저자들은 협력과 물류 지원 분석 화학, 로마 대학 &quot;토르 Vergata 호텔&quot;의 실험실에서 낸시 다우너 모든 회원에게 감사를 표합니다. 이 작품은 유럽 연합 (EU) 프로젝트 &quot;BioCop&quot;에 의해 지원되었다.

1) 코팅 자성 비즈를 차단 : 로 코팅 자기 구슬을 차단 따라 진행 : <ol><li> 2 ML Eppendorf 튜브 세트를 준비; </li><li> ; (vortexing하지 떨고 있지만) 믹서 회전 샘플을 사용하여 코팅 자기 구슬을 (코팅 자성 비즈의 준비에 대한 부록 참조) 균질 </li><li> 즉시 균질 후 피펫 각각 별도의 Eppendorf 튜브에 코팅 자기 구슬 10 μl; </li><li> 설정의 각 Eppendorf 튜브에 솔루션을 차단 무지방 우유의 1ml을 추가; </li><li> 회전 샘플 믹서에 실온에서 30 분 품어 자기 구슬을합시다; </li><li> 솔루션 차단 제거 : 2 분 (튜브의 측면 벽에 튀어나와 자기 구슬을 참조)에 넣어 자석 부분 자기 입자 농축기에 튜브를 삽입 이렇게로, 신중하게 구슬은 그대로두고, 뜨는을 피펫; </li><li> PBS 버퍼 + 난 3 + BSA 각 튜브위한 스토리지 솔루션으로 1 ML 추가; </li><li> 4 코팅 및 차단 자기 구슬을 저장 ° C (코팅 자성 비즈 4 ° C에서 최소 2 개월 안정 것에주의하십시오); </li></ol> 교정 곡선의 건설 및 샘플 분석을위한 자성 비즈 2) 면역 체인 측정 준비가 자기 구슬을 가지고 다음과 같이 진행 : <ol><li> 이 분석가는 각 샘플 추출을위한 코팅 및 차단 솔루션 중 하나 Eppendorf 튜브 (2 ML)를 타고; </li><li> 각 작업 calibrant 솔루션 추가 Eppendorf 튜브를 타고; </li><li> 사용하기 전에 회전 샘플 믹서 2 분 자기 구슬을 균질; </li><li> 자기 입자 농축기를 사용하여 스토리지 액체를 제거; </li><li> PBS / BSA 세척 솔루션 자석 구슬 세 번 씻으십시오. 액체를 세척 제거; </li><li> 경쟁 단계 : 준비 추출 시료의 200μl 씻어 자기 비즈를 포함한 각각의 튜브에 대한 추가, 각 시료에 대해 하나 마그네틱 비드 튜브를 사용합니다. 각 표준 용액에 대해 동일한 절차를 반복합니다. 각각의 자석 구슬 튜브에 단클론 항체 용액 200 μl를 추가합니다. 자석 구슬은 상온에서 회전 샘플 믹서에 반 시간 동안 품어 보자; </li><li> Eppendorf 튜브에서 경쟁 단계에 사용되는 솔루션을 제거; </li><li> 단계를 레이블 : 각 마그네틱 비드 Eppendorf 튜브에 표시 이차 항체의 400μl를 추가합니다. 자석 구슬은 상온에서 회전 샘플 믹서에 반 시간 동안 품어 보자; </li><li> Eppendorf 튜브에서 솔루션을 라벨링 제거; </li><li> 자석 구슬에게 PBS / 트윈과 함께 세 번 ® 20 세척 솔루션을 씻으십시오. 액체를 제거; </li><li> DEA 버퍼의 100μl 자석 구슬의 각 나누어지는와 Resuspend. 이제 자기 비즈는 전기 측정 단계에 대한 준비가되어; </li></ol> 멀티플렉서 (MUX) 옵션과 함께 PalmSens 3) 조립 참고 : 기판 가수 분해 효소의 제품은 전극 표면을 파울, 이런 이유로 새로운 전극은 각 측정을 위해 필요합니다. <ol><li> 직렬 케이블을 통해 PalmSens에 PC 노트북에 연결; </li><li> PalmSens과 CH8 멀티플렉서의 9 - DIN 플러그를 연결합니다. </li><li> CH8 멀티플렉서가있는 8 채널 MUX 전기 접촉의 직렬 케이블을 연결합니다; </li><li> 8 자석 블록에 삽입 전극 스트립. 각 작업 전극 아래에 각각의 자석을 배치주의 (참고의, 각 전극에 대해 하나의 자석의 필요 달리 자석 입자가 작업 전극 지역에 집중되지 않습니다 필수적입니다); </li><li> 여덟 채널 MUX 전기 접촉 전극 스트립에 연결; </li></ol> DPV 측정에 해당하는 상자에 다음 매개 변수를 사용 E 시작 : 0 (V), E 끝 : 0.6 (V), E 단계 : 0.016 (V); E 펄스 : 0.0339 (V); E 에어컨 : 0 (V), E 증착 : 0 (V), 스캔 속도를 : 0.1 (V / S), T 펄스 : 0.06 (S), T 컨디셔닝 : 0 (S), T 증착 : 0 (S), T의 평균 : 8 (S). 4) 효소 반응과 전기 화학 측정 <ol><li> 부드럽게 자기 구슬을 잘 분산된 현탁액을 얻기 위해서는 전기 측정 단계에 대한 준비가 자기 구슬을 포함하는 각 Eppendorf 튜브를 흔들어하여 균질; </li><li> 바로 균질 후 각 Eppendorf에서 피펫, 해당 작업 전극 표면에 자성 비드 분산의 20 μl의 나누어지는. 한 스트립을 사용 각각의 전극 다른 Eppendorf 튜브 (8 전극 사용 8 개 Eppendorf에 대한 예)에서 촬영한 자기 구슬 20 μl에 대한; </li><li> 첫 번째 전극에 효소 기판 솔루션의 80 μl를 추가합니다. 2 분 카운트 다운 시작합니다. 14 초 후, 두 번째 전극에 효소 기판 솔루션의 80 μl를 추가합니다. 추가로 14 초 후, 세 번째 전극에 효소 기판 솔루션의 80 μl를 추가합니다. 동시에 INT에서 진행마지막 전극 (14 초 간격과 기판의 각 나누어지는를 드롭 의미)까지 erval (14 초). 14 초의 간격 시간은 측정을 수행할 수있는 potentiostat에 필요한 시간 계산, 노트, 각 센서에 80 μl 솔루션은 작업, 참조 및 카운터 전극을 커버한다. 또한, 각 센서에 대한 솔루션은 인접한 전극의 솔루션을 접촉해서는 안됩니다. </li><li> 2 분 효소 기판 솔루션의 첫 번째 이외의 카운트 다운 후, 전기 측정을 시작합니다; </li><li> 각 솔루션에 대한 현재의 봉우리 (μA)를 얻기 위해 PalmSens 라이트 소프트웨어를 사용합니다. </li></ol> 5) 계산 물류 4 매개 변수 방정식을 사용하여 교정 곡선을 수립하고 미지의 샘플을 포함하는 각 Eppendorf 튜브에 대한 밀리리터 당 나노 그램 총 HT-2/T-2 독소 금액의 농도를 계산합니다. 실험 데이터 calibrants의 농도 (NG / ML)에 대한 피크 높이 (μA)는 비선형 안경 매개 변수 물류 (4 - PL) 시그마 플롯 8.0 이상을 사용 방정식의 음모 (1) (사용 장착되어 있어야 Kaleidagraph). 비선형 4 PL 모델은 일반적으로 리간드 바인딩 assays (LBAs) 6를 설명하기 위해 채택됩니다. <img src="/files/ftp_upload/1588/1588eq1.jpg" alt="방정식 1" /> (1) 시그마 플롯 곡선에 맞게 프로그램이 주어진 A, B는, y0는 물류 매개 변수 X0 있습니다. 희석 샘플 추출 솔루션 HT-2/T-2 독소 총 금액의 내용을 계산하는 수식을 사용 explicated <img src="/files/ftp_upload/1588/1588eq2.jpg" alt="방정식 2" /> (2) x는 milliltre 당 nanogram의 물류 사 매개 변수 방정식 (NG / ML)에서 계산된 희석 추출 솔루션에 HT-2/T-2 독소의 총 금액의 질량 농도는 y는 미지의 시료에 대해 얻은 μA의 전류 값이 부록 6) 코팅 자성 비즈 코팅 자기 구슬을 가지고 다음과 같이 진행 : 절차를 워싱 <ol><li> tosylactivated Dynabeads을 균질 ® M - 280 (재고 솔루션 2 X 109 구슬 / ML) 1 분 (거품 방지) (자성 구슬의 농도를 유의하시기 바랍니다의 재현성을 보장하기 위해 항상 동일해야합니다에 대한 떨고 (최대 속도) vortexing으로 측정); </li><li> 즉시 2 ML Eppendorf 튜브에 위의 균질 비즈 1 ML을 피펫; </li><li> 2 분 (튜브의 측면 벽에 튀어나와 자기 구슬을 참조)에 넣어 자석 부분 자기 입자 농축기에 튜브를 삽입; </li><li> 조심스럽게 구슬은 그대로두고, 뜨는을 피펫; </li><li> 자기 입자 농축기에서 Eppendorf 튜브를 제거하고 0.1 M borate 버퍼 산도 9.5 1 ML에있는 구슬을 resuspend. 2 분에 대한 회전 샘플 믹서 2 분 부드럽게 믹스; </li><li> 뜨는을 피펫; </li><li> Eppendorf 튜브에 borate 버퍼 솔루션의 피펫 1 ML. 마그네틱 구슬 지금은 코팅 단계에 대한 준비가되어; </li></ol> 코팅 절차 <ol start="8"><li> 부화 자기 구슬과 HT - 2 - KLH 솔루션, KLH (키홀의 림펫 Hemocyanin) 주식 자석 구슬 1 ML하는 솔루션) (375 MG / ML 최종 HT - 2 - KLH 농도)와 HT - 2 복합 600 ML 추가 20h 37 ° C * 샘플 믹서 회전에 속도 기울기 회전; </li><li> 부화 장소 뜨는에서 자기 입자 농축기와 피펫의 튜브 후; PBS / BSA 버퍼 솔루션 1 ML과 코팅 구슬 두 번 씻으십시오. 각 세척 사이 PBS / BSA 솔루션을 제거합니다. 모든 세척 단계는 5 분 회전 믹서에 자석 구슬과 PBS / BSA 설정을 수행했다; </li><li> 트리스 / BSA 버퍼 솔루션 1 ML을 사용하여 한 번 자기 구슬을 씻으십시오. 트리스 / BSA 솔루션을 제거합니다. 37 4 H 위해 믹서를 회전에 자성 비즈와 트리스 / BSA 버퍼를 설정하여이 단계를 수행 ° C *; </li><li> 상쾌 중 1ml를 (4 냉장고에 보관 ° C) PBS / BSA 버퍼 솔루션입니다. 사용하여 한번 자기 구슬 와시 PBS / BSA 솔루션을 제거합니다. 상온에서 5 분을위한 믹서 회전에 자성 비즈와 PBS / BSA 버퍼를 설정하는이 단계를 수행; </li><li> 단계는 모든 세탁 액체를 제거하고 추가 세척 후 1 ML PBS 버퍼 + 난 3 + BSA 저장 액체로; </li><li> 4 코팅 자기 구슬을 저장 ° C (코팅 자성 비즈 4 적어도 2 개월 안정는 것을 유의하십시오 ° C); </li></ol> *이 목적 믹서는 전원 공급 장치의 케이블의 삽입을 허용하는 구멍을 갖춘 오븐에 배치됩니다. 또는 믹서는 ° C.는 37 thermostated 방에 배치 수 7) 샘플 준비 및 추출 잘게 지상 샘플 25g (아기 음식이나 아침 시리얼)은 우리 아르믹서 용기에 ighed 및 고속 믹서에서 3 분 acetonitrile / 물 솔루션 (14분의 86) 100 ML로 추출. 5 분 4,000 RPM (3000 G), 뜨는 8 ML이 Mycosep 칼럼로 찍은 및 정화되었다에서 원심 분리 후, 청소 추출 4 ML은 질소 흐름 하에서 건조되었다. 말린 샘플이 몇 개월 -30 ° C에서 최대 저장할 수 있습니다. 8) 샘플 reconstitution 아침 시리얼 Reconstitute PBS 산도 7.4의 40 ML과 말린 아침 시리얼 추출물 (시리얼 기반의 음식이 성인 소비 운명). 이런 방식으로되어 법정 한도 (200 NG / G)와 같은 독소의 농도와 예제는 측정 단계에서 작업 범위의 중간에 떨어지는 신호를 제공합니다. 유아식 PBS 4 ML과 Reconstitute 말린 베이비 푸드 추출물 (시리얼 기반의 식품 유아 소비 운명). 이런 방식으로되어 법정 한도 (20-25 NG / G)와 같은 독소의 농도와 예제는 측정 단계에서 작업 범위의 중간에 떨어지는 신호를 제공합니다.

<ol>
	<li>Koch, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+of+trichothecenes+analysis.">State of the art of trichothecenes analysis.</a> Toxicol. Letters. 153, 109-112 (2004).</li><li>Krska, R., Baumgartner, S., Josephs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+in+the+analysis+of+type-A+and-B+trichothecene+mycotoxins+in+cereals.">State of the art in the analysis of type-A and-B trichothecene mycotoxins in cereals.</a> Fresenius J. Anal. Chem. 371, 285-299 (2001).</li><li>Morozova, T. Y., Morozov, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+differentiation+in+recognition+of+cross-reactive+antigens+by+magnetic+beads.">Force differentiation in recognition of cross-reactive antigens by magnetic beads.</a> Anal. Biochem. , 263-271 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FAO+Food+and+Nutrition+Paper+74.">FAO Food and Nutrition Paper 74.</a> JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES Fifty-sixth meeting. , 115 (2001).</li><li>Piermarini, S., Volpe, G., Ricci, F., Micheli, L., Moscone, D., Palleschi, G., Fuhrer, M., Krska, R., Baumgartner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Screening+Electrochemical+Methods+for+Aflatoxin+B1+and+Type-A+Trichothecenes:+a+preliminary+study.">Rapid Screening Electrochemical Methods for Aflatoxin B1 and Type-A Trichothecenes: a preliminary study.</a> Anal. Lett. 40, 1333-1346 (2007).</li><li>Findlay, J. W. A., Dillard, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appropriate+calibration+curve+fitting+in+ligand+binding+assays.">Appropriate calibration curve fitting in ligand binding assays.</a> AAPS J. 9 (2), E260-E267 (2007).</li><li>Ricci, F., Volpe, G., Micheli, l., Palleschi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+novel+developments+and+applications+of+immunosensors+in+food+analysis.">A review on novel developments and applications of immunosensors in food analysis.</a> Anal. Chim. Acta. 605 (2), 111-129 (2007).</li></ol>

biomolecular 인식 프로브로 항체의 사용은 감지 기술을 널리 사용 가능성을 보여줬습니다, 같은 ELISAs 및 MEIAs 같은 immunochemical 검색 방법론은 많은 실험실 7 가장 많이 사용되는 응용 플랫폼 간의 요즘입니다. 이러한 방식은 지난 몇 년 동안 뛰어난 감도와 특이성, 많은 연구 그룹의 주요 목표를 달성하는 동시에 공연의 개선과 최적화를하고 있습니다. <p class="jove_conten...

시약 <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 염화칼륨 </td><td> 시그마 </td><td> P9333 </td><td></td></tr><tr><td> 칼륨 dihydrogen 인산 </td><td> 시그마 </td><td> P9791 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 수소 나트륨 </td><td> 시그마 </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 염화물 </td><td> 시그마 </td><td> S3014 </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 무수 </td><td> 시그마 </td><td> M8266 </td><td></td></tr><tr><td> DEA (99.5 %) </td><td> 시그마 </td><td> 31,589 </td><td></td></tr><tr><td> HCL 37% </td><td> 시그마 </td><td> 320331 </td><td></td></tr><tr><td> H 3 BO 3 </td><td> 시그마 </td><td> B6768 </td><td></td></tr><tr><td> 트리스 [히드록시 메틸] - aminomethane </td><td> 시그마 </td><td> 252859 </td><td></td></tr><tr><td> BSA (소 혈청 알부민) </td><td> 시그마 </td><td> A4503 </td><td></td></tr><tr><td> NaOH </td><td> 시그마 </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> 트윈 20 </td><td> 시그마 </td><td> P9416 </td><td></td></tr><tr><td> 난 3 </td><td> 알드리치 </td><td> 71,290 </td><td></td></tr><tr><td> 1 - 인산 나트륨 소금 Naphthyl </td><td> Fluka </td><td> N7255 </td><td></td></tr><tr><td> 무지방 우유 차단 솔루션 - 비 지방 건조 우유 </td><td> 바이오 래드 </td><td> 170-6404 </td><td></td></tr><tr><td> KLH (키홀의 림펫 Hemocyanin), 주식 솔루션 (PBS 1 MG / ML)와 HT - 2 복합 : </td><td> Biopure </td><td> 004050 </td><td> HT - 2 - KLH 공액은 HT - 2 독소에 위치 3과 4에서 무료로 OH - 그룹이 N, N&#39; - carbonyldiimidazole (CDI)과 활성 HT - 2 독소 였어요 활성화되었습니다 CDI - 방법으로 얻은 것입니다 안정 carbammate 연계를 생성하는 단백질 (KLH)의 aminogroups와 반응을 보자. </td></tr><tr><td> 보조 라벨 항체 : 말에서 방지 마우스 IgG (H + L), 알카라인 인산 가수 분해 효소와 복합, 집중력 1 MG / ML. </td><td> 벡터 연구소 </td><td> AP - 2000 </td><td></td></tr><tr><td> HT - 2 독소 </td><td> Biopure </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 자기 구슬 : Dynabeads ® </td><td> Dynal </td><td> M - 280 Tosylactivated </td><td> 농도 2 X 10 9 구슬 / ML. </td></tr></table> 솔루션 <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 준비 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 인산은 생리 (PBS), pH를 7.4 버퍼 </td><td> 물 900 ML에 염화칼륨 0.20 g, 칼륨 dihydrogen 인산의 0.20 g, 나트륨 수소 나트륨 1.16 g의 나트륨 염화물의 8.00 g을 풀다 </td><td></td></tr><tr><td> Diethanolamine 버퍼, DEA, 0.97 M + 1 ㎜ MgCl 2 + 0.15 M KCl, pH를 9.8 </td><td> MgCl 2 무수 물 ~ 300 ML에서 KCl의 7.3.59 g의 0.0476g을 디졸브. 해산 후 DEA 51 ML (99.5 %)를 추가합니다. HCL (6 M)과 9.8으로 산도를 조정합니다. 물 500 ML로 희석. </td><td></td></tr><tr><td> Borate 버퍼, 0.1 M, pH를 9.5 </td><td> 증류수의 ~ 300 ML에 H 3 BO 3 3.09 g을 디졸브, NaOH 및 / 또는 HCL (6 M 이하 농도)를 9.5으로 산도를 조정합니다. 증류수 500 ML로 희석. </td><td></td></tr><tr><td> 트리스 버퍼, 0.2 M, pH를 8.5 </td><td> 트리스 [히드록시 메틸] 물 100 ML 인 aminomethane의 3.85 g을 디졸브. NaOH 및 / 또는 HCL (6 M 이하 농도)로 산도 8.5을 조절할 수 있습니다. 물 200 ML로 희석. </td><td></td></tr><tr><td> 트리스 버퍼 + BSA 용액 (0.1 %), 산도 8.4 </td><td> 트리스 버퍼 산도 8.4의 50 ML에 BSA의 0.050 g을 디졸브. </td><td> 이 솔루션은 갓 이용 당일 준비하셔야합니다. </td></tr><tr><td> PBS 버퍼 + 트윈 ® 0.05 % </td><td> 이전에 준비 PBS 버퍼, pH를 7.4 500 ML에 트윈 20 0.250 g을 풀다 </td><td></td></tr><tr><td> PBS 버퍼 + BSA 용액 0.1 % </td><td> PBS 버퍼, 산도 7.3의 50 ML에 BSA의 0.050 g을 디졸브. </td><td> 이 솔루션은 갓 이용 당일 준비하셔야합니다. </td></tr><tr><td> PBS 버퍼 + BSA 0.1 % + 난 3 0.02 % </td><td> PBS 버퍼, 산도 7.3의 50 ML에 0.050 BSA의 g와 할머니 3 0.010을 디졸브. </td><td> 스토리지 솔ution </td></tr><tr><td> 효소 기판 </td><td> DEA 버퍼 산도 9.8의 100 ML 1 - Naphthyl 인산 나트륨 소금 0.010 g을 디졸브. 알루미늄 호일에 단단히 휴대용 술병을 넣어. </td><td> 이 솔루션은 갓 이용 당일 준비하셔야합니다. </td></tr><tr><td> 무지방 우유 차단 솔루션 </td><td> PBS 버퍼 산도 7.3 200 ML에 학년 차단기 비 팻 건조 우유 (바이오 - 래드, 헤라클레스, CA, 미국)를 모래 바닥의 0.20 g을 추가합니다. </td><td> 이 솔루션은 갓 이용 당일 준비하셔야합니다. </td></tr><tr><td> HT - 2 주식 솔루션 </td><td> 줄 acetonitrile 10 ML에 trichothecene HT - 2 독소의 약병 10 MG를 디졸브 1 MG / ML의 농도와 솔루션입니다. </td><td> 30 ML의 단일 사용 aliquots에이 솔루션을 나눠 -30 ° C. 이하에서 그들을 저장 </td></tr><tr><td> HT - 2 표준 용액 근무 </td><td> 2 ML로 HT - 2 독소 주식 솔루션의 피펫 20 ML은 용적 플라스크를 보정 및 10 μg / trichothecene 독소 ML을 포함 HT - 2 작업 솔루션을 얻기 위해 acetonitrile로 희석. </td><td> 이 솔루션은 갓 이용 당일 준비되어야합니다. </td></tr><tr><td> HT - 2 작업 calibrant 솔루션 </td><td> 작업 calibrant 솔루션 100 NG / ML을 준비하는 HT - 2 작업 표준 용액 (10 μg / ML) 희석. 희석 HT - 2 calibrant 솔루션을 작업 100 NG / 다음과 같은 농도 0 (빈), 0.5, 1, 2, 4, 10 NG / ML의 calibrant 솔루션을 작업 준비 ML. </td><td> 이 솔루션은 사용 당일 신선한 준비되어야합니다. </td></tr><tr><td> KLH와 HT - 2 복합 </td><td> 350 μl의 단일 사용 aliquots로 KLH (키홀의 림펫 Hemocyanin) 주식 솔루션 (PBS 1 MG / ML)와 HT - 2 복합 헤어졌다. </td><td> -30 ° C.에 저장 aliquots </td></tr><tr><td> 특정 단클론 항체 </td><td> 경쟁 단계에서 사용하는 PBS의 단클론 항체의 주식 농도 (1.383 MG / ML) : 1:350 (V V)를 희석 </td><td> 이 솔루션은 사용의 순간에 신선한 준비하셔야합니다. 3.5 ML의 최종 볼륨 PBS에서 10 ML 항체 주식 솔루션은 17 표준 및 / 또는 샘플을 분석하는 데 충분합니다. </td></tr><tr><td> 보조 라벨 항체 </td><td> PBS 경쟁 단계에서 사용하는 : 알카라인 인산 가수 분해 효소와 함께 복합 방지 마우스 IgG (H + L)은 1:100 (V V)를 희석합니다. </td><td> 10 ML의 최종 볼륨 PBS 100 μl 항체 주식 솔루션은 25 표준 및 / 또는 샘플을 분석하는 데 충분합니다. 이 솔루션은 사용의 순간에 신선한 준비하셔야합니다. </td></tr></table> 기구 <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 자기 입자 농축기 : MPC ® - S </td><td> Dynal </td><td></td></tr><tr><td> PalmSens 악기 </td><td> PalmSens </td><td> PalmSens 라이트, 직렬 케이블 연결 PC 노트북 및 MUX 옵션 소프트웨어와 함께 제공된 </td></tr><tr><td> CH8 PalmSens 멀티플렉서 </td><td> PalmSens </td><td></td></tr><tr><td> 에이트 채널 MUX 전기 문의 </td><td> 손으로 만든 </td><td></td></tr><tr><td> 여덟 화면 인쇄 전극 (SPEs)와 스트립 </td><td> 손으로 만든 </td><td></td></tr><tr><td> 전극 스트립을 위해 특별히 고안된 지원 </td><td> 손으로 만든 </td><td> SPE의 각 작업 전극 표면 아래에 배치됩니다 각 8 네오디뮴 자석을 포함 </td></tr><tr><td> 보정 microliter의 pipettes </td><td> 길슨 </td><td></td></tr><tr><td> 자기 활동가 및 저어 바. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 유리 비커 (100, 50, 20 ML). </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 용적 flasks (2ml). </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0.2 및 2ml Eppendorf 튜브. </td><td> Eppendorf </td><td></td></tr><tr><td> 5ml와 15ml의 팰컨 ™ 튜브. </td><td> 매 </td><td></td></tr><tr><td> 연구실 소용돌이 믹서 </td><td></td><td> proteic 부품 denaturing 피하기 위해 면역 체인 HT2 - KLH로 코팅 또는 연결된 자기 구슬을 resuspend에 와동 믹서를 사용하지 마십시오 </td></tr><tr><td> 실험실 오븐이나 thermostated 방 </td><td></td><td> 37 온도 ± 3 ° C.를 유지할 수 오븐을 선택하십시오 </td></tr></table>

elime (enzyme linked immuno magnetic electrochemical) method for mycotoxin detection

Immunoassays은 더 비싼과 시간이 소요되는 정량 HPLC 또는 GC 1, 식품 상품에 유해 mycotoxins의 심사 검출을위한 2 가지 방법에 대한 유효한 대안입니다. 이 프로토콜에서는 플랫폼을 감지으로 immunochemical 체인 3 화면 인쇄 전극에 대한 견고한 지원과 같은 자성 구슬의 사용에 따라 연결 immunomagnetic 분석을 조작하고 전기 경쟁력있는 효소를 심문하는 방법을 보여줍니다. 우리의 방법은 HT - 2 T - 2 독소의 총 금액 trichothecenes 가족과 인간의 건강 4 큰 우려에 속하는 먹은 사람은 미세 독소를 섭취하게 결정하는 것을 목표로하고있다. HT - 2 및 T - 2 향한 100 % 교차 반응과 항체 클론의 사용은 동시에 유사한 민감도 5 독소를 모두 검색할 수 있습니다. 우리의 분석의 첫 번째 단계는 우리가 자기 구슬의 표면에 HT2 - KLH 공액 독소를 무력화 코팅 단계입니다. 불특정 absorptions을 피하기 위해 필요한 차단 단계 후, 단클론 항체의 추가는 허용 고정화 HT - 2와 샘플 무료 HT - 2 T - 2 현재 또는 표준 용액에 녹아있는 사이의 경쟁. 경쟁 단계의 끝에, 단클론 항체의 양을는 링크된 HT - 2 샘플 솔루션에 독소의 금액에 반비례한다 고정화. 알칼리성 인산 가수 분해 효소 (AP)로 표시 이차 항체는 특정 항체와 고정화 HT - 2 사이의 바인딩을 공개하는 데 사용됩니다. 최종 측정 단계는 화면 인쇄 작업 전극의 표면에 특정 샘플 / 표준 용액에 해당하는, 자기 비드 정지 나누어지는 놓아 수행, 자석 구슬은 아래에 정확하게 위치 자석에 의해 고정하고 집중되고있다 화면 인쇄 전극. 자기 구슬과 AP의 기판 사이에 부화 두 분 후에 효소 제품은 몇 초 간격 이내에 자동으로 팔 측정을 시작하는 것도 가능 휴대용 악기 (PalmSens)를 사용하여 차동 펄스 Voltammetry (DPV)에 의해 감지됩니다.

Watch this Scientific Journal Video about ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection at JoVE.com

ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection

경쟁력있는 immunochemical 방법과 최종 전기 감지 기능을 기반으로 새로 개발된 검사 방법을 사용하여 trichothecenes을 (인간의 건강에 대한 우려의 mycotoxins) 감지하는 프로토콜이 증명됩니다.

진균 독소의 검출을위한 ELIME (효소가 단백질 자기 전기를 연결) 방법

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous ...

elime-enzyme-linked-immuno-magnetic-electrochemical-method-for

Research

JoVE Journal

Biology

ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) Method for Mycotoxin Detection

14.1K 조회수.  University of Rome, Tor Vergata. 경쟁력있는 immunochemical 방법과 최종 전기 감지 기능을 기반으로 새로 개발된 검사 방법을 사용하여 trichothecenes을 (인간의 건강에 대한 우려의 mycotoxins) 감지하는 프로토콜이 증명됩니다.

비디오: ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection

Detection of Protein Ubiquitination

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of three enzymes. They include ubiquitin-activating enzyme E1, ubiquitin-conjugating enzyme E2, and ubiquitin ligase E3. Unlike to E1 and E2, E3 ubiquitin ligases display substrate specificity. On the other hand, numerous deubiquitylating enzymes have roles in processing polyubiquitinated proteins. Ubiquitination can result in change of protein stability, cellular localization, and biological activity. Mutations of genes involved in the ubiquitination/deubiquitination pathway or altered ubiquitin system function are associated with many different human diseases such as various types of cancer, neurodegeneration, and metabolic disorders. The detection of altered or normal ubiquitination of target proteins may provide a better understanding on the pathogenesis of these diseases. &nbsp;Here, we describe protocols to detect protein ubiquitination in cultured cells in vivo and test tubes in vitro. These protocols are also useful to detect other ubiquitin-like small molecule modification such as sumolyation and neddylation.

Ubiquitination is a key posttranslational modification carried out by a set of three enzymes. Mutations of genes involved in this modification are associated with many different human diseases. Here, we describe protocols to detect protein ubiquitination in cultured cells in vivo and test tubes in vitro.

단백질 Ubiquitination의 감지

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

연구

생물학

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude stringent methods for the isolation and identification of protein networks around a protein of interest. The use of chemical crosslinkers allows the selective stabilization of labile interactions, thus bypassing biochemical limitations for purification. Here we present a protocol amenable for cells in culture that uses a homobifunctional crosslinker with a spacer arm of 12 &Aring;, dithiobis-(succinimidyl proprionate) (DSP). DSP is cleaved by reduction of a disulphide bond present in the molecule. Cross-linking combined with immunoaffinity chromatography of proteins of interest with magnetic beads allows the isolation of protein complexes that otherwise would not withstand purification. This protocol is compatible with regular western blot techniques and it can be scaled up for protein identification by mass spectrometry1.
Stephanie A. Zlatic and Pearl V. Ryder contributed equally to this work.

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

The cell permeable crosslinker DSP [dithiobis-(succinimidyl propionate)] stabilizes transient and labile interactions in vivo, which allows their isolation using stringent protein complex purification techniques. Here we present a technique for crosslinking cells grown in culture followed by isolation of protein complexes by immunoprecipitation.

불안 정한 다중 단백질 단지의 분리에 의해 생체내에 제어 세포 간 연결 및 단백질 자기 동질 크로마 토그래피

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although this modification was implicated in several biological processes, additional aspects of its function are emerging, with recent evidence of its role in the production of signals for glycoprotein quality control and trafficking. Thus, phenomena related to N-linked glycans and their processing are being intensively investigated. Methods that have been recently developed for proteomic analysis have greatly improved the characterization of glycoprotein N-linked glycans. Nevertheless, they do not provide insight into the dynamics of the sugar chain processing involved. For this, labeling and pulse-chase analysis protocols are used that are usually complex and give very low yields. We describe here a simple method for the isolation and analysis of metabolically labeled N-linked oligosaccharides. The protocol is based on labeling of cells with [2-3H] mannose, denaturing lysis and enzymatic release of the oligosaccharides from either a specifically immunoprecipitated protein of interest or from the general glycoprotein pool by sequential treatments with endo H and N-glycosidase F, followed by molecular filtration (Amicon). In this method the isolated oligosaccharides serve as an input for HPLC analysis, which allows discrimination between various glycan structures according to the number of monosaccharide units comprising them, with a resolution of a single monosaccharide. Using this method we were able to study high mannose N-linked oligosaccharide profiles of total cell glycoproteins after pulse-chase in normal conditions and under proteasome inhibition. These profiles were compared to those obtained from an immunoprecipitated ER-associated degradation (ERAD) substrate. Our results suggest that most NIH 3T3 cellular glycoproteins are relatively stable and that most of their oligosaccharides are trimmed to Man9-8GlcNAc2. In contrast, unstable ERAD substrates are trimmed to Man6-5GlcNAc2 and glycoproteins bearing these species accumulate upon inhibition of proteasomal degradation.

We describe a method for analysis of the alteration of N-linked glycans through the early life of glycoproteins after their biosynthesis in mammalian cells. This is achieved by pulse-chase analysis of metabolically labeled glycans, enzymatic release from glycoproteins and examination by HPLC.

포유 동물 세포에 Glycoproteins의 N - 연결 설탕 체인 펄스 체이스 분석

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although ...

Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System

A magnetic modulation biosensing system (MMB) [1,2] rapidly and homogeneously detected biological targets at low concentrations without any washing or separation step. When the IL-8 target was present, a 'sandwich'-based assay attached magnetic beads with IL-8 capture antibody to streptavidin coupled fluorescent protein via the IL-8 target and a biotinylated IL-8 antibody. The magnetic beads are maneuvered into oscillatory motion by applying an alternating magnetic field gradient through two electromagnetic poles. The fluorescent proteins, which are attached to the magnetic beads are condensed into the detection area and their movement in and out of an orthogonal laser beam produces a periodic fluorescent signal that is demodulated using synchronous detection. The magnetic modulation biosensing system was previously used to detect the coding sequences of the non-structural Ibaraki virus protein 3 (NS3) complementary DNA (cDNA) [2]. The techniques that are demonstrated in this work for external manipulation and condensation of particles may be used for other applications, e.g. delivery of magnetically-coupled drugs in-vivo or enhancing the contrast for in-vivo imaging applications.

Magnetic modulation biosensing system is utilized to rapidly, sensitively and simply detect biological assays, such as DNA molecules and proteins.

자기 변조 Biosensing 시스템을 사용하여 생물 학적 Assays의 급속한 동차 검색

A magnetic modulation biosensing system (MMB) [1,2] rapidly and homogeneously detected biological targets at low concentrations without any washing or ...

Direct Detection of the Acetate-forming Activity  of the Enzyme Acetate Kinase

Acetate kinase, a member of the acetate and sugar kinase-Hsp70-actin (ASKHA) enzyme superfamily1-5, is responsible for the reversible phosphorylation of acetate to acetyl phosphate utilizing ATP as a substrate. Acetate kinases are ubiquitous in the Bacteria, found in one genus of Archaea, and are also present in microbes of the Eukarya6. The most well characterized acetate kinase is that from the methane-producing archaeon Methanosarcina thermophila7-14. An acetate kinase which can only utilize PPi but not ATP in the acetyl phosphate-forming direction has been isolated from Entamoeba histolytica, the causative agent of amoebic dysentery, and has thus far only been found in this genus15,16.
In the direction of acetyl phosphate formation, acetate kinase activity is typically measured using the hydroxamate assay, first described by Lipmann17-20, a coupled assay in which conversion of ATP to ADP is coupled to oxidation of NADH to NAD+ by the enzymes pyruvate kinase and lactate dehydrogenase21,22, or an assay measuring release of inorganic phosphate after reaction of the acetyl phosphate product with hydroxylamine23. Activity in the opposite, acetate-forming direction is measured by coupling ATP formation from ADP to the reduction of NADP+ to NADPH by the enzymes hexokinase and glucose 6-phosphate dehydrogenase24.
Here we describe a method for the detection of acetate kinase activity in the direction of acetate formation that does not require coupling enzymes, but is instead based on direct determination of acetyl phosphate consumption. After the enzymatic reaction, remaining acetyl phosphate is converted to a ferric hydroxamate complex that can be measured spectrophotometrically, as for the hydroxamate assay. Thus, unlike the standard coupled assay for this direction that is dependent on the production of ATP from ADP, this direct assay can be used for acetate kinases that produce ATP or PPi.

A method for the determination of acetate kinase activity is described. This assay utilizes a direct reaction for determining enzyme activity and kinetics of acetate kinase in the acetate-forming direction with different phosphoryl acceptors. Furthermore, this method can be utilized for assaying other acetyl phosphate or acetyl-CoA utilizing enzymes.

효소 아세테이트 키나제의 아세테이트 - 형성 활동의 직접적인 탐지

Acetate kinase, a member of the acetate and sugar kinase-Hsp70-actin (ASKHA) enzyme superfamily1-5, is responsible for the reversible phosphorylation of ...

Electroantennographic Bioassay as a Screening Tool for Host Plant Volatiles

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host plant.1,2 When a host plant is an important agronomic commodity feeding damage by insect pests can inflict serious economic losses to growers. Accordingly, kairomones can be used as attractants to lure or confuse these insects and, thus, offer an environmentally friendly alternative to pesticides for insect control.3 Unfortunately, plants can emit a vast number volatiles with varying compositions and ratios of emissions dependent upon the phenology of the commodity or the time of day. This makes identification of biologically active components or blends of volatile components an arduous process. To help identify the bioactive components of host plant volatile emissions we employ the laboratory-based screening bioassay electroantennography (EAG). EAG is an effective tool to evaluate and record electrophysiologically the olfactory responses of an insect via their antennal receptors. The EAG screening process can help reduce the number of volatiles tested to identify promising bioactive components. However, EAG bioassays only provide information about activation of receptors. It does not provide information about the type of insect behavior the compound elicits; which could be as an attractant, repellent or other type of behavioral response. Volatiles eliciting a significant response by EAG, relative to an appropriate positive control, are typically taken on to further testing of behavioral responses of the insect pest. The experimental design presented will detail the methodology employed to screen almond-based host plant volatiles4,5 by measurement of the electrophysiological antennal responses of an adult insect pest navel orangeworm (Amyelois transitella) to single components and simple blends of components via EAG bioassay. The method utilizes two excised antennae placed across a "fork" electrode holder. The protocol demonstrated here presents a rapid, high-throughput standardized method for screening volatiles. Each volatile is at a set, constant amount as to standardize the stimulus level and thus allow antennal responses to be indicative of the relative chemoreceptivity. The negative control helps eliminate the electrophysiological response to both residual solvent and mechanical force of the puff. The positive control (in this instance acetophenone) is a single compound that has elicited a consistent response from male and female navel orangeworm (NOW) moth. An additional semiochemical standard that provides consistent response and is used for bioassay studies with the male NOW moth is (Z,Z)-11,13-hexdecadienal, an aldehyde component from the female-produced sex pheromone.6-8

A method to rapidly screen host plant volatiles by measurement of the electrophysiological response of adult navel orangeworm (Amyelois transitella) antennae to single components and blends via electroantennographic analysis is demonstrated.

호스트 식물 휘발성 물질에 대한 선별 도구로 Electroantennographic Bioassay

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host ...

qPCR Is a Sensitive and Rapid Method for Detection of Cytomegaloviral DNA in Formalin-fixed, Paraffin-embedded Biopsy Tissue

It is crucial to identify cytomegalovirus (CMV) infection in the gastrointestinal (GI) tract of immunosuppressed patients, given their greater risk for developing severe infection. Many laboratory methods for the detection of CMV infection have been developed, including serology, viral culture, and molecular methods. Often, these methods reflect systemic involvement with CMV and do not specifically identify local tissue involvement. Therefore, detection of CMV infection in the GI tract is frequently done by traditional histology of biopsy tissue. Hematoxylin and eosin (H&#38;E) staining in conjunction with immunohistochemistry (IHC) have remained the mainstays of examining these biopsies. H&#38;E and IHC sometimes result in atypical (equivocal) staining patterns, making interpretation difficult. It was shown that quantitative polymerase chain reaction (qPCR) for CMV can successfully be performed on formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) biopsy tissue for very high sensitivity and specificity. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform qPCR testing for the detection of CMV in FFPE biopsy tissue in a clinical laboratory setting. This method is likely to be of great benefit for patients in cases of equivocal staining for CMV in GI biopsies.

This protocol describes qPCR detection of cytomegalovirus in formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy tissue, which is rapid, sensitive, specific, and useful for interpreting equivocal hematoxylin and eosin or immunohistochemical staining patterns.

qPCR에 포르말린 고정, 파라핀 - 임베디드 생검 조직에서 Cytomegaloviral DNA의 검출에 대한 민감하고 빠른 방법입니다

It is crucial to identify cytomegalovirus (CMV) infection in the gastrointestinal (GI) tract of immunosuppressed patients, given their greater risk for ...

Multi-enzyme Screening Using a High-throughput Genetic Enzyme Screening System

The recent development of a high-throughput single-cell assay technique enables the screening of novel enzymes based on functional activities from a large-scale metagenomic library1. We previously proposed a genetic enzyme screening system (GESS) that uses dimethylphenol regulator activated by phenol or p-nitrophenol. Since a vast amount of natural enzymatic reactions produce these phenolic compounds from phenol deriving substrates, this single genetic screening system can be theoretically applied to screen over 200 different enzymes in the BRENDA database. Despite the general applicability of GESS, applying the screening process requires a specific procedure to reach the maximum flow cytometry signals. Here, we detail the developed screening process, which includes metagenome preprocessing with GESS and the operation of a flow cytometry sorter. Three different phenolic substrates (p-nitrophenyl acetate, p-nitrophenyl-&#946;-D-cellobioside, and phenyl phosphate) with GESS were used to screen and to identify three different enzymes (lipase, cellulase, and alkaline phosphatase), respectively. The selected metagenomic enzyme activities were confirmed only with the flow cytometry but DNA sequencing and diverse in vitro analysis can be used for further gene identification.

This work presents a method of high-throughput screening using a universal genetic enzyme screening system that can be theoretically applied to over 200 enzymes. Here, the single screening system identifies three different enzymes (lipase, cellulase, and alkaline phosphatase) by simply changing the substrate used (p-nitrophenyl acetate, p-nitrophenyl-&#946;-D-cellobioside, and phenyl phosphate).

멀티 효소 높은 처리량 유전자 효소 검사 시스템을 사용하여 상영

The recent development of a high-throughput single-cell assay technique enables the screening of novel enzymes based on functional activities from a ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension with&#160;intact cell or nuclei involves dissociation and permeabilization, steps that can introduce unwanted noise and undesirable damage. Particularly, certain cell-types such as neurons are challenging to dissociate into individual cells. Additionally, permeabilization of the cellular membrane to release nuclei requires optimization by trial-and-error, which can be time consuming, labor intensive and financially nonviable. To enhance the robustness and reproducibility of sample preparation for high-throughput sequencing, we describe a rapid enzyme and detergent-free column-based nuclei isolation method. The protocol enables efficient isolation of nuclei from the entire zebrafish brain within 20 minutes. The isolated nuclei display intact nuclear morphology and low propensity to aggregate. Further, flow cytometry allows nuclei enrichment and clearance of cellular debris for downstream application. The protocol, which should work on soft tissues and cultured cells, provides a simple and accessible method for sample preparation that can be utilized for high-throughput profiling, simplifying the steps required for successful single-nuclei RNA-seq and ATAC-seq experiments.

Single nuclei isolation relies on dissociation and detergent-based permeabilization of the cell membrane, steps that need optimization and are prone to introducing technical artifacts. We demonstrate a detergent and enzyme-free protocol for rapid isolation of intact nuclei directly from whole tissue, yielding nuclei suitable for single-nucleus RNA-seq (snRNA-Seq) or ATAC-seq.

세제 및 효소 없는 방법을 사용하여 조직 전체에서 핵 분리

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Detection of Plasmodium Sporozoites in Anopheles Mosquitoes using an Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Plasmodium sporozoites are the infective stage of malaria parasites that infect humans. The sporozoites residing in the salivary glands of female Anopheles mosquitoes are transmitted to humans via mosquito bites during blood feeding. The presence of sporozoites in the mosquito salivary glands thus defines mosquito infectiousness. To determine whether an Anopheles mosquito carries Plasmodium sporozoites, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method has been the standard tool to detect the Plasmodium circumsporozoite protein (CSP), the major surface protein of the sporozoites. In this method, the head along with the thorax of each mosquito is separated from the abdomen, homogenized, and subjected to a sandwich ELISA to detect the presence of CSP specific to Plasmodium falciparum and each of the two subtypes, VK210 and VK247, of Plasmodium vivax.This method has been used to study malaria transmission, including the seasonal dynamics of mosquito infection and the species of the major malaria vectors in the study sites.

Detection of Plasmodium Sporozoites in Anopheles Mosquitoes using an Enzyme-linked Immunosorbent Assay

This protocol describes a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay to detect salivary gland sporozoites in mosquitoes. Using easily available monoclonal antibodies, the method enables cost-effective, high-throughput detection of mosquitoes carrying Plasmodium falciparum or Plasmodium vivax. The method is suitable for malaria transmission research, including vector surveys.