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요약

Monocyte 파생 된 DC (MoDC) 위험 관련 된 분자의 작은 금액을 느낄 수 및 따라서 쉽게 끝났다. 우리는 혈액과 종양과 그들의 조기 활성화를 피하기 위해 고려해 야 하는 주요 조치를 강조 하면서 면역성이 있는 복합물으로 그들의 활성화에서 MoDC의 격리에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

초록

수지상 세포 (DC)는 이종 세포 인구에 그들의 세포 막 마커, 마이그레이션 패턴 및 유통, 그리고 그들의 프레 젠 테이 션 항 원에 T 세포 활성화 능력을 다른. 실험적 종양 모델의 대부분 예방 접종 필요 DC의 수백만, 그들은 널리 골 수 나 비장 으로부터 격리 됩니다. 그러나, 이러한 DC 크게 다 혈액과 종양 DC에 그들의 응답에서 면역성이 있는 복합물 (IC), 그리고 아마도 다른 lectin Syk 결합 수용 체. 중요 한 것은, 위험 관련 분자에 DC의 감도 감안할 때, 독 또는 crosslink 활성화 수용 체는 격리 중 하나는 항 체의 존재 수 DC의 못쓰게 되며 따라서 매개 변수를 영향을 하거나 적어도 복용량, 그들을 활성화 하는 데 필요한 따라서, 여기 우리가 그들의 조기 활성화를 피하고 있는 동안 혈액과 종양에서 MoDC를 고립 시키기를 위한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 또한, 프로토콜 종양 IC와 함께 MoDC 활성화 및 그들의 연속적인 분석을 위해 제공 됩니다.

서문

그들의 발견부터 수지상 세포 (DC) T 세포 감 별 법1왜곡 그들의 독특한 능력으로 인해 광범위 한 연구의 초점을 했습니다. 지난 몇 년간 광범위 한 연구 노력 종양 진행과 면역 2동안 다양 한 DC 하위 집합 및 그들의 기능을 정의 하기 위해 노력해왔다. Dc는 그들의 패턴 인식 수용 체, 조직 배포에서에서 서로 다른 이기종 세포 인구 구성 및 철새와 항 원 프레 젠 테이 션 기능3,,45. 다른 DC 하위 집합에 비해 monocyte 파생 된 DC (MoDC) 종양에 훨씬 더 풍부 하 고 순환에서 쉽게 생성 될 수 또는 종양 침투 monocytes6,7. 따라서, 그들의 상대 보급을 활용 하고자 하는 많은 임상 실험은 T 세포 면역 8,9를 유도 하기 위해 헌 MoDC의 비보와 비보 전 조작 기반으로 합니다.

마찬가지로, DC 기반으로 예방 접종 실험 종양 모델의 2-3 직렬 주사, 떨어져, 1-2 10 x 5-7 일 필요6 활성화 된 DC 펄스와 종양 항 원. 따라서, DC의이 많은 수를 달성 하기 위해, 대부분 마우스 연구 주로 사용 MoDC 7-9 일 (IL-4 마우스 설정에 필요 하지 않습니다)에 대 한 GM-CSF에 골 수 (BM) 선구자에서 교양10,11. 그럼에도 불구 하 고, 주어진 그 GM-CSF 녹아웃 쥐가 전반적으로 정상적인 DC 구획 12,의13, 그리고 그 문화에서 얻은 혼합된 인구를 주어진14 이러한 DC의 생리 적인 관련성 질문으로 불려 왔다.

또는, DC 비장 세포에서 정기적으로 격리 된 수 있습니다. 그러나, DC 구성 약 0.3-0.8% (약 7 × 105 DC/비장 결과), 총 비장 세포의이 세포, CD103만의+ DC 및 MoDC 림프 기관에 다시 마이그레이션할 수 있습니다. MoDCs 비장 DC 인구15,16의 약 10-15%를 구성, 이후 대부분 격리 프로토콜 약 1 × 105 MoDC 비장 당 양보. MoDC의 확장 GM-CSF, 비장 MoDC17100 증가 결과 분 비 하는 transfected B16 셀을 삽입 하 여 얻을 수 있습니다. 그러나, DC 백신 개발을 위한 MoDC의 사용은 제한 때문에 인간과 취득에이 절차를 수행할 수 없습니다 MoDC 이미 매우 활성화 됩니다.

DC의 적절 한 숫자를 얻는 이외에 헌 암 세포에 대 한 효과적인 DC 백신을 개발 하기 위한 또 다른 도전은 완전히 DC를 활성화 하는 종양에 충분 한 위험 신호의 부족을 포함 한다. Co-stimulatory 신호 유도 패턴 인식 수용 체 (PRR), 또는 c 형 lectin 신호 통로18,19,,2021의 활성화를 통해 일반적으로 달성 된다. DC를 활성화 하기 위한 더 접근 표면 Fcγ 수용 체 (FcγR)와 상호 작용을 통해 항 원까지 자신의 능력을 악용 합니다. 실제로, 중요 한 원고 수 나타났습니다 예방 설정에서 종양의 성장을 막을 수는 BM 선구자 활성화에서 MoDC의 주입 종양-IgG IC 및 설립된 종양22,23 의 박멸을 이어질 수 있습니다 .

2 최근 논문, Carmi 외 는 BMDC 및 비장 DC, 달리 고 혈액 종양에서 MoDC에 응답할 수 없습니다 IgG IC 추가 자극 없이 발견 했다. 이 티로신 인산 가수분해 효소 신호24,25FcγR 통제의 상부 세포내의 존재 때문에 발견 되었다. DC에서 중요 한 검사점을 정의 하 여이 작품 성공 DC 기반 예방 접종에 대 한 요구 사항에 대 한 중요 한 통찰력을 제공 합니다. FcγR 신호, 그리고 아마도 비슷한 인 산화 폭포를 활용 하 여 다른 lectin 수용 체에서 신호 수 있도록 추가 자극에 대 한 요구 따라서 그들의 고립 동안 DC의 애 벌 칠을 피하에 대 한 필요성을 밑줄.

따라서, 현재 프로토콜 혈액 및 종양, BM, 비장 DC에서 현저 하 게 다르다에서 MoDC의 격리를 설명 하 고 과정에서 고려 가치가 주의 강조.

프로토콜

프로토콜 아래 마우스 MoDC의 격리를 참조 하십시오 아직 전반적인 원리 다른 DC 하위 집합 셀에도 적용 될 수 있습니다. 12-16 주 된 C57Bl/6j 생쥐 실험 동물 관리 인증-공인 동물 시설에 대 한 미국 협회에서 유지 되었다. 모든 프로토콜은 스탠포드 대학 및-텔아비브 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다.

1. 종양의 절연 관련 Monocyte 파생 된 DC

  1. 층 류 두건에서 CO2 안락사 마우스에서 종양을 제거 하 고 소 태아 혈 청 (FBS) 없이 RPMI 매체에 종양을 배치 합니다.
    참고: 그것은 좋습니다 쥐를 면도 하는 모피에서 잠재적인 오염을 최소화 하기 위해 종양을 제거 하기 전에 그들을 70% 에탄올 스프레이. 더 큰 종양 때문에 허약 하 고 세포 죽음을 받아야 하는 경향이 경향이 적은 DC 종양 25-40 m m2 를 초과 하지 않는 수 있습니다. DC의 큰 숫자는 필요한 경우 각 마우스는 여러 사이트에서 종양 세포 주입 수 있습니다.
  2. 후드 무 균 층 류, 수술이 위를 사용 하 여 작은 조각 (대략 1 x 1 m m2)으로 종양을 잘라.
    1. 30 mL 메 마른 플랫 바닥 관으로 자기 저 어 바, 행 크의의 5 mL를 포함 하는 하나의 마우스에서 모든 종양 조각을 소금물 (HBSS), 2 mg/mL 콜라 4, 및 0.01 mg/mL DNase 균형 추가 나.
      주의: 골수성 세포 정상 상태 에서도 glycosylation 통해 에너지를 생산. 따라서, 10-15 분 만큼 적은 위해 포도 당 부족으로 포도 당 (HBSS, RPMI, 및 DMEM)를 포함 하는 유일한 사용 미디어 귀 착될 것 이다 세포 죽음 및 apoptosis 24 h.만 낮은 내 콜라 4, 콜라로 그람 양성 하 여 생산 사용 내 박테리아 (Clostridium histolyticum).
  3. 37 oC 인큐베이터에 약 200-400 rpm에서 20-30 분 자력으로 저 어.
  4. 완전 한 미디어의 5 mL을 추가 하 고 다시 적극적으로 일시 중단.
  5. 70 µ m 셀 스 트레이너를 통해 셀을 필터링 합니다. 작은 셀을 5-10 분 4 oC 400 rcf에 원심.
    주의: 직접 다음 효소 소화, 일부 종양 괴 고 상대적으로 많은 양의 세포 파편 또는 세포 외 기질을 포함 하는 셀을 분리 하지 마십시오. 셀 셀만을 얻기 위해 15% 밀도 그라데이션 매체에 적용 됩니다.
  6. 10 x PBS osmolality, 조정 하 고 100 %Percoll 재고 솔루션을 1 mL와 밀도 그라데이션 매체의 9 mL를 일시 중단 합니다. 믹스 1.5 mL 밀도 그라데이션 매체 8.5 mL HBSS 솔루션 재고와 종양에서 파생 된 셀 펠 릿으로 적극적으로 섞는다. 부드럽게 계층 15% 밀도 그라데이션 매체와 실 온에서 20 분 400 rcf에 원심 분리기의 정상 DMEM의 2 mL. 폐기 supernatants, 셀 튜브의 하단에 펠 릿을 형성 됩니다.
    1. 두 번 다시 10 ml HBSS 2 %FBS, 1% 페니실린/스, 그리고 10 mM EDTA (절연 버퍼), 그리고 원심 분리기 4 oC 400 rcf 5-10 분에 작은 셀을 그들을 일시 중단 하 여 수송과 세포를 씻어.
    2. Hemocytometer trypan 블루 가벼운 현미경을 사용 하 여 셀을 계산 합니다.
  7. 다시 일시 중단 1 x 108 셀 1 mL 절연 버퍼 및 4 oC CD11b의 30 μ와에서 그들을 품 어+ 활용 자석 구슬 15 분.
    주의:이 DC를 활성화 하 고 세포 죽음을 유도 것 이다 CD11c 활용 된 구슬, 사용을 하지 않습니다. 안티-CD16/32 항 체와 FcγRII 및 FcγRIII를 차단 하지 마십시오. 항 체를 차단 FcγR 선 지도 kinases의 강한 인 산화를 유도 하 고 DC 프라임.
    1. 4oc.에 5-10 분 동안 400 rcf에 절연 버퍼 및 원심 분리기 세포의 9 mL를 추가 하 여 초과 언바운드 비즈를 제거
  8. 상쾌한 발음 하 고 다시 1 mL 절연 버퍼에 셀을 일시 중단. 셀 prewashed 자석 열에 적용 됩니다. 두 번의 열 절연 버퍼의 3 mL 씻으십시오.
    1. 자석에서 열을 제거 합니다. 플라스틱 절연 버퍼 열에 6 mL 그리고 플런저를 밀어 여 살 균 컬렉션 튜브로 자석으로 표시 된 셀 밖으로 플러시. 원심 분리기 셀 400 rcf 4 oc.에 5-10 분에서
    2. 다시 1 x 107 셀 당 100 μ에서 세포를 일시 중단 하 고 다음 fluorophore 활용 된 항 체와 얼룩: 비재귀 부정적인 (TCRb, Siglec F, B220, CD19, FceRI 및 Ly6G), MHCII, Ly-6 C.
  9. 게이팅 측면 살포 (SSC)를 사용 하 여 작은 셀으로 셀을 정렬 하 고 산포 (FSC) 및 5 ng/mL GM-CSF를 보완 하는 완전 한 매체에서 문화 전달. 3 7 1 시간 동안 세포를 품 어 대 접시를 준수 할 수 있도록 oC. 그런 다음 전송에 느슨하게 및 새로운 문화 접시에 비 부착 한 세포.
    참고: 마우스 MoDC CD11b로 정의 된+/CD11c+/MHCII안녕하세요/Ly6Clo/int 7,,2627. Ly6C의 표현 다를 수 있습니다 극적으로 종양 모델 사이 및 일부 모델 (예: LMP)에 MoDCs 완전히 Ly6C 식 부족. 전반적으로, 100 m m3 B16F10 종양은 일반적으로 약 4-5 배 106 총 셀에에서 발생 하는 DC의 5 x 104 포함 한. 이러한 세포의 10-15%는 면역 세포 하 고 8-10%는 MoDC. DC 숫자를 증가 하는 것은 여러 사이트에서 종양 쥐를 주입 하 여 얻을 수 있습니다. 정렬만 작은 SSC/FCS 셀 다른 골수성 세포로 CD11c 및 Ly6C와 같은 마커 표현할 수 있습니다.
    선택 사항: MHCII에 대 한 부정적 표현 Ly6C안녕하세요 작은 SSC/FSC 셀으로 종양 침투 monocyte 정렬. 그 후, monocytes에서 생체 외에서 DC를 50 ng/mL GM-CSF와 문화.

2. 말 초 혈액에서 DC Monocyte 파생의 격리

참고: 성숙 MoDCs 마우스 혈액에 비교적 드문 때문에, 아래의 프로토콜은 그들의 파생에서 체 외에서 정렬된 monocytes에서 합니다.

  1. 혈액에 monocytes의 수준을 증가, 4 %isoflurane 쥐를 anesthetize 하 고 그들을 피하 주사 (사우스 캐롤라이나) 50 μ PBS에 GM-CSF의 1 μ g으로.
  2. 후 1-2 h, CO2를 사용 하 여 쥐를 희생.
    주의: 자 궁 경부 전위에 의해 한 생쥐 희생 하지이 내부 출혈이 발생할 것입니다.
  3. Euthanization, 직후 70% 에탄올으로 마우스를 살포 하 고 피부 심장 수술가 위, 살 균 층 흐름 후드를 사용 하 여 커버를 제거 합니다. 에탄올과가 위를 청소 하 고 심 혼의 오른쪽 아 트리 움 잘라. 천천히, 20 mm EDTA HBSS 10 mL 주사기와 25 G 바늘을 사용 하 여 우 심 실을 통해 마음을 플러시.
    1. Heparan 황산 염, EDTA를 포함 하는 살 균 관으로 흉 막 캐비티에서 무 균 주사기 혈액을 수집 합니다. 간 및 폐 되 핑크 나 화이트까지 중심부를 계속 합니다.
  4. 15 분 동안 실 온에서 400 rcf에 밀도 그라데이션 mediumand 분리기에 혈액 낮은 브레이크 적용.
    주의: 사용도 무료 밀도 그라데이션 매체 (보통 미만 0.12 mL 당 유럽 연합).
    1. 새로운 관으로 단 세포를 수집 합니다. 다시 10 ml 2 %FBS, 1% 페니실린/스와 10 mM EDTA (절연 버퍼), 그리고 4 o에서 다음 centrifuging HBSS C 400 rcf 작은 셀을 5-10 분에 대 한 일시 중단 하 여 세포를 씻어.
      주의: 적어도 1 g/L 포도 당을 포함 하는 미디어에만 사용 합니다.
  5. CD11b 긍정적인 선택, 다시 1 mL 절연 버퍼에 1 x 108 셀을 일시 중단 하 고 4 oc.에 CD11b 활용 자석 구슬의 50 μ와 15 분 동안 그들을 품 어
    1. 절연 버퍼의 9 mL을 추가 하 고 5-10 분 4 oC. Aspirate에서 400 rcf에는 supernatants centrifuging 여 초과 비즈를 세척 하 고 다시 1 mL 절연 버퍼에 셀을 일시 중단. 제조업체의 지침에 따라 prewashed 자기 열에 셀을 적용 합니다.
    2. 자석에서 열을 제거 하 고 플라스틱, 열에 절연 버퍼의 6 mL 플런저를 밀어 여 살 균 컬렉션 튜브로 자석으로 표시 된 셀 밖으로 플러시. 원심 4 oC. 세척에서 5-10 분 동안 400 rcf에 셀 절연 버퍼의 3 mL로 두 번 열.
    3. 1 x 107 셀/100 μ 절연 버퍼와 얼룩 다음 fluorophore 활용 된 항 체와 세포를 다시 중단: 0.1 μ g CD115, 0.25 μ g MHCII, 그리고 0.1 μ g Ly-6 C/1 x 106 셀.
  6. 게이팅 작은 측면 살포 (SSC)와 작은 앞으로 분산형 (FSC) 셀에 의해 셀을 정렬 합니다.
    참고: 마우스 염증 monocytes는 일반적으로 정의 된 CD115로+MHCIIlo/neg/Ly6C안녕하세요및 monocytes 순찰 CD115로 정의 됩니다/+/MHCIIlo/neg/Ly6Cneg 4, 5. 두 하위 집합 사이 분리는 필요 하다는 경우, 총 SSClo/FCSlo/CD115+/MHCIIlo 셀을 정렬할 수 있습니다. 순진한 및 종양 방위 쥐 포함 약 5-8 10 ×4 MoDC 혈액 및 최대 1 mL 당 105 MoDC 다음 x 4-5 GM-CSF의 주입. 그들의 약 70%는 염증 monocytes 고 30%는 monocytes를 순찰 하 고 있다.
  7. 완전 한 미디어 20 ng/mL GM-CSF와 보완에 1 x 106 셀/mL의 농도에서 세포 격판덮개 1 일 후 추가 4-5 일에 대 한 비 점착 및 느슨하게 부착 세포 새로운 플레이트와 문화를 전송.
    주의: DC 미디어 pyruvate와 보완 해야 하지.

3. 종양 IgG 면역성이 있는 복합물의 준비

  1. 완전 한 DMEM 미디어에서 70% 합류 하 75 cm2 문화 플라스 크에 문화 종양 세포.
    1. 0.25 %trypsin / EDTA-trypsinization 피하기 위해 가벼운 현미경 문화 플라스 크 및 모니터 셀 형태학에서 세포를 분리 하의 2 개 mL를 추가 합니다.
    2. 트립 신 소화를 억제 하 여 4 oC, 5-10 분 작은 셀 400 rcf에 원심 (trypsin의 2 개 mL) 당 완전 한 문화 미디어의 8 mL를 추가 합니다.
      참고: Mycoplasma 상업 PCR 키트를 사용 하 여 종양 세포를 확인 해야 합니다. 그램 음성 박테리아와 곰 팡이 독을 사용 하 여 Limulus Amebocyte Lysate (LAL)의 존재에 대 한 시험 분석 결과28). 혈 청 0.22 μ M 통과 하 고 9 연방 규정 코드 바이러스에 대 한 테스트 해야 합니다. 또한, 37 oc. 2 일에 대 한 파운드 agar 또는 국물, 그리고 문화에 100-200 μ를 놓아 문화 미디어와 세럼을 테스트
    3. 워시 세포 다시 다시 10 mL PBS와 5-10 분에 대 한 400 rcf에 원심 분리기에서 그들을 일시 중단 하 여 트립 신 및 혈 청 유적에서 상쾌한 발음 하 고 2 번 더 세척을 반복.
  2. 실 온에서 10 분 동안 버퍼링 1.8 %paraformaldehyde 셀을 수정 합니다.
    1. 다시 10 mL PBS와 5-10 분 4 oC 400 rcf에 원심 분리기에서 그들을 일시 중단 하 여 세포를 씻어.
    2. Aspirate supernatants, 반복 두 번 더 세척.
      선택 사항: 종양 이해 분석 실험에 대 한 셀 수 표시 37 oC에서 1 μ M carboxyfluorescein succinimidyl 에스테 르 (CFSE)를 포함 하는 PBS에서 5 분 동안 그들을 배양 하 여. CFSE는 얼음에 10 분에 대 한 완전 한 미디어 다음 침묵 이다. 셀 잔여 염료를 제거 하려면 2% 혈 청을 포함 하는 PBS에 광범위 하 게 세척 되어야 한다.
  3. 다시 잠재적인 비 특정 단백질-단백질 상호 작용을 차단 하기 위해 FACS 버퍼 (PBS 보충 fcs가 2% + 5 mM EDTA) 셀 안티-CD16/32의 0.5 μ g/mL를 일시 중단 합니다. 100 μ 당 1 x 105 셀의 농도에 U 자형 96 웰 스/접시 플레이트.
    1. 5 μ g-105 셀 x 5 ng/1에서에서 배열 하는 종양 바인딩 항 체의 다른 희석을 추가 합니다. 15-20 분 동안 얼음에 플레이트를 품 어.
      참고: IgG 항 체 기술된24로 단백질 A 열에 순진한 20-24 주 된 여성 쥐의 혈 청에서 고립 되었다.
  4. PBS의 150 μ를 추가 하 고 5-10 분 4 oC 400 rcf에 접시 centrifuging 여 세포를 씻어.
    1. supernatants 무시 하 고 두 번 세척을 반복 합니다. 다시 100 μ FACS 버퍼 fluorophore 활용 된 이차 항 체를 포함 하는 셀을 일시 중단 합니다. 20 분 동안 얼음에 플레이트를 품 어.
    2. FACS 버퍼의 200 μ를 추가 하 여 셀을 세척 하 고 접시 centrifuging 5-10 분에 대 한 400 rcf에 취소는 supernatants 및 세척을 반복.
    3. Cytometry 종양 바인딩 분석 하 고 셀 코트 하는 데 필요한 최소 농도 결정 합니다.
      참고: 항 체를 증가 하지 의미 형광 강도 (MFI)으로 얼룩진된 종양 세포의 이상 요소가 isotype 제어 후속 기능 분석에 사용할 수 없습니다.

4. 종양 IgG IC와 MoDC의 활성화

  1. 3.4.3 통해 3.1 섹션에 설명 된 대로 최소한의 IgG 농도와 종양 세포를 코트
    1. 종양 IC와 함께 MoDC를 활성화 하기 전에 1 일 GM-CSF를 포함 하는 MoDC 문화 미디어를 교체 합니다. 이렇게 하려면 부드럽게 미디어를 발음 하 고 미리 데워 진된 완전 한 문화 미디어와 한 번 세포를 씻어.
      참고: 적어도 2-3 h (또는 심지어 하룻밤) 정렬 후 GM-CSF 없이 완전 한 미디어, 그리고 IC와 그들을 활성화 하기 전에 격리 된 성숙한 종양 관련 MoDC 교양 수 한다.
    2. 종양 통풍 관 분석, CFSE 표시 된 종양 IC MoDC 1:5 (IC:MoDC)의 비율로 추가 및 1 x 106 DC 당 완전 한 미디어의 1 mL에 12-16 시간 밤새 품 어.
    3. FACS MoDC 활성화 실험의 분석, 1:1 (IC:MoDC) 비율에서 종양-IC를 추가 하 고 12-16 시간 밤새 품 어.
      참고: 것이 좋습니다 잘, 긍정적인 통제를 포함 하는 MoDC는 LPS 또는 다른 TLR agonists의 1 μ g/mL로 자극.
    4. supernatants 발음 다음 하룻밤 활성화, 그리고 세척 세포 부드럽게 세 번 절연 버퍼, 또는 10 m m EDTA HBSS.
    5. 접시에서 DC를 분리, 2-3 분 1 ml HBSS 10 mM EDTA를 포함 하는 셀을 품 어 하 고 활기찬 pipetting으로 세포를 분리 합니다.
    6. 400 rcf에 세포를 원심 하 고 다시 1 x 106 DC 90 μ PBS 2 %FCS, 5 mM EDTA (FACS 버퍼)와 0.5 μ g 항 체를 차단의 보충을 중단. 5-10 분 동안 얼음에 품 어.
    7. 얼룩이 지는 세포에 항 체 혼합물의 10 μ를 추가 하 고 15 분 동안 얼음에 품 어.
    8. 셀을 5-10 분 4 oC 400 rcf에 원심 분리기 2 mL FACS 버퍼를 추가 합니다.
  2. 다시 200 μ FACS 버퍼에 셀을 일시 중단 합니다.
    1. 추가 0.5-1 μ g/mL DAPI의 분석에서 죽은 세포를 제외 하는 샘플을 실행 하기 전에 1-2 분. 마십시오 하지-품 어 DAPI로 MoDC 10-15 분 이내에 그것을 걸릴 것 이다.

결과

우리는 처음 종양 세포에 바인딩할 순 syngeneic 고 수용자 쥐에서 항 체의 용량 비교. 이 위해, B16F10 LMP 종양 세포 라인 paraformaldehyde에서 고정 되었고 광범위 하 게 씻어. B16F10 흑색 종 세포 선, C57Bl/6 마우스의 폐 전이에서 원래 고립 되었다 이다. LMP는 KrasG12D에서 고립 되었다 췌 장 종양 세포 / +, LSL-Trp53R172H / +, 그리고 Pdx-1-Cre 마우스 129F1 마우스에 꾸준히 성장 하 고. IC를, 종?...

토론

마우스에 우 두를 접종에 필요한 DC의 많은 수를 감안할 때 (약 2-4 x 106 DC 한 마우스 당), 예방 접종 BM과 비장 뒤에 그들의 비보 전 활성화에서 DC의 격리를 기반으로하는 생쥐에서 전략의 대부분. 그러나, 종양 DC에서 vivo에서, 비장 및 BM DC 활성화에 대 한 동일한 조건을 사용 하 여 활성화, 자주 하지 효과적인 면역 생산에 성공 하려고 합니다. 두 후속 출판물, Carmi 외. 그 ...

공개

모든 저자 그들은 충돌의 관심을가지고 그들은 공개 없다 선언 합니다.

감사의 말

없음

자료

NameCompanyCatalog NumberComments
Ficoll-Paque PREMIUMGE-Healthcare17-5442-02
OptiPrepStemCell Technologies07820
CD45 MicroBeadsMiltenyi130-052-301
EasySep Monocyte Isolation KitStemCell Technologies19861
Collagenase IVSigmaC9697-50MGTest each lot for endotoxin
DNase ISigmaDN25-10MG
HBSSThermoFisher14025092
FBSThermoFisher16140071Test each lot for endotoxin
PE-CD11cBiolegend117307
APC-CD11bBiolegend101211
Brilliant Violet 650 MHCIIBiolegend107641
AF48- CD86Biolegend105017
APC/Cy7-Ly-C6Biolegend108423
PE/Cy7-CD15Biolegend135523

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