MSC-Mito-GFP 및 ARPE19-Mito-RFP 공동 배양에서 TNT 형성 및 미토콘드리아 전달을 분석하기 위한 세포골격 염색

먼저 공동 배양된 MSC-Mito-GFP 및 ARPE19-Mito-RFP 세포를 24웰 플레이트에서 배지를 제거합니다. 500% 폴리 포름알데히드 웰당 4마이크로리터로 모든 세포를 한 번 세척합니다. 500마이크로리터의 신선한 4% 폴리 포름알데히드를 넣고 샘플을 20분 동안 고정합니다.

그런 다음 정착액을 제거하고 DPBS로 각각 10분 동안 샘플을 세 번 세척합니다. PBS를 제거한 후 차단 용액 웰당 500마이크로리터를 추가하고 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 차단 용액을 제거하십시오.

팔로이딘 염색 용액을 준비하려면 PBS를 사용하여 400x 저장 용액을 1로 희석합니다. 각 웰에 200 마이크로리터의 팔로이딘 염색 용액을 넣고 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 염색 용액을 회수하고 DPBS로 10분 동안 샘플을 세척합니다.

PBS를 제거한 후 주사기 바늘로 커버 유리를 골라내고 자연 건조시킵니다. 슬라이드에 소량의 장착 매체를 적용하고 슬라이드의 커버 유리를 조심스럽게 뒤집어 매체가 전체 표면을 고르게 코팅하도록 합니다. 매니큐어로 가장자리를 밀봉하십시오.

터널링 나노튜브 또는 TNT 구조가 관찰되어 유사한 세포 유형과 다른 세포 유형 사이에 세포 간 연결을 확립했습니다. MSC의 녹색 점선 형광을 포함하는 ARPE-19 세포와 ARPE-19 세포의 빨간색 점선 형광을 포함하는 MSC에서 미토콘드리아 전달이 관찰되었습니다. 초고해상도 이미징을 통해 TNT의 형성과 TNT를 통한 상세한 미토콘드리아 전달을 확인했습니다.

정량화 결과, MSC는 ARPE-19 세포에 비해 미토콘드리아를 기증할 수 있는 능력이 훨씬 더 뛰어난 것으로 나타났습니다.