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Clinical Application of <em>Sleeping Beauty</em> and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

U.T. MD Anderson Cancer Center

&#x4E34;&#x5E8A;&#x7EA7; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x9057;&#x4F20;&#x4FEE;&#x9970;&#x662F;&#x5F00;&#x5C55;&#x4EE5;&#x589E;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x63A8;&#x51FA;&#x4E86;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (CAR)&#xFF0C;&#x4F7F; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BC6;&#x522B;&#x7279;&#x5B9A;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x5982; CD19&#xFF0C;&#x53CA;&#x65E9;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x76EE;&#x524D;&#x6B63;&#x5728;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x548C;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#x4E0B;, &#x4E00;&#x4EE3;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x5927;&#x969C;&#x788D;&#x53D1;&#x5C55;&#x9002;&#x5408;&#x8F66;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x6539;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6548;&#x7387;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x9AD8;&#x4F46;&#x5B83;&#x9700;&#x8981;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x5236;&#x9020;&#x7684;&#x6602;&#x8D35;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5206;&#x7EA7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3002;&#x88F8; DNA &#x8D28;&#x7C92; Electrotransfer &#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6548;&#x7387;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6574;&#x5408;&#x4EFB;&#x52A1; ex &#x4F53;&#x5185;&#x6267;&#x884C;&#x9009;&#x62E9;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6709;&#x610F;&#x4E49;&#x7684;&#x6570;&#x5B57;&#xFF0C;CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x6740;&#x706D;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5411;&#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x751F;&#x6210;&#x4E0E;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#xFF0C;&#x5F15;&#x5165; DNA &#x8D28;&#x7C92;&#x4ECE;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;/&#x8F6C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x76F4;&#x63A5;&#x8868;&#x8FBE; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x5728;&#x5185;&#x5B58;&#x4E2D;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; T &#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65E0;&#x836F;&#x7269;&#x9009;&#x62E9;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5F53;&#x52A0;&#x4E0A; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x503C;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7ED3;&#x679C;&#x5FEB;&#x901F;&#x4EA7;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684; CD4(+) &#x548C; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F66;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411; CD19(+) &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E3A; CD19 &#x4F7F;&#x7528;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

Genetic modification of clinical-grade T cells is undertaken to augment function, including redirecting specificity for desired antigen. We and others have introduced a chimeric antigen receptor (CAR) to enable T cells to recognize lineage-specific tumor antigen, such as CD19, and early-phase human trials are currently assessing safety and feasibility. However, a significant barrier to next-generation clinical studies is developing a suitable CAR expression vector capable of genetically modifying a broad population of T cells. Transduction of T cells is relatively efficient but it requires specialized manufacture of expensive clinical grade recombinant virus. Electrotransfer of naked DNA plasmid offers a cost-effective alternative approach, but the inefficiency of transgene integration mandates ex vivo selection under cytocidal concentrations of drug to enforce expression of selection genes to achieve clinically meaningful numbers of CAR(+) T cells. We report a new approach to efficiently generating T cells with redirected specificity, introducing DNA plasmids from the Sleeping Beauty transposon/transposase system to directly express a CD19-specific CAR in memory and effector T cells without drug selection. When coupled with numerical expansion on CD19(+) artificial antigen-presenting cells, this gene transfer method results in rapid outgrowth of CD4(+) and CD8(+) T cells expressing CAR to redirect specificity for CD19(+) tumor cells.

Redirecting specificity of T-cell populations for CD19 using the Sleeping Beauty system.

Modification g&eacute;n&eacute;tique de cellules de T de cliniques de qualit&eacute; est engag&eacute;e &agrave; augmenter la fonction, y compris la redirection de sp&eacute;cificit&eacute; pour l&#39;antig&egrave;ne d&eacute;sir&eacute;e. Nous et autres avons introduit un r&eacute;cepteur d&#39;antig&egrave;ne chim&eacute;rique (voiture) pour activer les lymphocytes T &agrave; reconna&icirc;tre les antig&egrave;nes sp&eacute;cifiques lign&eacute;e tumorale, comme CD19, et les premiers essais humains &eacute;valuent actuellement la s&eacute;curit&eacute; et la faisabilit&eacute;. Cependant, un obstacle important aux &eacute;tudes cliniques de nouvelle g&eacute;n&eacute;ration d&eacute;veloppe un vecteur d&#39;expression adapt&eacute; voiture capable de modifier g&eacute;n&eacute;tiquement une large population de lymphocytes T. Transduction des cellules T est relativement efficace mais elle n&eacute;cessite une fabrication sp&eacute;cialis&eacute;e de virus recombinant qualit&eacute; clinique ch&egrave;re. ELECTROTRANSFERT de plasmides d&#39;ADN nu offre une approche alternative rentable, mais l&#39;inefficacit&eacute; de l&#39;int&eacute;gration du transg&egrave;ne mandats ex vivo s&eacute;lection sous cytocide concentrations du m&eacute;dicament &agrave; appliquer l&#39;expression des g&egrave;nes de s&eacute;lection pour obtenir les num&eacute;ros cliniquement significatives des cellules T CAR(+). Nous rapportons une nouvelle approche pour produire efficacement avec sp&eacute;cificit&eacute; redirig&eacute;e, introduisant des plasmides d&#39;ADN du syst&egrave;me de transposon/transposase de belle au bois dormant d&#39;exprimer directement une voiture CD19 sp&eacute;cifique dans la m&eacute;moire, les cellules T et cellules effectrices T sans s&eacute;lection de m&eacute;dicaments. Lorsqu&#39;il est coupl&eacute; avec une expansion num&eacute;rique sur CD19(+) les cellules pr&eacute;sentatrices d&#39;antig&egrave;ne artificiels, ce g&egrave;ne transfert m&eacute;thode provoque la croissance rapide des cellules CD4 + et CD8 T exprimant la voiture pour rediriger la sp&eacute;cificit&eacute; des cellules tumorales CD19(+).

Rediriger la sp&eacute;cificit&eacute; des populations de lymphocytes T pour CD19 utilisant le syst&egrave;me de la belle au bois dormant.

Genetische Ver&auml;nderung des klinischen-Klasse-T-Zellen ist verpflichtet, Funktion, einschlie&szlig;lich Umleiten Spezifit&auml;t f&uuml;r gew&uuml;nschte Antigen zu erweitern. Wir und andere haben einen Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor (Auto), aktivieren Sie die T-Zellen erkennen Herkunfts-spezifischen Tumor Antigen, z. B. CD19, eingef&uuml;hrt und Fr&uuml;hphase menschliche Studien sind derzeit Beurteilung, Sicherheit und Durchf&uuml;hrbarkeit. Jedoch entwickelt sich ein ernsthaftes Hindernis f&uuml;r zuk&uuml;nftige klinische Studien einen geeigneten Auto Ausdruck Vektor f&auml;hig Breite Teile der Bev&ouml;lkerung von T-Zellen genetisch zu ver&auml;ndern. Transduktion von T-Zellen ist relativ effizient, aber es erfordert spezialisierte Herstellung von teuren klinischen Grad rekombinanten Virus. Electrotransfer nackte DNA Plasmid bietet einen kosteng&uuml;nstigen Alternativen Ansatz, aber die Ineffizienz des Transgens Integration Mandate ex Vivo-Auswahl unter Cytocidal Konzentrationen des Medikaments zur Durchsetzung der Expression von Genen der Auswahl klinisch sinnvolle Zahlen von CAR(+) T-Zellen zu erreichen. Wir berichten einen neuen Ansatz zur effizient Generieren von T-Zellen mit umgeleiteten Spezifit&auml;t, die Einf&uuml;hrung von DNA Plasmide aus dem Dornr&ouml;schen-Transposon/Transposase-System Kfz CD19-spezifische im Speicher direkt auszudr&uuml;cken und Effektorzellen T ohne Droge-Auswahl. Zusammen mit der numerische Erweiterung auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen dieses Gen &uuml;bertragen Methodenergebnisse in rapid Auswuchs der CD4(+) und CD8(+) T Zellen auszudr&uuml;cken Auto Spezifit&auml;t f&uuml;r CD19(+) Tumorzellen umzuleiten.

Besonderheit des T-Zell-Populationen f&uuml;r CD19 mit dem Dornr&ouml;schen-System umleiten.

Modificazione genetica delle cellule T uso clinico &egrave; impegnata ad aumentare la funzione, tra cui reindirizzando la specificit&agrave; per l&#39;antigene desiderata. Noi ed altri abbiamo introdotto un recettore chimerico antigene (auto) per attivare le cellule T di riconoscere l&#39;antigene tumorale specifico lignaggio, quali CD19, e presto-fase sperimentazione umana sono attualmente valutando sicurezza e fattibilit&agrave;. Tuttavia, un ostacolo significativo alla generazione di studi clinici &egrave; lo sviluppo di un vettore di espressione auto adatto in grado di modificare geneticamente una vasta popolazione di cellule T. Trasduzione di cellule T &egrave; relativamente efficiente ma richiede produzione specializzata di virus ricombinanti costoso grado clinico. Electrotransfer del plasmide DNA nudo offre un approccio alternativo redditizio, ma l&#39;inefficienza di integrazione del transgene mandati ex vivo selezione sotto citocida concentrazioni di farmaco per applicare l&#39;espressione dei geni di selezione per realizzare clinicamente significativo numero di cellule T CAR(+). Segnaliamo un nuovo approccio alla generazione efficiente di T con specificit&agrave; reindirizzato, introducendo i plasmidi di DNA dal sistema Sleeping Beauty trasposone/permettono di esprimere direttamente un&#39;auto CD19-specifiche nella memoria e cellule effettrici T senza selezione di droga. Quando accoppiato con espansione numerica su CD19(+) artificiale cellule presentanti l&#39;antigene, questo gene trasferire i risultati del metodo in rapida crescita delle cellule CD4(+) e cellule T che esprimono auto per reindirizzare la specificit&agrave; per le cellule tumorali CD19(+).

Riorientare la specificit&agrave; delle popolazioni di cellule T per CD19 utilizzando il sistema di Sleeping Beauty.

&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6539;&#x5909;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (CD19 &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x8ECA;) &#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3068;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x6B21;&#x4E16;&#x4EE3;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7814;&#x7A76;&#x3078;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x969C;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x8ECA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5C02;&#x9580;&#x30E1;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9; DNA &#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;ex vivo &#x9078;&#x629E; CAR(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x610F;&#x5473;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x6570;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x85AC;&#x5264;&#x306E;&#x6BBA;&#x7D30;&#x80DE;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4E0B; transgene &#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306E;&#x975E;&#x52B9;&#x7387;&#x6027;&#x3092;&#x7FA9;&#x52D9;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T &#x7D30;&#x80DE; CD19 &#x56FA;&#x6709;&#x8ECA;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7720;&#x308C;&#x308B;&#x68EE;&#x306E;&#x7F8E;&#x5973;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;/&#x8EE2;&#x79FB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304B;&#x3089; DNA &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3001;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x85AC;&#x5264;&#x9078;&#x629E;&#x306A;&#x3057;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5831;&#x544A;&#x3092;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;&#x6570;&#x5024;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F; CD19(+) &#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x8ECA;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; CD4(+) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x4F38;&#x9577;&#x306B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD19 &#x306E;&#x7720;&#x308C;&#x308B;&#x68EE;&#x306E;&#x7F8E;&#x5973;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; T &#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC784;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xAE09; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158; &#xB4F1;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC744; &#xB3C4;&#xC785; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) CD19, &#xAC19;&#xC740; &#xD608;&#xD1B5; &#xD2B9;&#xC815; &#xC885;&#xC591; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC744; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC778;&#xCCB4; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC548;&#xC804; &#xBC0F; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC;&#xB294;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xCC28;&#xAE30; &#xC784;&#xC0C1; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC29; &#xBCBD;&#xC740; &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xCC28; &#xC2DD; &#xBCA1;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC218;&#xC815;&#xD560;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC804;&#xB2EC; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xC2FC; &#xC784;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xAE09; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC81C;&#xC870;&#xC5C5; &#xD544;&#xC694;. &#xBC8C; &#xAC70; &#xBC97;&#xC740; DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC758; Electrotransfer &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC548; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; transgene &#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xBE44; &#xD6A8;&#xC728; ex vivo &#xC120;&#xD0DD; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; cytocidal &#xC758;&#xBB34;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC9C1;&#xC811; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC;&#xC5D0; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC790;&#xB294; &#xBBF8;&#xB140; transposon/transposase &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xB41C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC774; &#xC5C6;&#xC774; &#xC774;&#xD399;&#xD130; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC22B;&#xC790; &#xD655;&#xC7A5; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; CD4(+) &#xBC0F; CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; CD19(+) &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xD558;&#xB294; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC804;&#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804;&#xC1A1;.

&#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; CD19 &#xC7A0;&#xC790;&#xB294; &#xBBF8;&#xB140; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;.

La modificaci&oacute;n gen&eacute;tica de c&eacute;lulas T de tipo cl&iacute;nico se lleva a cabo para aumentar la funci&oacute;n, incluyendo redirigiendo la especificidad para el ant&iacute;geno deseado. Nosotros y otros hemos introducido un receptor de ant&iacute;geno quim&eacute;rico (coche) para permitir que las c&eacute;lulas T reconocen el ant&iacute;geno tumor espec&iacute;fico de linaje, como CD19, y la fase inicial de ensayos humanos est&aacute;n evaluando seguridad y factibilidad. Sin embargo, un obst&aacute;culo importante para los estudios cl&iacute;nicos de &uacute;ltima generaci&oacute;n est&aacute; desarrollando un vector de expresi&oacute;n de coche adecuado capaz de modificar gen&eacute;ticamente una amplia poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas T. Transducci&oacute;n de c&eacute;lulas T es relativamente eficiente, pero requiere la fabricaci&oacute;n especializada de virus recombinantes caro grado cl&iacute;nico. I del pl&aacute;smido de ADN desnudo ofrece una alternativa rentable, pero la ineficiencia de la integraci&oacute;n del transgen mandatos ex vivo selecci&oacute;n bajo concentraciones cytocidal de droga para hacer cumplir la expresi&oacute;n de los genes de la selecci&oacute;n para lograr cl&iacute;nicamente significativos n&uacute;meros de c&eacute;lulas T CAR(+). Divulgamos un nuevo enfoque para generar eficientemente las c&eacute;lulas T con especificidad redireccionado, introducci&oacute;n de pl&aacute;smidos de ADN desde el sistema de transposones/transposasa durmiente para expresar directamente un coche CD19-espec&iacute;fica en la memoria y c&eacute;lulas efectoras T sin selecci&oacute;n de drogas. Cuando se combina con la expansi&oacute;n num&eacute;rica en c&eacute;lulas presentadoras de ant&iacute;geno artificiales de CD19(+), este gen transferir resultados de m&eacute;todo en consecuencia r&aacute;pida de c&eacute;lulas CD4 y CD8 T expresando su coche para redirigir la especificidad para las c&eacute;lulas del tumor CD19(+).

Redirigir la especificidad de las poblaciones de c&eacute;lulas T para CD19 usando el sistema de la bella durmiente.

&#x6574;&#x5408;&#x578B;&#x8F7D;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x6CBB;&#x7597;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;(PB) piggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;/&#x8F6C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x4ECE;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5316;&#x4E0D;&#x751F;&#x6210;&#x830E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x94C5;&#x79FB;&#x4F4D;&#x8868;&#x793A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53; (&#x8F66;)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x4ECB;&#x7ECD; PB &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x8F6C;&#x7A33;&#x5B9A; CD19 &#x7279;&#x5B9A;&#x8F66;&#x548C;&#x9AD8;&#x901F;&#x65F6; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x57F9;&#x517B;&#x6570;&#x63A7;&#x8F66;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6269;&#x5927;&#x3001; &#x663E;&#x793A;&#x5185;&#x5B58;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5C55;&#x54C1; CD19 &#x4F9D;&#x8D56;&#x6740;&#x5BB3;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x6307;&#x6807;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x6C7D;&#x8F66;&#x7684; PB &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684;&#x4E00;&#x4F53;&#x5316;&#x4E0D;&#x662F;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#xFF0C;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x3002;PB &#x79FB;&#x4F4D;&#x672F;&#x5982; CD19 &#x662F;&#x6CBB;&#x7597;&#x6240;&#x6D89;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91CD;&#x5B9A;&#x5411;&#x5230;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

piggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;/&#x8F6C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x751F;&#x6210; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE; B &#x6CBF;&#x88AD;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Nonviral integrating vectors can be used for expression of therapeutic genes. piggyBac (PB), a transposon/transposase system, has been used to efficiently generate induced pluripotent stems cells from somatic cells, without genetic alteration. In this paper, we apply PB transposition to express a chimeric antigen receptor (CAR) in primary human T cells. We demonstrate that T cells electroporated to introduce the PB transposon and transposase stably express CD19-specific CAR and when cultured on CD19(+) artificial antigen-presenting cells, numerically expand in a CAR-dependent manner, display a phenotype associated with both memory and effector T cell populations, and exhibit CD19-dependent killing of tumor targets. Integration of the PB transposon expressing CAR was not associated with genotoxicity, based on chromosome analysis. PB transposition for generating human T cells with redirected specificity to a desired target such as CD19 is a new genetic approach with therapeutic implications.

piggyBac transposon/transposase system to generate CD19-specific T cells for the treatment of B-lineage malignancies.

Non viraux vecteurs int&#xE9;gratifs peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour l&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes th&#xE9;rapeutiques. piggyBac (PB), un syst&#xE8;me transposon / transposase, a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer efficacement des cellules pluripotentes induites d&#xE9;coule &#xE0; partir de cellules somatiques, sans alt&#xE9;ration g&#xE9;n&#xE9;tique. Dans cet article, nous appliquons la transposition PB &#xE0; exprimer un r&#xE9;cepteur d&#x26;#39;antig&#xE8;ne chim&#xE9;rique (CAR) dans le primaire des cellules T humaines. On d&#xE9;montrer que les cellules T &#xE9;lectroporation pour introduire le transposon PB et la transposase de mani&#xE8;re stable expriment CD19-sp&#xE9;cifique RAC et lorsqu&#x26;#39;elles sont cultiv&#xE9;es sur CD19 (+) artificielles cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne, num&#xE9;riquement &#xE9;largir de mani&#xE8;re RAC-d&#xE9;pendante, pr&#xE9;sentent un ph&#xE9;notype associ&#xE9; &#xE0; la m&#xE9;moire et populations de lymphocytes T effecteurs, et pr&#xE9;sentent CD19-d&#xE9;pendante assassinat de cibles tumorales. Int&#xE9;gration de la RCA PB transposon exprimer n&#x26;#39;&#xE9;tait pas associ&#xE9;e &#xE0; la g&#xE9;notoxicit&#xE9;, bas&#xE9;e sur l&#x26;#39;analyse des chromosomes. Transposition PB pour g&#xE9;n&#xE9;rer des cellules T avec une sp&#xE9;cificit&#xE9; redirig&#xE9; vers une cible souhait&#xE9;e tels que CD19 est une nouvelle approche g&#xE9;n&#xE9;tique avec des implications th&#xE9;rapeutiques.

PiggyBac transposon / transposase syst&#xE8;me pour g&#xE9;n&#xE9;rer CD19 des lymphocytes T sp&#xE9;cifiques pour le traitement des tumeurs malignes de la lign&#xE9;e B

Nonviral Integration von Vektoren k&ouml;nnen f&uuml;r Ausdruck der therapeutischen Gene verwendet werden. PiggyBac (PB), ein Transposon/Transposase-System, wurde verwendet, induzierte pluripotente St&auml;mme Zellen effizient aus somatischen Zellen, ohne genetische Ver&auml;nderung zu generieren. In diesem Papier wenden wir PB Umsetzung um einen Chim&auml;rer Antigen-Rezeptor (CAR) in prim&auml;ren humanen T-Zellen auszudr&uuml;cken. Wir zeigen, dass T-Zellen-Electroporated PB einzuf&uuml;hren Transposon und Transposase stabil CD19-spezifische Auto express und wenn auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen, kultiviert numerisch in Auto-abh&auml;ngigen Weise zu erweitern, zeigen einen Ph&auml;notyp zugeordneten Speicher und Effektor-T-Zell-Populationen sowohl Ausstellung CD19-abh&auml;ngige T&ouml;tung von Tumor-Ziele. Integration von der PB-Transposon Ausdr&uuml;cken Auto war nicht Genotoxizit&auml;t, basierend auf Chromosomenanalyse zugeordnet. PB-Umsetzung f&uuml;r die Generierung von menschlicher T-Zellen mit umgeleiteten Spezifit&auml;t zu dem gew&uuml;nschten Ziel z. B. CD19 ist ein neuer genetischer Ansatz mit therapeutischen Implikationen.

PiggyBac Transposon/Transposase System CD19-spezifische T-Zellen f&uuml;r die Behandlung von B-Linie Malignome generiert.

Vettori virali integrazione possono essere utilizzati per l&#39;espressione di geni terapeutici. piggyBac (PB), un sistema di trasposone/ha, &egrave; stato utilizzato in modo efficiente generare cellule gambi pluripotenti indotte da cellule somatiche, senza alterazione genetica. In questa carta, applichiamo la trasposizione di PB per esprimere un recettore chimerico antigene (auto) nelle cellule T umane primarie. Dimostriamo che electroporated di cellule T per introdurre il PB trasposone e permettono stabilmente express auto CD19-specifiche e quando coltivate su CD19(+) cellule presentanti l&#39;antigene artificiale, numericamente espandere in modo auto-dipendente, visualizzare un fenotipo associato sia memoria e popolazioni di cellule T effettrici e l&#39;uccisione di esposizione-CD19-dipendente dei bersagli tumorali. Integrazione del trasposone PB esprimendo la vettura non &egrave; stata associata con genotossicit&agrave;, basata su analisi cromosomica. Trasposizione di PB per la generazione di cellule T umane con specificit&agrave; reindirizzato a una destinazione desiderata come CD19 &egrave; un nuovo approccio genetico con implicazioni terapeutiche.

piggyBac sistema Trasposone/permettono di generare le cellule T CD19-specifici per il trattamento di neoplasie B-lineage.

&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; piggyBac&#xFF08;PB&#xFF09;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;/&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30B6;&#x30FC;&#x30BC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x830E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;CAR&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;PB&#x306E;&#x8EE2;&#x7F6E;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;PB&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B9;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;CD19&#x56FA;&#x6709;&#x306E;CAR&#x304A;&#x3088;&#x3073;CD19&#xFF08;+&#xFF09;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x6570;&#x5024;&#x3001;CAR-&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;T&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x6A19;&#x7684;&#x306E;CD19&#x4F9D;&#x5B58;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002; PB&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;CAR&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;CD19&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;PB&#x306E;&#x8EE2;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x610F;&#x5473;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

B&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;CD19&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;PiggyBac&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;/&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;

Nonviral &#xD1B5;&#xD569; &#xBCA1;&#xD130; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. piggyBac (PB)&#xB294; transposon/transposase &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5C6;&#xC774; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2E0;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;)&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; PB &#xC804;&#xC704; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0CC;&#xB4DC;&#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; electroporated &#xBCF4;&#xC5EC; transposon &#xBC0F; transposase &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; &#xC22B;&#xC790;&#xB85C; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5;, &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC885;&#xC591; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC; CD19-&#xC885;&#xC18D; &#xC0B4;&#xC778;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; PB transposon&#xC758; &#xD1B5;&#xD569; genotoxicity, &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xB514;&#xB809;&#xC158;&#xB41C; CD19 &#xAC19;&#xC740; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; PB &#xC804;&#xC704;&#xB294; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC801; &#xC758;&#xBBF8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC804; &#xC811;&#xADFC; &#xC774;&#xB2E4;.

piggyBac transposon/transposase &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; B &#xD608;&#xD1B5; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;.

No virales vectores de integraci&#xF3;n se puede utilizar para la expresi&#xF3;n de genes terap&#xE9;uticos. piggyBac (PB), un sistema transpos&#xF3;n / transposasa, se ha utilizado para generar eficientemente pluripotentes inducidas se deriva a partir de c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas, sin alteraci&#xF3;n gen&#xE9;tica. En este trabajo, aplicamos la transposici&#xF3;n PB para expresar un receptor de ant&#xED;geno quim&#xE9;rico (CAR) en c&#xE9;lulas T humanas primarias. Se demuestra que las c&#xE9;lulas T a electroporaci&#xF3;n para introducir el transpos&#xF3;n PB y transposasa estable expresa CD19-espec&#xED;fica CAR y cuando se cultivan en el CD19 (+) artificiales que presentan el ant&#xED;geno de c&#xE9;lulas, num&#xE9;ricamente ampliar de una forma dependiente del autom&#xF3;vil, presentan un fenotipo asociado con la memoria y la poblaciones de c&#xE9;lulas T efectoras, y exhiben CD19-dependiente matanza de dianas tumorales. Integraci&#xF3;n de la CAR PB transpos&#xF3;n expresa no se asoci&#xF3; con la genotoxicidad, basado en el an&#xE1;lisis cromos&#xF3;mico. Transposici&#xF3;n PB para la generaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T humanas con una especificidad redirigidos a un objetivo deseado, tal como CD19 es un nuevo enfoque gen&#xE9;tico con implicaciones terap&#xE9;uticas.

PiggyBac Transpos&#xF3;n / transposasa sistema para generar CD19 de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas para el tratamiento de neoplasias malignas de linaje B-

(&#x8F66;) &#x63D0;&#x9AD8;&#x7597;&#x6548;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E00;&#x79CD;&#x5D4C;&#x5408;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x52AA;&#x529B;&#x63A7;&#x5236; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x5DF2;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E00;&#x9879;&#x56FA;&#x6709;&#x6218;&#x7565;&#x4FEE;&#x6539;&#x6C7D;&#x8F66;&#x672C;&#x8EAB;&#xFF0C;&#x6539;&#x5584; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6539;&#x53D8;&#x6587;&#x5316;&#x73AF;&#x5883;&#xFF0C;&#x624D;&#x80FD;&#x6309;&#x6570;&#x5B57;&#x987A;&#x5E8F;&#x5C55;&#x5F00; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; (IL) &#x4E0B;&#x8DCC;&#x767E;&#x5206;&#x4E4B;&#x4E8C;&#x5341;&#x4E00;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x6DFB;&#x52A0;&#x6240;&#x9700;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x5916;&#x5728;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6C7D;&#x8F66;&#x4F9D;&#x8D56; T-&#x7EC6;&#x80DE;&#x6548;&#x5E94;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; electrotransfer &#x7684;&#x7761;&#x7F8E;&#x4EBA;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x8F66;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x548C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x4F20;&#x64AD; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9; CD19(+) &#x4EBA;&#x5DE5;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x8F86;)&#x3002;IL 21 &#x5728;&#x573A;&#xFF0C;&#x5F53;&#x65F6; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x88C2;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; CD19 &#x56DE;&#x5E94;&#x4F18;&#x60E0;&#x6570;&#x503C;&#x6269;&#x5927;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x503C;&#x6269;&#x5927; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x65E9;&#x671F;&#x5185;&#x5B58;&#x8868;&#x9762;&#x578B;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E3A; CD62L(+)CD28(+) &#x548C;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F20;&#x64AD;&#x4E0E;&#x53EA;&#x6709;&#x5916;&#x6E90;&#x6027; IL-2 &#x5F80;&#x5F80;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FC7;&#x5EA6; CD19 &#x7279;&#x5B9A; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; IL 21 &#x9886;&#x517B;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x5C55;&#x51FA;&#x5C0F;&#x9F20; CD19(+) B &#x7EC6;&#x80DE;&#x6076;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x63D0;&#x4F9B;&#x534F;&#x8C03;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x64AD; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1; IL 21 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x8F86;&#x66FF;&#x6362;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-21 &#x4E16;&#x7EAA;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x65B0;&#x578B; mutein&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 21 &#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5916;&#x5728;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x6240;&#x9700;&#x7684; CAR(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x6709;&#x6548;&#x3002;

&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B; CD19 &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; IL 21 &#x4FE1;&#x53F7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x9AD8; B-&#x6CBF;&#x88AD;&#x80BF;&#x7624;&#x8FC7;&#x7EE7;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

Improving the therapeutic efficacy of T cells expressing a chimeric antigen receptor (CAR) represents an important goal in efforts to control B-cell malignancies. Recently an intrinsic strategy has been developed to modify the CAR itself to improve T-cell signaling. Here we report a second extrinsic approach based on altering the culture milieu to numerically expand CAR(+) T cells with a desired phenotype, for the addition of interleukin (IL)-21 to tissue culture improves CAR-dependent T-cell effector functions. We used electrotransfer of Sleeping Beauty system to introduce a CAR transposon and selectively propagate CAR(+) T cells on CD19(+) artificial antigen-presenting cells (aAPC). When IL-21 was present, there was preferential numeric expansion of CD19-specific T cells which lysed and produced IFN-Î³ in response to CD19. Populations of these numerically expanded CAR(+) T cells displayed an early memory surface phenotype characterized as CD62L(+)CD28(+) and a transcriptional profile of naÃ¯ve T cells. In contrast, T cells propagated with only exogenous IL-2 tended to result in an overgrowth of CD19-specific CD4(+) T cells. Furthermore, adoptive transfer of CAR(+) T cells cultured with IL-21 exhibited improved control of CD19(+) B-cell malignancy in mice. To provide coordinated signaling to propagate CAR(+) T cells, we developed a novel mutein of IL-21 bound to the cell surface of aAPC that replaced the need for soluble IL-21. Our findings show that IL-21 can provide an extrinsic reprogramming signal to generate desired CAR(+) T cells for effective immunotherapy.

Reprogramming CD19-specific T cells with IL-21 signaling can improve adoptive immunotherapy of B-lineage malignancies.

Am&#xE9;liorer l&#x26;#39;efficacit&#xE9; th&#xE9;rapeutique des cellules T exprimant un r&#xE9;cepteur d&#x26;#39;antig&#xE8;ne chim&#xE9;rique (CAR) repr&#xE9;sente un objectif important dans les efforts pour contr&#xF4;ler h&#xE9;mopathies &#xE0; cellules B. R&#xE9;cemment, une strat&#xE9;gie intrins&#xE8;que a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour modifier la voiture elle-m&#xEA;me pour am&#xE9;liorer la signalisation des cellules T. Nous rapportons ici une seconde approche bas&#xE9;e sur la modification extrins&#xE8;que du milieu de culture &#xE0; d&#xE9;velopper num&#xE9;riquement CAR (+) des cellules T avec un ph&#xE9;notype d&#xE9;sir&#xE9;, pour l&#x26;#39;ajout de l&#x26;#39;interleukine (IL) -21 &#xE0; la culture de tissus am&#xE9;liore CAR-d&#xE9;pendante des cellules T fonctions effectrices. Nous avons utilis&#xE9; &#xE9;lectrotransfert du syst&#xE8;me Belle au Bois Dormant &#xE0; introduire un transposon RCA et s&#xE9;lective propager CAR (+) des cellules T CD19 sur (+) artificiels cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (VAMP). Lorsque l&#x26;#39;IL-21 &#xE9;tait pr&#xE9;sent, il n&#x26;#39;y avait pr&#xE9;f&#xE9;rentiel d&#x26;#39;expansion num&#xE9;rique des cellules T CD19-sp&#xE9;cifiques qui lys&#xE9;es et l&#x26;#39;IFN-&#x3B3; produit en r&#xE9;ponse &#xE0; CD19. Populations de ces RAC num&#xE9;riquement &#xE9;largi (+) des cellules T affich&#xE9;e une m&#xE9;moire ph&#xE9;notype d&#xE9;but de surface caract&#xE9;ris&#xE9; en CD62L (+) CD28 (+) et un profil de transcription des cellules T na&#xEF;fs. En revanche, les cellules T se propage avec seulement IL-2 exog&#xE8;ne ont tendance &#xE0; se traduire par une prolif&#xE9;ration de CD19-sp&#xE9;cifiques CD4 (+) des cellules T. En outre, le transfert adoptif de la RCA (+) des cellules T cultiv&#xE9;es avec IL-21 pr&#xE9;sentait un contr&#xF4;le am&#xE9;lior&#xE9; de CD19 (+) &#xE0; cellules B malignes chez la souris. Pour fournir des coordonn&#xE9;es de signalisation pour propager la RCA (+) des cellules T, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une mut&#xE9;ine roman de l&#x26;#39;IL-21 li&#xE9;e &#xE0; la surface de la cellule de aAPC qui a remplac&#xE9; la n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;soluble IL-21. Nos r&#xE9;sultats montrent que l&#x26;#39;IL-21 peut fournir un signal extrins&#xE8;que reprogrammation de g&#xE9;n&#xE9;rer voiture d&#xE9;sir&#xE9;e (+) des cellules T pour l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie efficace.

Reprogrammation CD19 des lymphocytes T sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;IL-21 de signalisation peut am&#xE9;liorer immunoth&#xE9;rapie adoptive de la lign&#xE9;e B malignes

Verbesserung der therapeutischen Wirksamkeit von T-Zellen, die Ausdruck eines Chim&auml;ren Antigen-Rezeptors stellt (Auto) ein wichtiges Ziel in Bem&uuml;hungen zur Kontrolle von B-Zell-Tumoren. Vor kurzem wurde eine systeminterne Strategie entwickelt, um das Auto selbst zur Verbesserung der T-Zell-Signalisierung zu &auml;ndern. Hier berichten wir, dass ein zweiter extrinsischer Ansatz basierend auf Ver&auml;nderung des Kultur-Milieus um numerisch CAR(+) T-Zellen mit einem gew&uuml;nschten Ph&auml;notyp, f&uuml;r den Zusatz von Interleukin (IL)-21 zu Gewebekultur erweitern Auto-abh&auml;ngige T-Zell-Effektor-Funktionen verbessert. Wir fr&uuml;her Electrotransfer Sleeping Beauty Systems einzuf&uuml;hren, eine Auto-Transposon und CAR(+) T-Zellen auf CD19(+) k&uuml;nstliche Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen (aAPC) selektiv zu verbreiten. Als IL-21 anwesend war, gab es bevorzugte numerische Erweiterung der CD19-spezifische T-Zellen, die Tauwetterprotokoll aufgel&ouml;st und IFN-&gamma; in Reaktion auf CD19 produziert. Populationen dieser numerisch erweiterten CAR(+) T-Zellen angezeigt eine fr&uuml;he Speicher Oberfl&auml;che Ph&auml;notyp als CD62L(+)CD28(+) und ein transkriptionelle Profil von naiven T-Zellen charakterisiert. Im Gegensatz dazu propagiert T-Zellen mit nur exogene Il tendenziell ein &uuml;berm&auml;&szlig;iges Wachstum von CD19-spezifische CD4(+) T-Zellen f&uuml;hren. Dar&uuml;ber hinaus stellte adoptiven Transfer CAR(+) T-Zellen kultiviert mit IL-21 verbesserte Kontrolle der CD19(+) B-Zell-Tumoren bei M&auml;usen. Um bieten koordinierte Signalisierung CAR(+) T-Zellen zu propagieren, entwickelten wir eine neuartige Mutein IL-21 gebunden an der Zelloberfl&auml;che von aAPC, die die Notwendigkeit der l&ouml;slichen IL-21 ersetzt. Unsere Ergebnisse zeigen, dass IL-21 eine extrinsische Neuprogrammierung Signal zum gew&uuml;nschte CAR(+) T-Zellen f&uuml;r wirksame Immuntherapie generieren bieten kann.

Neuprogrammierung CD19-spezifische T-Zellen mit IL-21 signalisieren kann Adoptive Immuntherapie f&uuml;r B-Linie Krebserkrankungen verbessern.

Migliorare l&#39;efficacia terapeutica di cellule T che esprimono un recettore chimerico antigene (auto) rappresentano un obiettivo importante negli sforzi per controllare i tumori maligni delle cellule di B. Recentemente una strategia intrinseca &egrave; stata sviluppata per modificare la macchina stessa per migliorare la segnalazione delle cellule T. Qui riportiamo un secondo approccio estrinseco basato su alterando il milieu di cultura per espandere numericamente CAR(+) T cellule con un fenotipo desiderato, per l&#39;aggiunta di interleuchina (IL) -21 per coltura tissutale migliora le funzioni effettrici delle cellule T auto-dipendente. Abbiamo utilizzato electrotransfer di sistema Sleeping Beauty per introdurre una trasposone auto e propagare selettivamente le cellule T CAR(+) su CD19(+) artificiale presentanti l&#39;antigene cellule (aAPC). Quando IL 21 era presente, ci fu espansione numerica preferenziale delle cellule CD19-specifiche T lisati e prodotto IFN-&gamma; in risposta a CD19. Popolazioni di queste cellule T CAR(+) numericamente espanse visualizzato un fenotipo di superficie memoria precoce caratterizzato come CD62L(+)CD28(+) e un profilo trascrizionale delle cellule T na&iuml;ve. Al contrario, le cellule T propagano con solo esogeni IL-2 tendono a causare una crescita eccessiva di cellule CD19-specifiche CD4(+) T. Inoltre, trasferimento adottivo di CAR(+) T cellule coltivate con IL 21 esposto migliorato controllo di malignit&agrave; delle cellule di B CD19(+) nei topi. Per fornire la segnalazione coordinato propagare le cellule T CAR(+), abbiamo sviluppato un romanzo mutein IL-21 legato alla superficie delle cellule di aAPC che ha sostituito la necessit&agrave; per IL solubile-21. I nostri risultati mostrano che IL 21 pu&ograve; fornire un segnale di riprogrammazione estrinseco per generare le cellule T CAR(+) desiderate per l&#39;immunoterapia efficacia.

Riprogrammazione di cellule CD19-specifiche T con IL 21 di segnalazione pu&ograve; migliorare adoptive immunoterapia dei tumori maligni B-lineage.

&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x6297;&#x539F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;CAR&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;B&#x7D30;&#x80DE;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52AA;&#x529B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;CAR&#x81EA;&#x4F53;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CAR-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x6570;&#x5024;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#xFF08;IL&#xFF09;-21&#x306F;&#x3001;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3068;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;CAR&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x6587;&#x5316;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;CD19&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;+&#xFF09;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;AAPC&#xFF09;&#xFF08;+&#xFF09;CAR&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;CAR&#x3092;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3059;&#x308B;&#x7720;&#x308C;&#x308B;&#x68EE;&#x306E;&#x7F8E;&#x5973;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;electrotransfer&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; IL-21&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x6642;&#x3001;&#x6EB6;&#x89E3;&#x3057;&#x3001;CD19&#x306B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;IFN-&#x3B3;&#x3092;&#x751F;&#x7523;CD19-&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306A;&#x6570;&#x5024;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6570;&#x5024;&#x306B;&#x62E1;&#x5927;CAR&#x306E;&#x96C6;&#x56E3;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;CD62L&#xFF08;+&#xFF09;CD28&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;IL-2&#x306F;&#x3001;CD19-&#x7279;&#x7570;&#x7684;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x306B;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;IL-21&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x990A;&#x5B50;CAR&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;CD19&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;+&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;B&#x7D30;&#x80DE;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B3;&#x30FC;&#x200B;&#x200B;&#x30C7;&#x30A3;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;+&#xFF09;CAR&#x3092;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;IL-21&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;AAPC&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;IL-21&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x5909;&#x7570;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;IL-21&#x304C;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;CAR&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

IL-21&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;CD19&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;B-&#x7CFB;&#x5217;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x990A;&#x5B50;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;

Chimeric &#xD56D; &#xC6D0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) B-&#xC138;&#xD3EC; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC804;&#xB7B5; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC790;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBB38;&#xD654; milieu &#xC22B;&#xC790; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; (IL)-21 &#xC870;&#xC9C1; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC678;&#xBD80; &#xC811;&#xADFC; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC885;&#xC18D; T &#xC138;&#xD3EC; effector &#xAE30;&#xB2A5; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC18C;&#xAC1C; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; transposon &#xBC0F; CD19(+) &#xC778;&#xACF5; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (aAPC)&#xC5D0;&#xC11C; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xD30C; &#xC7A0;&#xC790;&#xB294; &#xBBF8;&#xB140; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; electrotransfer&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. IL 21 &#xC874;&#xC7AC; &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;, CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; lysed cd19&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; IFN-&gamma;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xD2B9;&#xD61C; &#xC22B;&#xC790; &#xD655;&#xC7A5;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC22B;&#xC790; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; &#xD45C;&#xBA74; &#xD615; CD62L(+)CD28(+)&#xC640; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transcriptional &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xBC18;&#xBA74;, T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-&#xB9CC; &#xC138; 2 CD19 &#xD2B9;&#xC815; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC790;&#xB77C; &#xB09C; &#xADC0; &#xCC29;&#xB420; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC804;&#xD30C;. &#xB610;&#xD55C;, IL 21 &#xAD50;&#xC591; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; CD19(+) B-&#xC138;&#xD3EC; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC;. CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xC804;&#xD30C; &#xC870;&#xC815; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xACF5;, IL-21 &#xC131; IL-21&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xB300;&#xCCB4; Aapc&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; mutein &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; IL 21 &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; immunotherapy&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; CAR(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC678;&#xBD80; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

IL 21 &#xC2E0;&#xD638; CD19 &#xD2B9;&#xC815; T &#xC140; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; B &#xD608;&#xD1B5; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xC785;&#xC591; immunotherapy &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mejora de la eficacia terap&#xE9;utica de las c&#xE9;lulas T que expresan un receptor de ant&#xED;geno quim&#xE9;rico (CAR) representa un objetivo importante en los esfuerzos para controlar las c&#xE9;lulas B malignas. Recientemente una estrategia intr&#xED;nseca ha sido desarrollada para modificar el propio veh&#xED;culo para mejorar las c&#xE9;lulas T de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Aqu&#xED; se presenta un segundo enfoque extr&#xED;nseca basada en alterar el medio para expandir la cultura num&#xE9;ricamente CAR (+) las c&#xE9;lulas T con un fenotipo deseado, por la adici&#xF3;n de interleucina (IL) -21 al cultivo de tejidos mejora CAR-dependiente de c&#xE9;lulas T funciones efectoras. Se utiliz&#xF3; el sistema de electrotransfer de la Bella Durmiente para introducir un transpos&#xF3;n CAR y propagan selectivamente CAR (+) las c&#xE9;lulas T de CD19 (+) la presentaci&#xF3;n de ant&#xED;geno artificiales, las c&#xE9;lulas (AAPC). Cuando la IL-21 estaba presente, hubo expansi&#xF3;n preferencial num&#xE9;rico de las c&#xE9;lulas T CD19-espec&#xED;ficos que se lisaron y produjo IFN-&#x3B3; en respuesta a CD19. Las poblaciones de estos CAR num&#xE9;ricamente ampliado (+) las c&#xE9;lulas T muestran un fenotipo memoria superficie temprano caracterizado como CD62L (+) CD28 (+) y un perfil transcripcional de c&#xE9;lulas T naive. En contraste, las c&#xE9;lulas T propagan con s&#xF3;lo IL-2 ex&#xF3;gena tiende a resultar en un crecimiento excesivo de CD19 espec&#xED;ficos CD4 (+) las c&#xE9;lulas T. Adem&#xE1;s, la transferencia adoptiva de CAR (+) c&#xE9;lulas T cultivadas con IL-21 mostraron un mejor control de CD19 (+) de c&#xE9;lulas B en ratones malignidad. Para proporcionar coordinado de se&#xF1;alizaci&#xF3;n para propagar CAR (+) las c&#xE9;lulas T, hemos desarrollado una nueva mute&#xED;na de IL-21 unido a la superficie celular de AAPC que sustituye la necesidad de soluble de IL-21. Nuestros hallazgos muestran que la IL-21 puede proporcionar una se&#xF1;al extr&#xED;nseca reprogramaci&#xF3;n para generar el veh&#xED;culo que desea (+) las c&#xE9;lulas T para la inmunoterapia eficaz.

Reprogramaci&#xF3;n de CD19 de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas con la IL-21 puede mejorar la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la inmunoterapia adoptiva de tumores malignos del linaje B-

Margaret J. Dawson

Division of Pediatrics

U.T. MD Anderson Cancer Center

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Margaret J. Dawson

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Division of Pediatrics

U.T. MD Anderson Cancer Center

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Division of Pediatrics