n con &#xE9;xito de varias prote&#xED;nas secretadas.

Desarrollo de una l&#xED;nea celular de ovario de h&#xE1;mster chino para la expresi&#xF3;n recombinante del gen mediada por adenovirus

&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x662F;&#x6781;&#x4E3A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x836F;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5236;&#x9020;&#x3002;&#x5F97;&#x4EE5;&#x987A;&#x5229;&#x63A8;&#x884C;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4F18;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x5E8F;&#x5217;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x5411;&#x91CF;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F18;&#x5316;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4EA7;&#x91CF;&#x3002;&#x5F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F18;&#x5316;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x91CD;&#x578B;&#x548C;&#x8F7B;&#x578B;&#x94FE;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x6027;&#x6297;&#x4F53;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x77AC;&#x65F6;&#x8F6C;&#x67D3;&#x3002;&#x9AD8;&#x67B6;&#x91CD;&#x94FE; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x662F;&#x6297;&#x4F53;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5206;&#x6790;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x589E;&#x5F3A; mRNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F18;&#x5316;&#x6240;&#x81F4;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F18;&#x5316;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x751F;&#x4EA7;&#x7A33;&#x5B9A;&#x65E0;&#x6027;&#x7CFB;&#x3002;

&#x5728; CHO &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; mRNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x751F;&#x4EA7;&#xFF1A; &#x901A;&#x8FC7;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F18;&#x5316;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;

The productivity of stably transfected cell lines is of critical importance for the manufacturing of therapeutic proteins. Various methods have been successfully implemented to increase the production output of mammalian cell cultures. Increasing evidence suggests that optimization of the gene coding sequences of an expression vector can improve specific cell line yield of the recombinant protein. Here we demonstrate that gene optimization substantially enhances antibody production in Chinese hamster ovary cells. When gene optimization was applied to the heavy and light chain genes of a therapeutic antibody, we observed increased antibody production in transient transfection. Elevated heavy chain mRNA level was associated with the increase of antibody production. Further analysis suggested that the increased antibody expression is attributable to enhanced mRNA stability resulting from gene optimization. Gene optimization also led to increased antibody production in stable clones.

mRNA stability and antibody production in CHO cells: improvement through gene optimization.

La productivit&#xE9; des lign&#xE9;es cellulaires transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable est d&#x26;#39;une importance critique pour la fabrication de prot&#xE9;ines th&#xE9;rapeutiques. Diverses m&#xE9;thodes ont &#xE9;t&#xE9; appliqu&#xE9;es avec succ&#xE8;s pour augmenter le rendement de production des cultures de cellules de mammif&#xE8;res. Plus en plus &#xE9;vident que l&#x26;#39;optimisation du g&#xE8;ne codant des s&#xE9;quences d&#x26;#39;un vecteur d&#x26;#39;expression peut am&#xE9;liorer le rendement sp&#xE9;cifique lign&#xE9;e cellulaire de la prot&#xE9;ine recombinante. Ici, nous d&#xE9;montrons que l&#x26;#39;optimisation du g&#xE8;ne am&#xE9;liore sensiblement la production d&#x26;#39;anticorps dans ovariennes de hamster chinois. Lorsque l&#x26;#39;optimisation du g&#xE8;ne a &#xE9;t&#xE9; appliqu&#xE9;e aux g&#xE8;nes des cha&#xEE;nes lourdes et l&#xE9;g&#xE8;res d&#x26;#39;un anticorps th&#xE9;rapeutique, nous avons observ&#xE9; la production d&#x26;#39;anticorps a augment&#xE9; en transfection transitoire. Elevated niveau ARNm de la cha&#xEE;ne lourde a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;augmentation de la production d&#x26;#39;anticorps. Une analyse plus pouss&#xE9;e sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;anticorps accrue est attribuable &#xE0; la stabilit&#xE9; des ARNm accrue r&#xE9;sultant de l&#x26;#39;optimisation des g&#xE8;nes. L&#x26;#39;optimisation Gene a &#xE9;galement conduit &#xE0; la production d&#x26;#39;anticorps a augment&#xE9; dans des clones stables.

Stabilit&#xE9; de l&#x26;#39;ARNm et la production d&#x26;#39;anticorps dans des cellules CHO: Am&#xE9;lioration g&#xE9;n&#xE9;tique gr&#xE2;ce &#xE0; l&#x26;#39;optimisation

Die Produktivit&auml;t der Stabil transfizierte Zellinien ist von entscheidender Bedeutung f&uuml;r die Herstellung von therapeutischen Proteinen. Verschiedene Methoden wurden erfolgreich umgesetzt, um die Produktionsleistung der S&auml;ugetier-Zellkulturen zu erh&ouml;hen. Zunehmender Beweis schl&auml;gt die Optimierung im Gen Sequenzen eines Ausdrucks Vektor kann bestimmte Zelle Zeile Ausbeute des rekombinanten Proteins zu verbessern. Hier zeigen wir, dass dieses Gen-Optimierung Antik&ouml;rperproduktion in chinesischen Hamsterzellen Eierstock erheblich verbessert. Beim gen-Optimierung auf die schwere und leichte Kette Gene ein therapeutischer Antik&ouml;rper angewendet wurde, beobachteten wir erh&ouml;hte Antik&ouml;rper-Produktion in transiente Transfektion. Erh&ouml;hten schwere Kette mRNA-Ebene war verbunden mit der Zunahme der Produktion von Antik&ouml;rpern. Weitere Analyse vorgeschlagen, dass der erh&ouml;hte Antik&ouml;rper-Ausdruck auf erh&ouml;hte mRNA Stabilit&auml;t aus gen Optimierung zur&uuml;ckzuf&uuml;hren ist. Gen Optimierung f&uuml;hrte zu erh&ouml;hte Antik&ouml;rper-Produktion in stabile Klone.

Stabilit&auml;t und Antik&ouml;rper-Produktion von mRNA in CHO-Zellen: Verbesserung durch Gen-Optimierung.

La produttivit&agrave; delle linee cellulari stabile transfected &egrave; di fondamentale importanza per la produzione di proteine terapeutiche. Vari metodi sono stati implementati con successo per aumentare la produzione di colture di cellule di mammifero. Crescente evidenza suggerisce che l&#39;ottimizzazione del gene che codifica le sequenze di un&#39;espressione vettoriale pu&ograve; migliorare la resa linea cella specifica della proteina ricombinante. Qui dimostriamo che ottimizzazione gene sostanzialmente aumenta la produzione dell&#39;anticorpo in cellule di ovaio di criceto cinese. Quando l&#39;ottimizzazione del gene &egrave; stata applicata ai geni di un anticorpo terapeutico catena pesante e leggera, abbiamo osservato produzione aumentata dell&#39;anticorpo nella trasfezione transiente. Livello di mRNA elevata catena pesante &egrave; stato associato con l&#39;aumento della produzione di anticorpi. Un&#39;ulteriore analisi ha suggerito che l&#39;espressione aumentata dell&#39;anticorpo &egrave; attribuibile ad una maggiore stabilit&agrave; del mRNA derivanti dall&#39;ottimizzazione del gene. Ottimizzazione del gene ha portato anche alla produzione aumentata dell&#39;anticorpo nei cloni stabili.

produzione di mRNA stabilit&agrave; e anticorpo nelle cellule CHO: miglioramento attraverso l&#39;ottimizzazione del gene.

&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x6027;&#x306F;&#x6CBB;&#x7642;&#x7528;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x91CF;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6B69;&#x7559;&#x307E;&#x308A;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x7528;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x9396;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EFD;&#x9396;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x6297;&#x4F53;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x305F;&#x91CD;&#x9396;mRNA&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x5206;&#x6790;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x200B;&#x200B;&#x305F;&#x6297;&#x4F53;&#x767A;&#x73FE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;mRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x6297;&#x4F53;&#x7523;&#x751F;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

CHO&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;mRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6297;&#x4F53;&#x7523;&#x751F;&#xFF1A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6539;&#x5584;

&#xC548;&#xC815;&#xC801; transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC131; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xB7C9; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xC81C;&#xC548; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xC2DD;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCA1;&#xD130; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC218;&#xC728;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xB294; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xBB34; &#xAC81; &#xACE0; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xC0AC;&#xC2AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xACFC;&#xB3C4; transfection&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xBD84;&#xC11D; &#xC99D;&#xAC00; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC2DD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; mRNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB610;&#xD55C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD074;&#xB860;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4;.

&#xC870; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; mRNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC0DD;&#xC0B0;: &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC1C;&#xC120;.

La productividad de las l&#xED;neas celulares transfectadas establemente es de importancia cr&#xED;tica para la fabricaci&#xF3;n de prote&#xED;nas terap&#xE9;uticas. Varios m&#xE9;todos han sido aplicado con &#xE9;xito para aumentar el rendimiento de producci&#xF3;n de cultivos celulares de mam&#xED;feros. Aumento de la evidencia sugiere que la optimizaci&#xF3;n del gen que codifica secuencias de un vector de expresi&#xF3;n puede mejorar el rendimiento espec&#xED;fico l&#xED;nea celular de la prote&#xED;na recombinante. Aqu&#xED; demostramos que la optimizaci&#xF3;n del gen mejora sustancialmente la producci&#xF3;n de anticuerpos en las c&#xE9;lulas de ovario de h&#xE1;mster chino. Cuando gen optimizaci&#xF3;n se aplic&#xF3; a los genes de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo terap&#xE9;utico, se observ&#xF3; aumento de la producci&#xF3;n de anticuerpos en transfecci&#xF3;n transitoria. Elevado nivel de ARNm de la cadena pesada se asoci&#xF3; con el aumento de la producci&#xF3;n de anticuerpos. Un an&#xE1;lisis m&#xE1;s detallado sugiere que la expresi&#xF3;n de anticuerpos incrementada es atribuible a la estabilidad del mRNA mejorada como resultado de la optimizaci&#xF3;n del gen. Optimizaci&#xF3;n Gene tambi&#xE9;n condujo a la producci&#xF3;n de anticuerpos aumentado en los clones estables.

La estabilidad del mRNA y la producci&#xF3;n de anticuerpos en c&#xE9;lulas CHO: Mejora trav&#xE9;s de la optimizaci&#xF3;n gen&#xE9;tica

&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x5728; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#x5DF2;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x4EA7;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x6216;&#x6587;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x9AD8;&#x901A;&#x91CF;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x60AC;&#x6D6E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x5E38;&#x89C4; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x4E2D;&#x7684;&#x5F80;&#x5F80;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8FBE;&#x5230;&#x9AD8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x6B63;&#x5E38;&#x6405;&#x62CC;&#x5927;&#x6982;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4E2D;&#x6C27;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x7EA6;&#x675F;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x66F4;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x6405;&#x62CC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6C14;&#x8F6C;&#x8BA9; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x683C;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5F80;&#x5F80;&#x9700;&#x8981;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x4EEA;&#x5668;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528; Fluorinert&#xFF0C;&#x751F;&#x7269;&#x60F0;&#x6027;&#x5168;&#x6C1F;&#x5316;&#x78B3;&#xFF0C;&#x6539;&#x5584; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x6C27;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x8868;&#x8FBE;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x52A0;&#x5165;&#x4E86;&#x4E0D;&#x540C;&#x6570;&#x91CF;&#x7684; Fluorinert &#x65F6;&#xFF0C;&#x5E38;&#x89C4;&#x548C;&#x6DF1;&#x5E73;&#x65B9;&#x7C73; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x6709;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7684;&#x6539;&#x5584;&#x3002;&#x5F53;&#x8DB3;&#x591F; Fluorinert &#x5728;&#x573A;&#x4E2D;&#x6587;&#x5316;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x901F;&#x7387;&#x3001; &#x5CF0;&#x503C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3001; &#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x751F;&#x4EA7;&#x6C34;&#x5E73;&#x53D6;&#x5F97;&#x6DF1;&#x5E73;&#x65B9;&#x7C73; 96 &#x4E95;&#x662F;&#x901A;&#x98CE;&#x7684;&#x6447;&#x74F6;&#x6587;&#x5316;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5DF2;&#x77E5; Fluorinert &#x6EB6;&#x89E3;&#x6C27;&#x548C; CO(2) &#x7B49;&#x6C14;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0D;&#x4E5F;&#x89E3;&#x6563;&#x4E0D;&#x63D0;&#x53D6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5982;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3001; &#x4E73;&#x9178;&#x3001; &#x6216;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; Fluorinert &#x6DF7;&#x5165;&#x6587;&#x5316;&#x4F20;&#x5A92;&#x662F;&#x5C0F;&#x578B;&#x5316;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4F18;&#x5316;&#x4E3A;&#x5408;&#x9002;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6807;&#x51C6;&#x6447;&#x5E8A;&#x65E0;&#x9700;&#x4EFB;&#x4F55;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x66DD;&#x6C14;&#x6216;&#x5927;&#x529B;&#x6405;&#x62CC;&#x5C31;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F97;&#x5230;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;&#x3002;&copy; 2011&#x5E74;&#x7F8E;&#x56FD;&#x5316;&#x5B66;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x5E08; Biotechnol &#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x3002;Prog.&#xFF0C;2012&#x5E74;&#x3002;

Fluorinert&#xFF0C;&#x6C27;&#x8F7D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x6C27;&#x8F6C;&#x79FB;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x6027;&#x80FD;&#x6DF1;&#x65B9; 96 &#x4E95;&#x677F;&#x4E2D;&#x3002;

In bioprocess development, the 96-well plate format has been widely used for high-throughput screening of production cell line or culture conditions. However, suspension cell cultures in conventional 96-well plates often fail to reach high cell density under normal agitation presumably due to constraints in oxygen transfer. Although more vigorous agitation can improve gas transfer in 96-well plate format, it often requires specialized instruments. In this report, we employed Fluorinert, a biologically inert perfluorocarbon, to improve oxygen transfer in 96-well plate and to enable the growth of a Chinese Hamster Ovary cell line expressing a recombinant monoclonal antibody. When different amounts of Fluorinert were added to the cell culture medium, a dose-dependent improvement in cell growth was observed in both conventional and deep square 96-well plates. When sufficient Fluorinert was present in the culture, the cell growth rate, the peak cell density, and recombinant protein production levels achieved in deep square 96-wells were comparable to cultures in ventilated shake flasks. Although Fluorinert is known to dissolve gases such as oxygen and CO(2) , it does not dissolve nor extract medium components, such as glucose, lactate, or amino acids. We conclude that mixing Fluorinert with culture media is a suitable model for miniaturization of cell line development and process optimization. Proper cell growth and cellular productivity can be obtained with a standard shaker without the need for any additional aeration or vigorous agitation. Â© 2011 American Institute of Chemical Engineers Biotechnol. Prog., 2012.

Fluorinert, an oxygen carrier, improves cell culture performance in deep square 96-well plates by facilitating oxygen transfer.

Dans le d&#xE9;veloppement de bioproc&#xE9;d&#xE9;s, le format plaque de 96 puits a &#xE9;t&#xE9; largement utilis&#xE9; pour criblage &#xE0; haut d&#xE9;bit de la lign&#xE9;e cellulaire de production ou de conditions de culture. Cependant, les cultures de cellules en suspension dans conventionnels plaques &#xE0; 96 puits souvent ne parviennent pas &#xE0; haute densit&#xE9; cellulaire sous agitation normale sans doute en raison de contraintes en mati&#xE8;re de transfert d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne. Bien que plus une agitation vigoureuse peut am&#xE9;liorer le transfert de gaz dans 96 puits, format de la plaque, il faut souvent des instruments sp&#xE9;cialis&#xE9;s. Dans ce rapport, nous avons utilis&#xE9; Fluorinert, un perfluorocarbone biologiquement inerte, pour am&#xE9;liorer le transfert d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne dans plaque de 96 puits et &#xE0; permettre la croissance d&#x26;#39;une lign&#xE9;e cellulaire d&#x26;#39;ovaire de hamster chinois exprimant un anticorps monoclonal recombinant. Lorsque des quantit&#xE9;s diff&#xE9;rentes de Fluorinert ont &#xE9;t&#xE9; ajout&#xE9;s au milieu de culture cellulaire, une am&#xE9;lioration dose-d&#xE9;pendante de la croissance cellulaire a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e dans les deux carr&#xE9;s classique et profonde des plaques 96 puits. Lorsque Fluorinert suffisante &#xE9;tait pr&#xE9;sent dans la culture, le taux de croissance cellulaire, la densit&#xE9; cellulaire de pointe, et les niveaux de production de prot&#xE9;ines recombinantes obtenus dans le carr&#xE9; de profondeur 96-puits &#xE9;taient comparables &#xE0; des cultures en flacons agit&#xE9;s a&#xE9;r&#xE9;s. Bien que Fluorinert est connu pour dissoudre des gaz comme l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne et de CO (2), il ne se dissout pas, ni extraire des composants du milieu, tels que le glucose, le lactate, ou des acides amin&#xE9;s. Nous concluons que Fluorinert m&#xE9;lange avec la culture des m&#xE9;dias est un mod&#xE8;le appropri&#xE9; pour la miniaturisation de d&#xE9;veloppement de lign&#xE9;es cellulaires et l&#x26;#39;optimisation des processus. Croissance normale des cellules et la productivit&#xE9; cellulaire peut &#xEA;tre obtenue avec un agitateur standard sans la n&#xE9;cessit&#xE9; pour toute une a&#xE9;ration suppl&#xE9;mentaire ou une agitation vigoureuse. &#xA9; 2011 American Institute of Chemical Engineers Biotechnol. Prog., 2012.

Fluorinert, un transporteur d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne, am&#xE9;liore les performances de la culture cellulaire sur la place de Deep plaques &#xE0; 96 puits en facilitant le transfert d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne

In Bioprozess-Entwicklung wurde die 96er Plattenformat weithin f&uuml;r High-Throughput-Screening der Zelle, um Linie oder Kultur Produktionsbedingungen verwendet. Jedoch nicht Zelle Suspensionskulturen in konventionellen 96-Well-Platten oft hohe Zelldichte unter normalen r&uuml;hren vermutlich aufgrund von Einschr&auml;nkungen in der Sauerstoff-Transfer zu erreichen. Obwohl energischere Unruhe Gas in 96-Well-Plattenformat verbessern kann, bedarf es oft spezielle Instrumente. In diesem Bericht haben wir Fluorinert, ein biologisch inert Perfluorcarbon, Sauerstoff in 96-Well-Platte verbessern und das Wachstum von einer chinesischen Hamster Ovary-Zelllinie Ausdr&uuml;cken einen rekombinanten monoklonaler Antik&ouml;rper aktivieren. Wenn das Zellkulturmedium unterschiedliche Mengen an Fluorinert hinzugef&uuml;gt wurden, wurde eine dosisabh&auml;ngige Verbesserung Zellwachstum in sowohl konventionelle als auch tief Platz 96-Well-Platten beobachtet. Als ausreichende Fluorinert pr&auml;sent in der Kultur, die Wachstumsrate der Zelle, die Gipfel-Zelldichte war und rekombinanter Protein Produktionsniveaus in erreicht waren tief Platz 96-Wells Kulturen in Flaschen, Hinterl&uuml;ftete sch&uuml;tteln vergleichbar. Fluorinert ist zwar bekannt, Gase wie Sauerstoff und CO(2) aufzul&ouml;sen, es nicht aufl&ouml;sen noch Medium-Komponenten, wie Glukose, Laktat oder Aminos&auml;uren zu extrahieren. Wir schlie&szlig;en, dass Fluorinert mit Kultur Medien mischen ein geeignetes Modell zur Miniaturisierung der Zelle Zeile Entwicklung und Prozessoptimierung. Richtige Zelle Wachstum und Porenbetonsteinen Produktivit&auml;t erhalten Sie mit einer Norm Shaker ohne die Notwendigkeit f&uuml;r zus&auml;tzliche Bel&uuml;ftung oder energischen Aufregung. &copy; 2011 American Institute of Chemical Engineers Biotechnol. PROG, 2012.

Fluorinert, ein Sauerstoff-Tr&auml;ger, verbessert die Zelle Kultur Leistung in tiefen Platz 96-Well-Platten durch Sauerstoff-Transfer zu erleichtern.

Nello sviluppo di bioprocess, il formato di piastra 96 pozzetti &egrave; stato ampiamente usato per high-throughput screening delle condizioni di produzione cella linea o cultura. Tuttavia, colture di cellule di sospensione in piastre da 96 pozzetti tradizionali spesso non riescono a raggiungere densit&agrave; alta cella sotto agitazione normale, presumibilmente a causa di vincoli nel trasferimento di ossigeno. Anche se pi&ugrave; vigorosa agitazione pu&ograve; migliorare il trasferimento di gas in formato piastra 96 pozzetti, spesso richiede strumenti specializzati. In questa relazione, abbiamo impiegato liquido, un perfluorocarbone biologicamente inerte, per migliorare il trasferimento di ossigeno nella piastra 96 pozzetti e per consentire la crescita di una linea di cellule di ovaio di criceto cinese esprimendo un anticorpo monoclonale ricombinante. Quando diverse quantit&agrave; di liquido sono stati aggiunti al terreno di coltura delle cellule, un miglioramento di dose-dipendente nella crescita delle cellule &egrave; stato osservato in piastre da 96 pozzetti convenzionali e profondo quadrati. Quando liquido sufficiente era presente nella cultura, il tasso di crescita delle cellule, la densit&agrave; delle cellule di picco, raggiunto livelli di produzione di proteine ricombinanti 96-pozzi profondi quadrati erano paragonabili a culture in matracci shake ventilata. Anche se il liquido &egrave; conosciuto per sciogliere gas come ossigeno e mentre, non sciogliere n&eacute; estrarre componenti medi, quali glucosio, lattato o amminoacidi. Possiamo concludere che il liquido di miscelazione con cultura media &egrave; un modello adatto per la miniaturizzazione della cella linea processi di sviluppo e ottimizzazione. Cella corretta crescita e cellulare la produttivit&agrave; pu&ograve; essere ottenuta con un agitatore standard senza la necessit&agrave; di qualsiasi ulteriore aerazione o agitazione vigorosa. &copy; 2011 American Institute of Chemical Engineers Biotechnol. PROG., 2012.

Liquido, un vettore di ossigeno, migliora le prestazioni di cultura cellulare in piastre da 96 pozzetti profondi Piazza facilitando il trasferimento di ossigeno.

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PROG&#x3002;&#x3001;2012&#x3002;

&#x30D5;&#x30ED;&#x30EA;&#x30CA;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x7D20;&#x79FB;&#x52D5;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30C7;&#x30A3;&#x30FC;&#x30D7;&#xB7;&#x30B9;&#x30AF;&#x30A8;&#x30A2;96&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x6027;&#x80FD;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;

Bioprocess &#xAC1C;&#xBC1C;, 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC120; &#xB610;&#xB294; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAC80;&#xC5F4;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xC874;&#xC758; 96-&#xC798; &#xD310;&#xC5D0; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC790;&#xC8FC; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xB3D9;&#xC694;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC00;&#xB3C4; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xC2E4;&#xD328; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xD65C;&#xBC1C; &#xD55C; &#xAD50; &#xBC18; 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC00;&#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC545;&#xAE30; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Fluorinert, &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xD65C;&#xC131; perfluorocarbon 96 &#xC74C; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xACE0;&#xC6A9;. Fluorinert &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC591;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xAC1C;&#xC120; &#xC885;&#xB798;&#xC640; &#xAE4A;&#xC740; &#xAD11;&#xC7A5; 96-&#xC798; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; Fluorinert &#xBB38;&#xD654;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC728;, &#xD53C;&#xD06C; &#xC140; &#xBC00;&#xB3C4;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xC131; &#xB54C; &#xAE4A;&#xC740; &#xAD11;&#xC7A5; 96-&#xC6F0; &#xC2A4; &#xD1B5;&#xD48D;&#xC774; &#xC250;&#xC774;&#xD06C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xD06C;&#xC5D0; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. Fluorinert&#xC740; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640; CO(2)&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xAC00;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBD84;&#xD574; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xB85D;, &#xD558;&#xC9C0; &#xD574;&#xC0B0;&#xB3C4; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;, &#xC816; &#xC0B0;, &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xB4F1; &#xC911;&#xAC04; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xAC83;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBB38;&#xD654; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4; Fluorinert &#xD63C;&#xD569; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xC758; &#xC18C;&#xD615;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860;. &#xCD94;&#xAC00; &#xD1B5; &#xAE30; &#xD1B5;&#xD48D; &#xB610;&#xB294; &#xD65C;&#xBC1C; &#xD55C; &#xAD50; &#xBC18;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xD45C;&#xC900; &#xC250;&#xC774; &#xCEE4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC131;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &copy; 2011 &#xBBF8;&#xAD6D; &#xD611;&#xD68C; &#xD654;&#xD559; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4; Biotechnol&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Prog., 2012&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fluorinert, &#xC0B0;&#xC18C; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; 96-&#xC798; &#xAE4A;&#xC740; &#xC0AC;&#xAC01; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xC131;&#xB2A5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En el desarrollo de bioprocesos, el formato de placa de 96 pocillos ha sido ampliamente utilizado para la selecci&#xF3;n de alto rendimiento de la l&#xED;nea de producci&#xF3;n de c&#xE9;lulas o de las condiciones de cultivo. Sin embargo, los cultivos convencionales de suspensi&#xF3;n celular en placas de 96 pocillos a menudo no llegan a una alta densidad celular con agitaci&#xF3;n normal, presumiblemente debido a las restricciones en la transferencia de ox&#xED;geno. Aunque m&#xE1;s agitaci&#xF3;n vigorosa puede mejorar la transferencia de gas en el formato de 96 pocillos de placas, que a menudo requiere de instrumentos especializados. En este informe, se emplearon Fluorinert, un perfluorocarburo biol&#xF3;gicamente inerte, para mejorar la transferencia de ox&#xED;geno en placa de 96 pocillos y para permitir el crecimiento de una l&#xED;nea celular de ovario de h&#xE1;mster chino que expresa un anticuerpo monoclonal recombinante. Cuando diferentes cantidades de Fluorinert se a&#xF1;adieron al medio de cultivo celular, una mejora dependiente de la dosis en el crecimiento celular se observ&#xF3; tanto en cuadrada convencional y profundo 96-pocillos. Cuando Fluorinert suficientes estuvo presente en la cultura, la tasa de crecimiento de las c&#xE9;lulas, la densidad celular m&#xE1;xima, y &#x200B;&#x200B;los niveles de producci&#xF3;n de prote&#xED;nas recombinantes obtenidos en la plaza de profundidad de 96 pozos fueron comparables a las culturas en agitar frascos ventilados. Aunque se conoce Fluorinert para disolver gases tales como ox&#xED;geno y CO (2), no se disuelve ni extraer componentes del medio, tales como glucosa, lactato, o amino&#xE1;cidos. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que Fluorinert mezcla con la cultura de los medios de comunicaci&#xF3;n es un modelo adecuado para el desarrollo de la miniaturizaci&#xF3;n de la l&#xED;nea celular y optimizaci&#xF3;n de procesos. El crecimiento celular adecuado y la productividad celular puede obtenerse con un agitador est&#xE1;ndar sin necesidad de ning&#xFA;n aireaci&#xF3;n adicional o agitaci&#xF3;n vigorosa. &#xA9; 2011 Instituto Americano de Ingenieros Qu&#xED;micos Biotechnol. Prog. De 2012.

Fluorinert, un portador de ox&#xED;geno, mejora el rendimiento de Cultivos Celulares en la Plaza de profunda placas de 96 pocillos, facilitando la transferencia de ox&#xED;geno

Yung-Shyeng Tsao

Merck Research Laboratory

Merck & Co., Inc

A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics