Hybridizing Bacterial Cells with an Oligonucleotide Probe with a Fluorophore Using Fluorescence In Situ Hybridization (형광 현장 혼성화(FISH)를 사용하여 형광단으로 표지된 올리고뉴클레오티드 프로브와 박테리아 세포 혼성화

시작하려면 파라포름알데히드에 고정된 박테리아 세포를 예로 들어 보겠습니다. 14, 000 x g에서 10 분 동안 세포를 원심 분리합니다. 그런 다음 상층액을 제거합니다.

펠릿을 100 마이크로 리터의 96 % 분석 등급 에탄올에 재현탁시키고 실온에서 1 분 동안 배양합니다. 5분 동안 원심분리를 반복한 다음 에탄올을 제거하고 세포 펠릿을 자연 건조합니다. 이제 형광 표지된 올리고뉴클레오티드를 함유한 용액에 세포를 혼성화하여 섭씨 46도에서 3시간 동안 가열합니다.

교잡 직후, 최대 허용 온도에서 15분 동안 섭씨 46도로 예열된 로터에서 샘플을 원심분리합니다. 그런 다음 섭씨 48도에서 15분 동안 적절한 강도로 완충액에서 샘플을 세척합니다. 샘플을 원심 분리 한 후 다시 한 번 500 마이크로 리터의 얼음처럼 차가운 PBS로 세포를 세척합니다.

20 마이크로 리터의 PBS에 재현탁시키고 나중에 사용할 때까지 섭씨 4도에서 보관하십시오.