Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent <em>In Situ</em> Hybridization (FISH)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

University of Copenhagen

Copenhagen University Hospital (Rigshospitalet)

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&#x53CC;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x759F;&#x75BE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x3002;

There is a need for improved methods for in situ localization of surface proteins on Plasmodium falciparum-infected erythrocytes to help understand how these antigens are trafficked to, and positioned within, the host cell membrane. This protocol for confocal immunofluorescence microscopy combines surface antigen labeling on live cells with subsequent fixation and permeabilization, which enables antibodies to penetrate the cell and label internal antigens. The key steps of the protocol are as follows: indirect labeling of the surface antigen using a fluorescently tagged secondary antibody; fixation and permeabilization; indirect labeling of the internal antigen using a secondary antibody tagged with a spectrally distinct fluorescent dye; and detection of the differentially labeled antigens using a laser scanning confocal microscope. The protocol can be completed in approximately 7 h. Although the protocol is discussed here in the context of malaria parasite-infected cells, it can also be modified to visualize the membrane and intracellular distribution of surface and internal proteins in other eukaryotic cells.

Dual fluorescence labeling of surface-exposed and internal proteins in erythrocytes infected with the malaria parasite Plasmodium falciparum.

Il y a un besoin d&#39;am&eacute;lioration des m&eacute;thodes pour la localisation in situe de la surface des prot&eacute;ines sur les &eacute;rythrocytes de Plasmodium falciparum-infect&eacute;s pour aider &agrave; comprendre comment ces antig&egrave;nes sont trafiqu&eacute;es vers et positionn&eacute;s au sein de la membrane cellulaire de l&#39;h&ocirc;te. Le pr&eacute;sent protocole pour la microscopie confocale immunofluorescence combine l&#39;antig&egrave;ne de surface de marquage sur des cellules vivantes avec fixation ult&eacute;rieure et perm&eacute;abilisation, ce qui permet de p&eacute;n&eacute;trer la cellule et d&#39;&eacute;tiqueter les antig&egrave;nes internes des anticorps. Les &eacute;tapes cl&eacute;s du protocole sont les suivants : marquage indirecte de l&#39;antig&egrave;ne de surface &agrave; l&#39;aide d&#39;un anticorps secondaire fluorescent &eacute;tiquet&eacute; ; fixation et permeabilization ; marquage indirecte de l&#39;antig&egrave;ne interne &agrave; l&#39;aide d&#39;un anticorps secondaire marqu&eacute; avec un colorant fluorescent spectralement distinct ; et la d&eacute;tection des antig&egrave;nes diff&eacute;remment &eacute;tiquet&eacute;es &agrave; l&#39;aide d&#39;un microscope confocal &agrave; balayage laser. Le protocole peut &ecirc;tre compl&eacute;t&eacute; en environ 7 h. Bien que le protocole est abord&eacute; ici dans le contexte des cellules infect&eacute;es par le parasite de malaria, il peut &eacute;galement &ecirc;tre modifi&eacute;e afin de visualiser la membrane et la distribution intracellulaire des prot&eacute;ines de surfaces et internes dans les autres cellules eucaryotes.

Fluorescence double marquage des prot&eacute;ines de surface expos&eacute;e et internes dans les &eacute;rythrocytes infect&eacute;s par le parasite Plasmodium falciparum.

Besteht ein Bedarf f&uuml;r verbesserte Methoden zur in-situ Lokalisierung der Oberfl&auml;che Proteine auf Plasmodium Falciparum infizierten Erythrozyten um zu verstehen wie diese Antigene gehandelt werden, und innerhalb der Zellmembran Host positioniert. Dieses Protokoll f&uuml;r konfokale Immunofluoreszenz-Mikroskopie verbindet Oberfl&auml;chenantigen Beschriftung auf lebenden Zellen mit anschlie&szlig;enden Fixierung und Permeabilization, die Antik&ouml;rper gegen die Zelle zu durchdringen und beschriften interne Antigene erm&ouml;glicht. Die wichtigsten Schritte des Protokolls sind wie folgt: indirekte Kennzeichnung von den Oberfl&auml;chenantigen mit einen Leuchtstoff markierte Sekund&auml;rantik&ouml;rper; Fixierung und Permeabilization; indirekte Kennzeichnung des internen Antigens mit einen Sekund&auml;rantik&ouml;rper, markiert mit einer Spektral unterschiedliche Leuchtstofff&auml;rbung; und Erkennung der differentiell beschriftete Antigene mit einen Laser-scanning-Konfokales Mikroskop. Das Protokoll kann in etwa 7 Stunden abgeschlossen werden. Obwohl das Protokoll im Zusammenhang mit Malaria Parasit-infizierten Zellen hier diskutiert wird, kann es auch ge&auml;ndert werden, um die Membran und intrazellul&auml;re Verteilung von Oberfl&auml;chen- und interne Proteine in anderen eukaryotischen Zellen zu visualisieren.

Dual Fluoreszenz Kennzeichnung der Oberfl&auml;che ausgesetzt und interne Proteine in Erythrozyten infiziert mit der Malariaparasit Plasmodium Falciparum.

Non c&#39;&egrave; bisogno di metodi pi&ugrave; efficaci per localizzazione in situ della superficie proteine sugli eritrociti infettati da falciparum Plasmodium per aiutare a capire come questi antigeni sono trafficate a e posizionate all&#39;interno, la membrana della cellula ospite. Questo protocollo per la microscopia di immunofluorescenza confocale combina l&#39;antigene di superficie dell&#39;etichettatura su cellule vive con conseguente fissazione e permeabilization, che permette di anticorpi penetrare la cellula e l&#39;etichetta interni degli antigeni. I passaggi chiave del protocollo sono come segue: etichettatura indiretta dell&#39;antigene di superficie utilizzando un anticorpo secondario fluorescente contrassegnato; fissazione e permeabilization; etichettatura indiretta dell&#39;antigene interna utilizzando un anticorpo secondario contrassegnato un colorante fluorescente spettralmente distinto; e rilevamento degli antigeni differenzialmente etichettati con microscopio confocale a scansione laser. Il protocollo pu&ograve; essere completato in circa 7 h. Anche se il protocollo &egrave; discusso qui, nel contesto della malaria parasite-cellule infette, pu&ograve; anche essere modificato per visualizzare la membrana e la distribuzione intracellulare delle proteine di superficie e interne in altre cellule eucariote.

Doppia fluorescenza etichettatura delle proteine di superficie esposta e interne negli eritrociti infettati con il parassita della malaria Plasmodium falciparum.

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&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x8868;&#x9762;&#x9732;&#x51FA;&#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x86CD;&#x5149;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Plasmodium falciparum &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xB0B4;, &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD45C;&#xBA74;&#xC758; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAC1C;&#xC120;&#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; confocal &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6C4;&#xC18D; &#xACE0;&#xC815; &#xBC0F; permeabilization &#xC140;&#xC5D0; &#xCE68;&#xD22C; &#xD558; &#xACE0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xB77C;&#xBCA8; &#xD45C;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0; &#xACB0;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: &#xAC04;&#xC811; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBD99;&#xC77C; &#xD0DC;&#xADF8;&#xAC00; &#xC774;&#xCC28; &#xD56D; &#xCCB4;;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0; &#xACE0;&#xC815; &#xBC0F; permeabilization; spectrally &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC;; &#xD0DC;&#xADF8;&#xB85C; &#xC774;&#xCC28; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC6D0;&#xC758; &#xAC04;&#xC811; &#xB77C;&#xBCA8; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCC28;&#xB3D9; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD0D0;&#xC9C0;&#xB294; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB808;&#xC774;&#xC800;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xC57D; 7 h&#xC5D0; &#xC644;&#xB8CC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC740; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;, &#xB9C9; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC218;&#xC815; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xD615;&#xAD11; &#xB77C;&#xBCA8; Plasmodium falciparum &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xACFC; &#xAC10;&#xC5FC;.

Hay una necesidad de mejorar los m&eacute;todos para la localizaci&oacute;n in situ de superficie prote&iacute;nas en eritrocitos de Plasmodium falciparum infectados para ayudar a comprender c&oacute;mo estos ant&iacute;genos son traficadas a y colocadas dentro de la membrana de la c&eacute;lula hu&eacute;sped. Este protocolo para microscopia confocal inmunofluorescencia combina el ant&iacute;geno de superficie de etiquetado en c&eacute;lulas vivas con fijaci&oacute;n posterior y permeabilizaci&oacute;n, que permite anticuerpos penetrar en la c&eacute;lula y etiqueta ant&iacute;genos internos. Los pasos clave del protocolo son los siguientes: etiquetado indirecta del ant&iacute;geno superficial usando un anticuerpo secundario fluorescencia de etiquetado; fijaci&oacute;n y permeabilizaci&oacute;n; Etiquetado indirecta del ant&iacute;geno interno usando un anticuerpo secundario etiquetado con un colorante fluorescente espectralmente distinto; y detecci&oacute;n de los ant&iacute;genos diferencialmente etiquetados utilizando un microscopio confocal de l&aacute;ser. El protocolo se puede completar en aproximadamente 7 h. Aunque el protocolo se discute aqu&iacute; en el contexto de las c&eacute;lulas infectadas por el par&aacute;sito de la malaria, tambi&eacute;n puede ser modificado para visualizar la membrana y la distribuci&oacute;n intracelular de prote&iacute;nas superficiales e internas en otras c&eacute;lulas eucari&oacute;ticas.

Fluorescencia doble etiquetado de prote&iacute;nas de superficie expuesta e internas en los eritrocitos infectados con el par&aacute;sito de la malaria Plasmodium falciparum.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x5468;&#x671F;&#x548C;&#x5185;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE; (IE) &#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x662F;&#x77E5;&#x4E4B;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B9;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#x759F;&#x75BE;&#x53D1;&#x75C5;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x6765;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x65F6;&#x95F4;&#x65E2;&#x591A;&#x5DEE;&#x8DDD; (G)&#xFF0C;DNA &#x5408;&#x6210; (S) &#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x79BB; (M) &#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x662F;&#x5B9A;&#x4E49;&#x660E;&#x786E;&#xFF0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x53F8;&#x662F;&#x5426;&#x7ACB;&#x5373;&#x8DDF;&#x7740;&#x5288;&#x6838;&#x4FE1;&#x5C01;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5973;&#x513F;&#x88C2;&#x6B96;&#x5B50;&#x53F7;&#x7801;&#x4E0D;&#x9075;&#x5FAA;&#x9884;&#x671F;&#x4ECE;&#x4E8C;&#x8FDB;&#x5236;&#x7684;&#x5206;&#x90E8;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x6570;&#x76F8;&#x7B49;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x96BE;&#x4EE5;&#x89E3;&#x91CA;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x51E0;&#x4F55;&#x6269;&#x5F20;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x540C;&#x6B65;&#x6280;&#x672F;&#x3001; &#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6765;&#x60F3;&#x8C61;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x6280;&#x672F; (FISH) &#x9075;&#x5FAA;&#x7684;&#x79FB;&#x52A8;&#x548C;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x7AEF;&#x7C92;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x623F;&#x5C4B;&#x7684;&#x65F6;&#x673A;&#x548C;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x7B49;&#x6548;&#x9879;&#xFF0C;centriolar &#x7684;&#x6591;&#x5757;&#xFF0C;&#x5F02;&#x6B65;&#x91CD;&#x53E0;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x76F8;&#x5173;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0E;&#x6838;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B; schizogony &#x7684;&#x65B0;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x6539;&#x5584;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x548C;&#x5176;&#x5728;&#x759F;&#x539F;&#x866B; IE &#x5F00;&#x53D1;&#x3001; &#x5C55;&#x793A;&#x5F02;&#x6B65;&#x7684;&#x3001; &#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x6838;&#x53F8; schizogony&#xFF0C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7EA7;&#x6570;&#x7684; centriolar &#x6591;&#x5757;&#x4E0E;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5206;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x51B3;&#x8BAE;&#x3002;

&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x5185;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE; cell cycle &#x548C;&#x5F02;&#x6B65;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x53F8;&#x671F;&#x95F4; schizogony centriolar &#x6591;&#x5757;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

The cell division cycle and mitosis of intra-erythrocytic (IE) Plasmodium falciparum are poorly understood aspects of parasite development which affect malaria molecular pathogenesis. Specifically, the timing of the multiple gap (G), DNA synthesis (S) and chromosome separation (M) phases of parasite mitosis are not well defined, nor whether genome divisions are immediately followed by cleavage of the nuclear envelope. Curiously, daughter merozoite numbers do not follow the geometric expansion expected from equal numbers of binary divisions, an outcome difficult to explain using the standard model of cell cycle regulation. Using controlled synchronisation techniques, confocal microscopy to visualise key organelles and fluorescence in situ hybridization (FISH) to follow the movements and replication of genes and telomeres, we have re-analysed the timing and progression of mitotic events. The asynchronous duplications of the P. falciparum centrosome equivalents, the centriolar plaques, are established and these are correlated with chromosome and nuclear divisions in a new model of P. falciparum schizogony. Our results improve the resolution of the cell cycle and its phases during P. falciparum IE development, showing that asynchronous, independent nuclear division occurs during schizogony, with the centriolar plaques playing a major role in regulating mitotic progression.

The progression of the intra-erythrocytic cell cycle of Plasmodium falciparum and the role of the centriolar plaques in asynchronous mitotic division during schizogony.

Le cycle de division cellulaire et la mitose d&#39;intra &eacute;rythrocytaire (IE) Plasmodium falciparum sont mal compris les aspects du d&eacute;veloppement du parasite qui affectent la pathogen&egrave;se mol&eacute;culaire de paludisme. Plus particuli&egrave;rement, la synchronisation de l&#39;&eacute;cart de multiples (G), synth&egrave;se de l&#39;ADN (S) et des phases de s&eacute;paration (M) du chromosome de la mitose parasite ne sont pas bien d&eacute;finis, ni si les divisions du g&eacute;nome sont imm&eacute;diatement suivis de clivage de l&#39;enveloppe nucl&eacute;aire. Curieusement, la fille m&eacute;rozo&iuml;te num&eacute;ros ne suivent pas l&#39;expansion g&eacute;om&eacute;trique attendue d&#39;un nombre &eacute;gal de divisions binaires, un r&eacute;sultat difficile &agrave; expliquer &agrave; l&#39;aide du mod&egrave;le standard de la r&eacute;gulation du cycle cellulaire. &Agrave; l&#39;aide de techniques de synchronisation contr&ocirc;l&eacute;, microscopie confocale, de visualiser les principaux organites et hybridation in situ fluorescence (FISH) de suivre les mouvements et la r&eacute;plication des g&egrave;nes et des t&eacute;lom&egrave;res, nous avons &eacute;t&eacute; revue le calendrier et la progression des &eacute;v&eacute;nements mitotiques. Les duplications asynchrones des &eacute;quivalents &agrave; P. falciparum centrosome, les centriole plaques, sont &eacute;tablies et ceux-ci sont corr&eacute;l&eacute;s avec chromosome et les divisions nucl&eacute;aires dans un nouveau mod&egrave;le de P. falciparum schizogonie. Nos r&eacute;sultats d&#39;am&eacute;liorer la r&eacute;solution de ses phases au cours du d&eacute;veloppement de l&#39;IE &agrave; P. falciparum, montrant qu&#39;asynchrone, ind&eacute;pendamment de la division nucl&eacute;aire se produit pendant la schizogonie, avec les plaques centriolaire jouant un r&ocirc;le majeur dans la r&eacute;gulation de progression mitotique et le cycle cellulaire.

La progression de la cell cycle intra-&eacute;rythrocytaires de Plasmodium falciparum et le r&ocirc;le des plaques centriolaire dans la division mitotique asynchrone pendant schizogonie.

Der Zyklus der Zellteilung und Mitose von Intra-da (IE) Plasmodium Falciparum sind unzureichend erforscht Aspekte der Parasit Entwicklung die Malaria Molekulare Pathogenese beeinflussen. Insbesondere das Timing der mehrere L&uuml;cke (G), DNA-Synthese (S) und Chromosom Trennung (M) Phasen der Parasit Mitose sind nicht klar definiert, noch ob Genom-Abteilungen unmittelbar sind gefolgt von Spaltung von der Kernh&uuml;lle. Merkw&uuml;rdigerweise folgt Tochter Merozoite Zahlen nicht die geometrische Ausdehnung von parit&auml;tisch von bin&auml;ren Divisionen, schwierig zu erkl&auml;ren, mit das Standardmodell der Zellzykluskontrolle Ergebnis erwartet. Mit kontrollierten synchronisieren Techniken, konfokale Mikroskopie zu wichtigen Organellen und Fluoreszenz-in Situ-Hybridisierung (FISH), die Bewegungen und die Replikation der Gene und der Telomere, folgen visualisieren haben wir das Timing und die Progression der mitotischen Ereignisse genauer. Die asynchronen Wiederholungen von p. Falciparum Zentrosom Entsprechungen, die centriolar Plaques sind etabliert und diese mit Chromosom und nukleare Divisionen in ein neues Modell von p. Falciparum Schizogony korreliert sind. Unsere Ergebnisse verbessern die Aufl&ouml;sung der Zellzyklus und seinen Phasen w&auml;hrend der p. Falciparum IE Entwicklung zeigt, dass die asynchrone, unabh&auml;ngige nukleare Teilung w&auml;hrend der Schizogony, mit der centriolar Plaques, spielen eine wichtige Rolle bei der Regulierung der mitotischen Fortschreiten auftritt.

Das Fortschreiten der Intra-da Cell cycle von Plasmodium Falciparum und die Rolle der centriolar Plaques in asynchronen mitotische Teilung w&auml;hrend der Schizogony.

Il ciclo di divisione cellulare e la mitosi di intra-eritrocitari (IE) Plasmodium falciparum sono scarsamente capiti aspetti dello sviluppo del parassita che possono influenzare la patogenesi molecolare la malaria. In particolare, la temporizzazione del gap multiple (G), cromosoma separazione (M) fasi della mitosi parassita e sintesi del DNA (S) non sono ben definiti, n&eacute; se le divisioni del genoma sono immediatamente seguirono da scissione della busta nucleare. Curiosamente, figlia merozoite numeri non seguono l&#39;espansione geometrica previsto da un uguale numero di divisioni binarie, un risultato difficile da spiegare utilizzando il modello standard di regolazione del ciclo cellulare. Utilizzando tecniche di sincronizzazione controllata, microscopia confocale per visualizzare chiavi organelli e l&#39;ibridazione in situ (FISH) per seguire i movimenti e la replica dei geni e dei telomeri, noi abbiamo rianalizzato i tempi e la progressione degli eventi mitotici. Vengono stabilite le duplicazioni asincrone degli equivalenti centrosoma p. falciparum, le placche di centriolar, e queste sono correlate con cromosoma e divisioni nucleari in un nuovo modello di p. falciparum schizogonia. I nostri risultati migliorano la risoluzione del ciclo cellulare e sue fasi durante lo sviluppo del p. falciparum IE, mostrando che asincrona, indipendente divisione nucleare si verifica durante la schizogonia, con le placche centriolar, giocando un ruolo importante nella regolazione della progressione mitotica.

La progressione della cell cycle intra-eritrocitari del Plasmodium falciparum e il ruolo delle piastre centriolar in asincrono divisione mitotica durante schizogonia.

&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x8D64;&#x8840;&#x7403; (IE) &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x7406;&#x89E3;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3082;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x90E8;&#x9580;&#x304C;&#x3059;&#x3050;&#x306B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x6838;&#x819C;&#x306E;&#x958B;&#x88C2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7; (G) &#x306E; DNA &#x5408;&#x6210; (S) &#x3068;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x96E2; (M) &#x6BB5;&#x968E;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4E0D;&#x601D;&#x8B70;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5A18;&#x306E;&#x30E1;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x6570;&#x5024;&#x7D50;&#x679C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;&#x90E8;&#x9580;&#x304B;&#x3089;&#x7B49;&#x3057;&#x3044;&#x6570;&#x5024;&#x3092;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x305F;&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x62E1;&#x5927;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x540C;&#x671F;&#x6CD5;, &#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3068;&#x86CD;&#x5149; in situ &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#xFF08;&#x9B5A;&#xFF09; &#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3084;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x30C6;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x5317;&#x304C;&#x3002;&#x975E;&#x540C;&#x671F;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x306F;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F53;&#x7B49;&#x4FA1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30AF;&#x304C;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x3068;&#x6838;&#x90E8;&#x9580;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x672A;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x975E;&#x540C;&#x671F;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x6838;&#x5206;&#x88C2;&#x672A;&#x653E;&#x51FA;&#x4E2D;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30D7;&#x30E9;&#x30AF;&#x3068;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;p. &#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; IE &#x958B;&#x767A;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x5185;&#x306E; cell cycle &#x3068;&#x975E;&#x540C;&#x671F;&#x5206;&#x88C2;&#x672A;&#x653E;&#x51FA;&#x4E2D;&#x3067;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; erythrocytic (IE) Plasmodium falciparum &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBD84;&#xC790; &#xBCD1; &#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xC774;&#xD574; &#xCE21;&#xBA74;&#xC740;. &#xD2B9;&#xD788; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; (G) &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC04;&#xACA9;&#xC758; DNA &#xD569;&#xC131; (S) &#xBC0F; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD84;&#xB9AC; (M) &#xB2E8;&#xACC4; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;&#xB3C4; &#xD575; &#xBD09;&#xD22C;&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xAC8C;&#xB188; &#xBD80;&#xC11C; &#xC989;&#xC2DC; &#xC778;&#xC9C0;. &#xD638;&#xAE30;&#xC2EC;, &#xB538; merozoite &#xBC88;&#xD638; &#xAE30;&#xD558;&#xD559;&#xC801; &#xD655;&#xC7A5; &#xB3D9;&#xB4F1;&#xD55C; &#xC22B;&#xC790; &#xC774;&#xC9C4; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC870;&#xC808;&#xC758; &#xD45C;&#xC900; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xC0C1;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xAE30;&#xBC95;, &#xC8FC;&#xC694; organelles &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; (&#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;)&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; telomeres, &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558;&#xB294; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xBC0F; mitotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589; re-analysed&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;. P. falciparum centrosome &#xB4F1;&#xAC00;&#xBB3C; centriolar &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C;&#xC758; &#xBE44;&#xB3D9;&#xAE30; &#xC911;&#xBCF5; &#xC124;&#xCE58; &#xB418; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC640; &#xD575; &#xBD84;&#xC5F4; P. falciparum schizogony&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xBC0F; &#xBE44;&#xB3D9;&#xAE30;, &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801; &#xC6D0;&#xC790;&#xB825; &#xBD80;&#xBB38; mitotic &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; centriolar &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C;&#xC640; schizogony, &#xC911; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; P. falciparum IE &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1;.

Plasmodium falciparum&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; erythrocytic cell cycle &#xBC0F; schizogony &#xB3D9;&#xC548; &#xBE44;&#xB3D9;&#xAE30; mitotic &#xBD80;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; centriolar &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;.

El ciclo de divisi&oacute;n celular y la mitosis de intra-eritroc&iacute;tica (IE) Plasmodium falciparum son mal entendidos los aspectos del desarrollo de par&aacute;sitos que afectan la patogenia molecular de la malaria. Espec&iacute;ficamente, la sincronizaci&oacute;n de la brecha m&uacute;ltiples (G), (S) de la s&iacute;ntesis de ADN y cromosoma separaci&oacute;n (M) fases de la mitosis de par&aacute;sito no est&aacute;n bien definidas, ni si las divisiones de genoma son inmediatamente seguido por clivaje de la envoltura nuclear. Curiosamente, hija merozoito n&uacute;meros no sigue la expansi&oacute;n geom&eacute;trica de igual n&uacute;mero de divisiones binarias, un resultado dif&iacute;cil de explicar utilizando el modelo est&aacute;ndar de la regulaci&oacute;n del ciclo celular. Mediante t&eacute;cnicas de sincronizaci&oacute;n controlada, microscop&iacute;a confocal para visualizar org&aacute;nulos claves e hibridaci&oacute;n fluorescente in situ (FISH) para seguir los movimientos y la replicaci&oacute;n de los genes y los tel&oacute;meros, se volvieron a hemos analizar el momento y la progresi&oacute;n de eventos mit&oacute;ticos. Se establecen las duplicaciones asincr&oacute;nicas de los equivalentes del centrosoma de p. falciparum, las placas centriolar, y &eacute;stos se correlacionan con el cromosoma y divisiones nucleares en un nuevo modelo de schizogony de p. falciparum. Nuestros resultados mejoran la resoluci&oacute;n del ciclo celular y sus fases durante el desarrollo de la IE de p. falciparum, mostrando que asincr&oacute;nica, independiente de la Divisi&oacute;n nuclear se produce durante la schizogony, con las placas centriolar juega un gran papel en la regulaci&oacute;n de la progresi&oacute;n de la mitosis.

La progresi&oacute;n de la cell cycle intra-eritroc&iacute;tica de Plasmodium falciparum y el papel de las placas centriolar en Divisi&oacute;n mit&oacute;tica asincr&oacute;nica durante schizogony.

&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; 1 (PfEMP1) &#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;IE&#xFF09;&#xFF0C;cytoadhesion &#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x4F5C;&#x7528;&#x6297;&#x539F;&#x6027;&#x53D8;&#x5F02;&#x548C;&#x759F;&#x75BE;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#x3002;&#x53D8;&#x4F53;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5171;&#x8BC6;&#x662F;&#x7531;&#x4E00;&#x4E2A; var &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A; PfEMP1 &#x6BCF;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x4E00;&#x6B21;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8861;&#x91CF; var mrna &#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x5B9E;&#x65F6; Q pcr&#x3001; &#x5206;&#x6790; var &#x57FA;&#x56E0;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x7531;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9C7C;&#x548C;&#x76F4;&#x63A5;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F; PfEMP1 &#x4E0E; cytoadhesion &#x5728;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6297;&#x4F53;&#x9009;&#x5B9A;&#x759F;&#x539F;&#x866B; 3 7 &#x514B;&#x9686;&#x682A;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D3B;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3001; &#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x9ECF;&#x9644;&#x529B;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E00;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x671D;&#x670D;&#x540C;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; var &#x57FA;&#x56E0;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A; ie &#x6D4F;&#x89C8;&#x5668;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x548C;&#x751F;&#x7406;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x759F;&#x75BE;&#x53D1;&#x75C5;&#xFF0C;&#x6B64;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x671D;&#x670D;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4EE5;&#x7ED1;&#x5B9A; CD31/PECAM1 &#x548C; CD54/ICAM1 &#x5E76;&#x9075;&#x5B88;&#x4E24;&#x6B21;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6709;&#x5907;&#x9009;&#x6848;&#x6587; PfEMP1 &#x53EA;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;PfEMP1 &#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x8FBE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x9700;&#x8981;&#x91CD;&#x65B0;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7C98;&#x9644;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x63A5;&#x53D7;&#x8303;&#x5F0F;&#x7684;&#x7EDD;&#x5BF9;&#x4E92;&#x65A5; var &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;

&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C; PfEMP1 &#x6297;&#x539F;&#x5BF9;&#x5355;&#x4E2A;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x65B9;&#x4FBF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; ICAM1 &#x548C; PECAM1&#x3002;

The Plasmodium falciparum erythrocyte membrane protein 1 (PfEMP1) antigens play a major role in cytoadhesion of infected erythrocytes (IE), antigenic variation, and immunity to malaria. The current consensus on control of variant surface antigen expression is that only one PfEMP1 encoded by one var gene is expressed per cell at a time. We measured var mRNA transcript levels by real-time Q-PCR, analysed var gene transcripts by single-cell FISH and directly compared these with PfEMP1 antigen surface expression and cytoadhesion in three different antibody-selected P. falciparum 3D7 sub-lines using live confocal microscopy, flow cytometry and in vitro adhesion assays. We found that one selected parasite sub-line simultaneously expressed two different var genes as surface antigens, on single IE. Importantly, and of physiological relevance to adhesion and malaria pathogenesis, this parasite sub-line was found to bind both CD31/PECAM1 and CD54/ICAM1 and to adhere twice as efficiently to human endothelial cells, compared to infected cells having only one PfEMP1 variant on the surface. These new results on PfEMP1 antigen expression indicate that a re-evaluation of the molecular mechanisms involved in P. falciparum adhesion and of the accepted paradigm of absolutely mutually exclusive var gene transcription is required.

Surface co-expression of two different PfEMP1 antigens on single plasmodium falciparum-infected erythrocytes facilitates binding to ICAM1 and PECAM1.

La prot&eacute;ine de membrane &eacute;rythrocytaire Plasmodium falciparum 1 (PfEMP1) antig&egrave;nes jouent un r&ocirc;le majeur dans la cytoadhesion des &eacute;rythrocytes infect&eacute;s (IE), la variation antig&eacute;nique et l&#39;immunit&eacute; au paludisme. Le consensus actuel sur le contr&ocirc;le de l&#39;expression de l&#39;antig&egrave;ne de surface du type variant est que seul PfEMP1 cod&eacute;e par un g&egrave;ne de var est exprim&eacute; par cellule &agrave; la fois. Nous avons mesur&eacute; les niveaux de transcription ARNm var par Q-PCR en temps r&eacute;el, analys&eacute; var transcription des g&egrave;nes de poisson unicellulaire et directement compar&eacute;e avec l&#39;expression de surface de l&#39;antig&egrave;ne PfEMP1 et cytoadhesion en trois sous-lignes diff&eacute;rents anticorps s&eacute;lectionn&eacute;s P. falciparum 3 7 &agrave; l&#39;aide de direct microscopie confocale, cytom&eacute;trie en flux et tests d&#39;adh&eacute;rence in vitro. Nous avons trouv&eacute; qu&#39;un parasite s&eacute;lectionn&eacute; deux g&egrave;nes diff&eacute;rents var de sous-ligne en m&ecirc;me temps exprim&eacute; comme antig&egrave;nes de surface, sur IE seul. Ce qui est important, et de pertinence physiologique &agrave; la pathog&eacute;n&egrave;se d&#39;adh&eacute;rence et de la malaria, cette sous-ligne parasite a &eacute;t&eacute; retrouv&eacute;e &agrave; lier les deux CD31/PECAM1 et CD54/ICAM1 et &agrave; adh&eacute;rer deux fois plus que les cellules endoth&eacute;liales efficacement aux humains, par rapport aux cellules infect&eacute;es apr&egrave;s avoir qu&#39;une seule variante de PfEMP1 sur la surface. Ces nouveaux r&eacute;sultats sur l&#39;expression de l&#39;antig&egrave;ne PfEMP1 indiquent qu&#39;il faut une r&eacute;&eacute;valuation des m&eacute;canismes mol&eacute;culaires impliqu&eacute;s dans l&#39;adh&eacute;sion &agrave; P. falciparum et du paradigme de la transcription du g&egrave;ne var absolument mutuellement accept&eacute;.

Surface co-expression de deux antig&egrave;nes diff&eacute;rents de PfEMP1 sur les &eacute;rythrocytes seul plasmodium falciparum-infect&eacute;s facilite la liaison &agrave; ICAM1 et PECAM1.

Das Plasmodium Falciparum Erythrozyten Membranprotein 1 (PfEMP1) Antigene spielen eine wichtige Rolle im Cytoadhesion der infizierten Erythrozyten (IE), Antigene Variation und Immunit&auml;t gegen Malaria. Der aktuelle Konsens zur Kontrolle der variant Oberfl&auml;chenantigen Ausdruck ist, dass nur ein PfEMP1 eine Var-Gen codiert pro Zelle zu einem Zeitpunkt ausgedr&uuml;ckt wird. Wir Var-mRNA-Transkript-Stufen von Echtzeit-Q-PCR gemessen und analysiert Var gen Abschriften von Einzelzellen-FISH und direkt verglichen diese mit PfEMP1 Antigen Oberfl&auml;che Ausdruck und Cytoadhesion in drei verschiedenen Antik&ouml;rper-ausgew&auml;hlte p. Falciparum 3 7 Sub-lines mit live confocal Mikroskopie, Durchflusszytometrie und in-vitro Adh&auml;sion Assays. Wir fanden, dass ein Parasit der ausgew&auml;hlten Unterthema gleichzeitig ausgedr&uuml;ckt zwei verschiedene Var Gene als OBERFL&Auml;CHENANTIGENE, auf einzelne IE. Wichtig ist, und von physiologischer Bedeutung f&uuml;r Adh&auml;sion und Malaria Pathogenese dieser Parasit Unterthema fand CD31/PECAM1 und CD54/ICAM1 binden und halten doppelt so effizient zu menschliche Endothelzellen, verglichen mit infizierten Zellen haben nur eine PfEMP1 Variante auf der Oberfl&auml;che. Diese neuen Ergebnisse auf PfEMP1 Antigen Ausdruck anzugeben, dass eine Neubewertung der molekularen Mechanismen p. Falciparum Adh&auml;sion beteiligt und des akzeptierten Paradigmas der absolut gegenseitig Var gen Transkription erforderlich ist.

Oberfl&auml;che Koexpression von zwei verschiedenen PfEMP1 Antigenen auf einzelne Plasmodium Falciparum infizierten Erythrozyten erleichtert das Binden an ICAM1 und PECAM1.

La proteina di membrana eritrocitaria di Plasmodium falciparum 1 (PfEMP1) antigeni giocano un ruolo importante nella cytoadhesion degli eritrociti infetti (IE), variazione antigenica e l&#39;immunit&agrave; alla malaria. L&#39;attuale consenso sul controllo dell&#39;espressione dell&#39;antigene di superficie variante &egrave; che solo uno PfEMP1 codificato da un gene di var &egrave; espresso per ogni cella in un momento. Abbiamo misurato i livelli di trascrizione di mRNA var da Q-PCR in tempo reale, analizzate le trascrizioni del gene var da pesce a cella singola e direttamente confrontato questi con espressione superficie PfEMP1 dell&#39;antigene e cytoadhesion in tre differenti anticorpi selezionato p. falciparum 7 3 sub-lines utilizzando live microscopia confocal, citometria a flusso e dosaggi di adesione in vitro. Abbiamo trovato che un parassita selezionato due geni differenti var parte contemporaneamente espresso come antigeni superficiali, su IE unico. Importante, e di rilevanza fisiologica alla patogenesi della malaria e di adesione, questa parte del parassita &egrave; stato trovato per associare sia CD31/PECAM1 e CD54/ICAM1 e aderire due volte pi&ugrave; efficiente a cellule endoteliali, rispetto alle cellule infette, avendo solo una variante PfEMP1 sulla superficie. Questi nuovi risultati sull&#39;espressione dell&#39;antigene PfEMP1 indicano che una rivalutazione dei meccanismi molecolari coinvolti nell&#39;adesione di p. falciparum e del paradigma accettato della trascrizione del gene var escludono assolutamente &egrave; necessaria.

Superficie co-expression di due diversi antigeni PfEMP1 su eritrociti singolo plasmodium falciparum-infettati facilita l&#39;associazione di ICAM1 e PECAM1.

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 1 (PfEMP1) &#x6297;&#x539F;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x8D64;&#x8840;&#x7403; &#xFF08;IE&#xFF09; &#x306E; cytoadhesion &#x3067;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x6297;&#x539F;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3078;&#x306E;&#x8010;&#x6027;&#x3002;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E; var &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 1 &#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x306E; PfEMP1 &#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;var mRNA &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; &#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; Q PCR &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x9B5A;&#x306E; var &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;PfEMP1 &#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x73FE;&#x3068; cytoadhesion &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073; in vitro &#x3067;&#x4ED8;&#x7740;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; 3 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x9078;&#x629E; p. &#x306E; falciparum 3 7 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x5358;&#x4E00; IE &#x3067;&#x8868;&#x9762;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; var &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x305D;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; CD31/PECAM1 &#x3068; CD54/ICAM1 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x4ED8;&#x7740;&#x3059;&#x308B;&#x500D;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E; 1 &#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x306E; PfEMP1 &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; PfEMP1 &#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x7D76;&#x5BFE;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306A; var &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x53D7;&#x3051;&#x5165;&#x308C;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x518D;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x5358;&#x4E00;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x4E0A;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B; PfEMP1 &#x6297;&#x539F;&#x306E; ICAM1 &#x3068; PECAM1 &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Plasmodium falciparum &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1 (PfEMP1) &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; (IE)&#xC758; cytoadhesion &#xC8FC;&#xC694; &#xC5ED;&#xD560; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBCC0;&#xC774; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xBA74;&#xC5ED;. &#xBCC0;&#xD615; &#xD45C;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC2DD;&#xC758; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xD604;&#xC7AC; &#xD569;&#xC758; &#xD55C; &#xBC88;&#xC5D0; &#xD558;&#xB098;&#xC758; PfEMP1 &#xD55C; var &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xC140;&#xB2F9; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; Q PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; var mRNA &#xB300; &#xBCF8; &#xC218;&#xC900; &#xCE21;&#xC815; var &#xC9C4; &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; PfEMP1 &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, cytometry &#xC811;&#xCC29; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC120;&#xD0DD; P. falciparum 3D 7 sub-lines&#xC5D0; cytoadhesion&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; &#xADF8; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xD558;&#xC704; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; var &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; IE&#xC5D0;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBCD1;&#xC744; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC758;&#xC774; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xD558;&#xC704; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; CD31/PECAM1 &#xBC0F; CD54/ICAM1 &#xBC0F; &#xC900;&#xC218;&#xB97C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xB450; &#xBC88; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD558;&#xB098;&#xC758; PfEMP1 &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. PfEMP1 &#xD56D; &#xC6D0; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xACB0;&#xACFC; P. falciparum &#xC811;&#xCC29;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758;&#xC640; &#xC808;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC2DC; var &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xB41C; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784;&#xC758; &#xC7AC;&#xD3C9;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD568;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C; plasmodium falciparum &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; PfEMP1 &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xBA74; co-expression ICAM1 &#xBC0F; pecam1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prote&iacute;na de la membrana del eritrocito Plasmodium falciparum 1 (PfEMP1) ant&iacute;genos juegan un papel importante en la cytoadhesion de eritrocitos infectados (IE), variaci&oacute;n antig&eacute;nica e inmunidad a la malaria. El consenso actual sobre el control de la expresi&oacute;n del ant&iacute;geno superficial de la variante es que solamente un PfEMP1 codificada por un gen de var se expresa por la c&eacute;lula en un momento. Se midieron los niveles de transcripci&oacute;n de mRNA var por Q-PCR en tiempo real, analizaron var transcritos de genes por peces unicelular y compar&oacute; directamente con la expresi&oacute;n superficial del ant&iacute;geno PfEMP1 y cytoadhesion en tres subl&iacute;neas de diferentes seleccionados por el anticuerpo p. falciparum 3 7 usando microscopia confocal viva, citometr&iacute;a de flujo y ensayos de adherencia in vitro. Hemos encontrado un par&aacute;sito seleccionado dos genes de diferentes var subl&iacute;nea expresada simult&aacute;neamente como ant&iacute;genos de superficies, en IE solo. Lo importante, y de relevancia fisiol&oacute;gica a la patogenesia de la adherencia y la malaria, esta subl&iacute;nea par&aacute;sito fue encontrada para obligar a CD31/PECAM1 tanto CD54/ICAM1 y adherir el doble de c&eacute;lulas endoteliales eficientemente a humanas, en comparaci&oacute;n con tener s&oacute;lo una variante de PfEMP1 en la superficie de c&eacute;lulas infectadas. Estos nuevos resultados sobre la expresi&oacute;n del ant&iacute;geno PfEMP1 indican que se requiere una reevaluaci&oacute;n de los mecanismos moleculares implicados en la adhesi&oacute;n de p. falciparum y el paradigma aceptado de la transcripci&oacute;n del gen de var absolutamente excluyentes.

Superficie coexpresi&oacute;n de dos diversos ant&iacute;genos PfEMP1 en eritrocitos de solo plasmodium falciparum infectados favorece la fijaci&oacute;n ICAM1 y PECAM1.

Membres de la prot&eacute;ine de membrane &eacute;rythrocytaire Plasmodium falciparum 1 (PfEMP1) famille d&#39;antig&egrave;ne adh&eacute;rence sont des contributeurs majeurs &agrave; la pathogen&egrave;se des infections de paludisme &agrave; P. falciparum. Les g&egrave;nes de var PfEMP1 qui sont parmi les plus diverses s&eacute;quences dans la nature, mais les trois g&egrave;nes, var1, var2csa et var3 sont trouvent conserv&eacute;es dans la plupart des g&eacute;nomes parasite. Les formes les plus graves du paludisme sont caus&eacute;es par des parasites exprimant un sous-ensemble des variantes de PfEMP1 conserv&eacute;s sur le plan antig&eacute;nique. Ainsi le PfEMP1 VAR3 omnipr&eacute;sent et conserv&eacute; est d&#39;un int&eacute;r&ecirc;t particulier pour le domaine de la recherche. Preuve d&#39;expression VAR3 sur la surface des &eacute;rythrocytes infect&eacute;s n&#39;a jamais &eacute;t&eacute; pr&eacute;sent&eacute;e, et var3 g&egrave;nes ont &eacute;t&eacute; propos&eacute;es pour &ecirc;tre transcrits et exprim&eacute; diff&eacute;remment du reste des membres de la g&egrave;ne famille de var.

Preuve pour l&#39;expression in vitro et in vivo de la VAR3 conserv&eacute;e (type 3) plasmodium falciparum prot&eacute;ine de la membrane &eacute;rythrocytaire 1.

Mitglieder des Plasmodium Falciparum Erythrozyten Membranprotein 1 (PfEMP1) Haftung Antigen-Familie sind die Hauptverursacher f&uuml;r die Pathogenese der p. Falciparum Malaria-Infektionen. PfEMP1-Codierung Var Gene geh&ouml;ren zu den unterschiedlichsten Sequenzen in der Natur, aber drei Gene, var1, var2csa und var3 findet man in den meisten Parasiten Genome konserviert. Die schwersten Formen der Malaria-Krankheit entstehen durch Parasiten, die eine Teilmenge der antigenetisch konservierten PfEMP1 Varianten zum Ausdruck zu bringen. Somit ist die allgegenw&auml;rtige und konservierten VAR3 PfEMP1 von besonderem Interesse f&uuml;r die Forschung. Nachweis der VAR3 Ausdruck auf der Oberfl&auml;che der infizierten Erythrozyten hat nie vorgelegt worden, und var3 Gene wurden transkribiert und vom Rest der Var gen Familienmitglieder anders ausgedr&uuml;ckt werden vorgeschlagen.

Beweise f&uuml;r in-vitro und in vivo Ausdruck der konservierten VAR3 (Typ 3) Plasmodium Falciparum Erythrozyten Membranprotein 1.

Membri della proteina di membrana eritrocitaria 1 di Plasmodium falciparum (PfEMP1) famiglia dell&#39;antigene di adesione sono maggiori contributori alla patogenesi delle infezioni di malaria p. falciparum. Il codifica PfEMP1 var geni sono tra le pi&ugrave; diverse sequenze in natura, ma tre geni, var1, var2csa e var3 si trovano conservate nella maggior parte dei genomi di parassita. Le forme pi&ugrave; gravi della malattia la malaria sono causate da parassiti che esprimono un sottoinsieme delle varianti PfEMP1 antigenico conservate. Cos&igrave; il PfEMP1 VAR3 onnipresente e conservata &egrave; di particolare interesse per il campo di ricerca. Prove di espressione VAR3 sulla superficie degli eritrociti infetti non sono mai stata presentata e var3 geni sono state proposte per essere trascritto ed espressi in modo diverso dal resto dei membri della famiglia di gene var.

Prove per l&#39;espressione in vitro e in vivo del VAR3 conservati (tipo 3) plasmodium falciparum della membrana eritrocitaria 1.

&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; 1 &#xFF08;PfEMP1&#xFF09; &#x7C98;&#x9644;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x5BB6;&#x4EBA;&#x90FD;&#x662F;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x759F;&#x75BE;&#x611F;&#x67D3;&#x53D1;&#x75C5;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;PfEMP1 &#x7F16;&#x7801;&#x7684; var &#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6700;&#x4E0D;&#x540C;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; var1&#x3001; var2csa &#x548C; var3 &#x90FD;&#x53D1;&#x73B0;&#x4FDD;&#x5B88;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x3002;&#x759F;&#x75BE;&#x75C5;&#x6700;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x662F;&#x7531;&#x8868;&#x8FBE;&#x6297;&#x539F;&#x5B88;&#x6052; PfEMP1 &#x53D8;&#x91CF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x548C;&#x5B88;&#x6052; VAR3 PfEMP1 &#x662F;&#x7814;&#x7A76;&#x9886;&#x57DF;&#x7279;&#x522B;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;&#x4ECE;&#x672A;&#x6536;&#x8FC7; VAR3 &#x8868;&#x8FBE;&#x5BF9;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5DF2;&#x63D0;&#x51FA; var3 &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x8868;&#x793A; var &#x57FA;&#x56E0;&#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x5176;&#x4F59;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5B88;&#x6052; VAR3 &#x7684;&#x8BC1;&#x636E; &#xFF08;&#x7C7B;&#x578B; 3&#xFF09; &#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; 1&#x3002;

Members of the Plasmodium falciparum erythrocyte membrane protein 1 (PfEMP1) adhesion antigen family are major contributors to the pathogenesis of P. falciparum malaria infections. The PfEMP1-encoding var genes are among the most diverse sequences in nature, but three genes, var1, var2csa and var3 are found conserved in most parasite genomes. The most severe forms of malaria disease are caused by parasites expressing a subset of antigenically conserved PfEMP1 variants. Thus the ubiquitous and conserved VAR3 PfEMP1 is of particular interest to the research field. Evidence of VAR3 expression on the infected erythrocyte surface has never been presented, and var3 genes have been proposed to be transcribed and expressed differently from the rest of the var gene family members.

Evidence for in vitro and in vivo expression of the conserved VAR3 (type 3) plasmodium falciparum erythrocyte membrane protein 1.

&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC; (PfEMP1) &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 1 &#x63A5;&#x7740;&#x6297;&#x539F;&#x5BB6;&#x65CF;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2; &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x306B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x8005;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PfEMP1 &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; var &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9593;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;var1&#x3001;var2csa&#x3001;var3 &#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x6297;&#x539F;&#x4FDD;&#x5B58; PfEMP1 &#x4E9C;&#x7A2E;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x3068;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F; VAR3 PfEMP1 &#x306E;&#x7279;&#x306B;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x5206;&#x91CE;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6C7A;&#x3057;&#x3066; VAR3 &#x5F0F;&#x611F;&#x67D3;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068; var3 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x304B;&#x3089; var &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F; VAR3 &#x306E; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0; (&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 3) &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 1&#x3002;

Plasmodium falciparum &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; (PfEMP1) &#xC811;&#xCC29; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD328;&#xBC00;&#xB9AC;&#xB294; P. falciparum &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; pathogenesis&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC790;. Var PfEMP1 &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC790;&#xC5F0; &#xC18D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC21C;&#xC11C; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, var1, var2csa &#xBC0F; v a r 3 &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xD615;&#xD0DC;&#xB294; antigenically &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; PfEMP1 &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4;&#xC640; &#xBCF4;&#xC874; v a r 3 PfEMP1 &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC758; &#xC774;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; v a r 3 &#xC2DD;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70; &#xC801; &#xC81C;&#xC2DC; &#xBC0F; v a r 3 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; var &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xD45C;&#xD604; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; v a r 3&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; (&#xC885;&#xB958; 3) plasmodium falciparum &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1.

Miembros de la prote&iacute;na de la membrana del eritrocito Plasmodium falciparum 1 (PfEMP1) familia de ant&iacute;geno de adherencia son los principales contribuyentes a la patog&eacute;nesis de las infecciones de malaria por p. falciparum. Los codificaci&oacute;n PfEMP1 var genes est&aacute;n entre las m&aacute;s diversas secuencias en la naturaleza, pero tres genes, var1, var2csa y var3 se encuentran conservados en mayor&iacute;a genomas del par&aacute;sito. Las formas m&aacute;s severas de la enfermedad de la malaria son causadas por par&aacute;sitos expresando un subconjunto de variantes antig&eacute;nicamente conservados de PfEMP1. As&iacute; el PfEMP1 VAR3 ubicua y conservada es de particular inter&eacute;s para el campo de la investigaci&oacute;n. Nunca se han presentado pruebas de VAR3 expresi&oacute;n en la superficie de los eritrocitos infectados, y var3 genes se han propuesto ser transcrito y expresado diferentemente del resto de los miembros de familia de gene de var.

Evidencia de la expresi&oacute;n in vitro e in vivo de la conservada VAR3 prote&iacute;na de membrana eritroc&iacute;tica (tipo 3) plasmodium falciparum 1.

Dominique C. Bengtsson

Centre for Medical Parasitology,
Department of International Health,
Immunology & Microbiology,
Faculty of Health Sciences,
Centre for Medical Parasitology, Department of International Health, Immunology & Microbiology, Faculty of Health Sciences

University of Copenhagen

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)