1. 실험 설정

1. 광섬유 광원 가이드를 사용하여 광섬유 광원을 형광 이미징 시스템에 연결합니다.
2. 실험에 적합한 여기 필터를 선택합니다. 여기 필터는 시료에 전달되는 빛의 파장을 결정하고 시료에 도입된 플루오로포어의 내분 스펙트럼과 일치하도록 선택되어야 한다.
3. 적절한 배출 필터를 선택합니다. 방출 필터는 자동 불발성에 기인할 수 있는 원치 않는 스펙트럼 성분을 차단하고, 형광의 방출 스펙트럼에 맞추기 위하여 선택되어야 합니다.

2. 샘플 준비

1. 인 비보
   1. 유량계 다이얼에 3-4%의 농도로 이소플루란을 사용하여 유도 챔버에서 동물을 마취시화합니다.
   2. 동물을 이미징 단계에 고정된 코 콘으로 옮기고, 1-2%의 농도로 이소플루란을 유지한다. 열원은 동물이 일반적으로 짧은 시간(> 5분)에만 이미지되기 때문에 필요하지 않으며 체온이 크게 감소하지 않습니다.
   3. 동물의 발을 고정하여 모션 아티팩트를 최소화합니다. 탈필 크림을 적용하여 관심 지역에서 머리카락을 제거합니다.
   4. 필요한 가장 작은 부위에 디필 레고 크림을 바르습니다. 30 s 후 거즈 패드로 닦아냅니다. 에틸 알코올 촉촉거제 패드로 이 지역을 두 번째로 닦아 데필 크림을 완전히 제거합니다.
   5. 각막건조를 방지하기 위해 안과 연고를 눈에 바치십시오.
   6. 활성 형광 분자 프로브를 동물에 주입하십시오. 이 특정 응용 프로그램의 경우, MMP2 활성 프로브는 꼬리 정맥에 정맥내 주입되었다. 이 시점에서 마우스를 이미지화할 수 있습니다. 계속하려면 이 프로토콜의 "이미지 인증"으로 진행합니다. 간단한 절차를 통해 규칙적인 호흡을 위해 동물을 모니터링하십시오.
2. 엑스 비보
   1. 형광 프로브의 주입에 따라, 동물의 안락사에 대한 2013 AVMA 지침에 따라 인간적인 방법으로 동물을 안락사. 이산화탄소 (CO₂₎과다 복용은 작은 동물을 안락사하기위한 표준 관행이다.
   2. 외과적으로 관심있는 조직이나 장기를 추출하고 조심스럽게 집게와 과잉 지방 조직을 제거합니다.
   3. 인산염 완충식식염에 있는 조직을 헹폐하여 잔류 혈액을 제거하고 이미징 단계에 직접 샘플을 놓습니다.

3. 이미지 수집

1. 분자 이미징 소프트웨어를 열고 광섬유 광원과 형광 이미징 시스템을 모두 켭니다.
2. 획득 창을 열고 스터디에 적합한 노출 유형을 지정합니다. 사용 가능한 노출에는 단일 이미지를 캡처하는 표준 노출, 고정 된 시간 간격으로 일련의 이미지를 캡처하는 시간 경과 노출, 다양한 노출 시간에 연속 노출 시퀀스를 캡처하는 프로그레시브 노출 등이 있습니다.
3. 자외선-트랜스실린미네이션을 일루미네이션 소스로 선택합니다.
4. 미리 보기 된 이미지를 참조로 사용하여 캡처 시스템 챔버의 렌즈 초점, 시야 및 f 스톱 / 조리개를 조정하여 샘플링 된 이미지 품질을 최적화합니다. 샘플의 노출 시간과 위치를 조정합니다.
5. 미리 보기 창을 닫고 획득 창의 모든 매개 변수가 카메라 및 필터 설정과 일치하는지 확인합니다.
6. '노출'을클릭하여 이미지를 획득하고 저장합니다.
7. 표준 분자 이미징 소프트웨어는 일반적으로 이미지 분석을 위한 형광 신호를 정량화하기 위해 다양한 분석, 측정 및 이미지 보정 도구를 제공합니다.
8. 이미징 세션이 끝나면 샘플/동물을 제거하고 시스템을 끄고 이미징 단계를 청소하여 시스템 손상을 최소화합니다.