설명이 프로젝트는 보너스 번호 R01 HL064761, R25 HL059868, 1SC1 HL099139과 건강의 P20 MD000175 형태 국​​립 연구소에 의해 지원되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 보건원의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

1. 쥐 mesenteric 작은 동맥의 분리 <ol><li> 닫힌 실내에서 isoflurane과 동물을 마취하고 알코올로 복부를 닦아냅니다. </li><li> mesenteric 침대를 폭로하기 위해 중간 라인 개복술을 수행합니다. </li><li> 가위를 사용하여 뛰어난 mesenteric 동맥과 vasculature 먹이와 소장의 약 85 cm를 제거합니다. 가까운 pylorus에 창자 섹션 ileo - coecal 교차점 근처 말초 엔드의 근위 끝을 잘라. 대장의 세그먼트 오픈 흉부 심장 관통하여 isoflurane과 euthanized와 깊이 anesthetized 아르 쥐에서 격리됩니다. </li><li> PSS를 포함하는 코팅 배양 접시에있는 excised 섹션을 배치하고 실온에서 mesenteric 동맥의 해부를 수행하십시오. </li><li> 오른쪽에있는 소장의 근위 끝을 아래로 핀과 intestineina 시계 반대 방향으로 방향의 나머지 부분 (대장의 반대편 왼쪽 먹이 vasculature에 ieproximal 끝)을 핀. </li><li> 근위 세그먼트의 일부와 함께 지점 II 및 III 세그먼트를 해부하다. </li><li> 정맥을 절개하다하고 동맥을 분리 (V - 모양의 분기점)와 지방과 결합 조직을 제거하여 청소. 포셉로 부드럽게 당기 및 결합 조직의 세포막을 통해 절단하여 동맥과 직접 접촉을 피하십시오. </li></ol> 2. 용기의 장착 <ol><li> 좋은 포셉와 40 μm의 텅스텐 무료 스테인레스 스틸 와이어의 두 짧은 세그먼트 (≈ 4cm) 절단하고, 내피를 손상하지 않도록 돌보는 각 동맥의 루멘에 하나를 넣습니다. 필요한 경우 루멘를 엽니다 와이어 끝부분을 사용합니다. 선박 밖으로 스트리밍 혈액 좋은 징조 루멘 열입니다. </li><li> 115 NaCl, 4.7 KCl, 1.4 MgSO 4 0.7 H 2 O 5, NaHCO 3, 1.2 K 2 HPO 4, 1.1 나 2 HPO 4, 1.0 CaCl 2, 20 HEPES과 : MM, 생리 식염수 (PSS로 myograph 챔버를 입력합니다 37 아스코르비 산 (100 μm의) 5 포도당, 산도 7.4) ° C와 집게를 사용하는 것은 신중하게 상온에서 챔버에 페트리 접시에서 스레드 선박 세그먼트를 전송하고 myograph 챔버에 excised 근위 선박 세그먼트를 전송하고 당겨 선박에 식량을 공급하는 전선을 따라 끝. 배 스트레칭하지 마십시오. </li><li> 와이어 마이크로 미터에 연결된 오른쪽 턱에 가까운 고정 나사에 따라 시계 반대 방향의 거의 끝부분을 고정합니다. 포셉와 와이어의 끝에 자유를 잡으하고 오른쪽 턱에까지 고정 나사에 따라 시계 방향으로 안전. 와이어 따라 선박 세그먼트는 턱 자체와의 접촉을하지 않고 문턱 사이의 간격에 위치하고 있는지 확인하십시오. </li><li> 분리 턱을 나사, 그리고 선박과 함께 두 번째 와이어 병렬 정렬과 루멘의 맨 끝에 삽입. 부드럽게 가이드로 이미 탑재 와이어를 사용하여 한 동작에서 선박 세그먼트의 루멘을 통해 전선을 공급. 책략 동안 그것을 스트레칭 피하기 위해 선박에서 1cm에 대한 전선을 보유하고, 내피를 감동하지 마십시오. </li><li> 함께 턱을 비할 첫 번째 아래에 두 번째 설치 와이어 이동은 오른쪽 턱에 안전하게 있는지 확인합니다. </li><li> 변환기에 연결된 왼쪽 턱의 근처에 고정 나사 아래 시계 방향으로 두 번째 와이어의 거의 끝부분을 고정합니다. </li><li> 왼쪽 턱에있는 고정 나사에서 와이어의 맨 끝부분을 확보하고 전선을 스트레칭 조입니다. </li><li> 일단 설치가 완료되면 &quot;마운트 메뉴&quot;의 모터를 재설정하고 선박의 정상화를 시작합니다. </li></ol> 3. 표준화 자동 듀얼 와이어 Myograph 시스템 - 510A는 &quot;정규화&quot;메뉴에서 부과하는 자동 정규화 기능을 보유하고 선박은 30 분 평균 이후 제조 업체의 프로토콜에 따라 표준화된 절차에 의해 표준화된 내부 둘레에 늘어 수 있습니다 37 ° C. 지수 곡선은 다음 내부 둘레 압력 데이터에 장착되어 있습니다. 절차는 동맥 100 mmHg 1 transmural 압력 하에서 편안 때 생체내에 있었고이 것이 루멘 직경 (D 100) 정의의 쥐 mesenteric 동맥에 대한 정규화 매개 변수는 다음과 같습니다. <ol><li> 대상 transmural 압력 = 13.3 kPa (100mm HG). </li><li> 시간 = 60 초, 정상화 단계의 각각의 기간. </li><li> IC 1 / IC 100 = 0.9 (IC 1 = 표준 내부 둘레, IC 100 대상 압력에 대응 = 내부 둘레. </li><li> 접안 렌즈 교정 2 * Δ (mm / 안구 부문), 2 델타 프로그래밍 이유입니다. </li></ol> hairlines가 탑재된 선박 segm의 맨 근처에 종료 끝나면 현미경 눈 피스 신호를 사용하여 마운트된 mesenteric 동맥의 길이를 측정엔트. 간단히, 탑재 선박 세그먼트의 길이는 해부 현미경에서 보정 안구 시선을 조각으로 최대 배율로 측정됩니다. 세그먼트의 끝에서 (1) 이상의 헤어 라인과 눈 피스 읽기 및 안구 부문에서 세그먼트의 끝 근처가 (2) 측정 및 기록됩니다. 이 값은, 마이크로 미터 수치로, 이전과 혈관을 스트레칭 후이 기록되며 장착되어 곡선과 100mm HG의 대상 transmural 압력에 해당하는 내부 직경을 계산하는 프로그램의 메뉴에 입력된 우리의 연구에서 동맥은 D 1 루멘 직경으로 설정되었습니다 = 0.9 활성 강제로 개발이 최대한입니다 XD 100. 쥐 mesenteric의 동맥에 ≥ 10 MN의 활성 강제로 개발은 진행하는 실험 최적 간주됩니다. 낮은 활성 강제로 조직이 삭제되었습니다. 4. 응답 측정 정규화 후 혈관의 기계적 및 기능적 특성 재현할 수축을 얻는 5 μm의의 phenylephrine (PE)의 반복 응용 프로그램 (일반적으로 2 또는 3)에 도전 혈관을 포함하는 &quot;표준 시작&quot;을 수행하여 다시 활성화됩니다. 저희 연구실에 전형적인 &quot;표준 시작&quot;다음과 같이 stimulations과 실패야 기간의 시리즈로 구​​성되어 있습니다 : <ol><li> myograph 챔버는 95 %의 공기와 5% CO 2 표지 및 폭기를 시작 바꿉니다. </li><li> 신선한 PSS (100 μm의 제품 아스코르비 산을 포함하는)와 챔버를 채우기 </li><li> 계약 5 분 5 μm의 PE와 혈관과 PSS 버퍼와 4 번 씻는다. </li><li> 후 마지막으로 세척, PSS와 리필 챔버 및 단계 (2)를 반복하기 전에 3 분 기다려 그리고 (iii). </li></ol> 표준 시작 후 동맥은 실험을 위해 준비가되었습니다. 계약 선박의 Relaxations는 CaCl 2의 농도 증가 (- 4 MM 0.5)의 누적 또한에 의해 평가됩니다. 억제제를 사용하는 선박은 assays시 20 분 및 현재에 대한 myograph 챔버에있는 화합물 사전 incubated입니다. 5. 데이터 분석 선박과 힘 tracings 직접 텍스트 데이터로 변환에 대한 &quot;정규화&quot;데이터는 SigmaPlot 11.0 그래프 프로그램 (Systat 소프트웨어, 포인트 리치몬드, CA)로 분석하여 그림 1에 표시된 꾸몄다되었습니다. tracings부터 계산 농도 - 반응 데이터, 프로그램의 약리학 메뉴에서 4 매개 변수 물류 기능에 장착되어 실험 데이터 EC 50 값을 결정하여 분석했다. 그룹 사이에 그룹 내의 비교는 편도 분산 분석 (ANOVA) 및 P &lt;0.05 중요한 것으로 간주됩니다과 차이에 의해 수행되었다. 6. 대표 결과 : <table border="1"><tbody><tr><th> 매개 변수 </th><th> Wistar </th><th> 달 소금 민감한 </th><th> 달 소금 방지 </th></tr><tr><td> L 100 (μm의) </td><td> 83.26 ± 2.33 </td><td> 91.52 ± 4.67 </td><td> 117.45 ± 8.43 * </td></tr><tr><td> X 1 </td><td> 604.21 ± 41.97 </td><td> 752.24 ± 85.25 </td><td> 745.84 ± 110.09 </td></tr><tr><td> R 2 </td><td> 0.99 ± 0.003 </td><td> 0.97 ± 0.008 </td><td> 0.97 ± 0.007 </td></tr></tbody></table> * Wistar과 DR을위한 L 100 값 차이는 통계적으로 의미입니다. 샤피 - Wilk의 정상 테스트 (P = 0.588에게) 전달, 균등 분산 테스트 (P = 0.237가) 전달. L 100 대상 transmural 압력에 해당하는 마운트 세그먼트의 = 내부 직경. X 1 = 자사의 정규화된 내부 둘레 (실험이 수행되었다되는 마이크로 미터 읽기 즉, 값)에 탑재된 선박을 스트레칭하는 데 필요한 마이크로 포지셔너 설정. R이 지수 곡선에의 적합 = 회귀 계수 (X I, Y I). 주의 사항 : 자세한 절차는 510A Myograph 시스템 6 매뉴얼에 설명되어 있습니다. 표 1. 샘플 읽기 아웃 &quot;정규화 메뉴&quot;에 표시되는 기본 프로그램에서 Wistar, DS와 DR의 mesenteric 동맥 세그먼트에 대한 정규화 매개 변수. 값 5 동물의 (± SEM)를 의미하고 있습니다. Wistar과 DS에 대한 L 100 값 사이의 차이는 * (P는 &lt;0.05) 통계적으로 의미입니다. <table border="1"><tbody><tr><th> Wistar </th><th> DS </th><th> DR </th></tr><tr><td> 14.2 ± 0.6 </td><td><strong&gt; 25.8 ± 2.7 * </td><td> 20.9 ± 1.3 * </td></tr></tbody></table> 각 선박 5 μm의 PE의 응용 프로그램을 다음과 Wistar, DS 및 DR의 쥐으로부터 격리 mesenteric 동맥에서 표 2. 개발 긴장 (MN). 보고된 값은 6-8 동물의 (± SEM)를 의미하고 있습니다. Wistar 컨트롤에서 * 중요한 것은 다른 (P는 &lt;0.05). <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" /> 그림 1. 칼슘 2 Wistar 쥐에서 PE - 계약 mesenteric 동맥의 + 전자 유도 휴식 1 ㎜ 칼슘 2 +를 포함하는 생리 식염수에 와이어 myograph에 마운트. 동맥, 37 30 분 equilibrated되었습니다 ° C 일정한 통기 및 CA 2 반응과 + E 결정. PE는 칼슘 2 누적 첨가 다음 5 μm의의 추가에 대한 추적 대표위원회는 + 표시됩니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" /> 그림 2. 칼슘 2 DS의 쥐에서 PE - 계약 mesenteric 동맥의 + 전자 유도 휴식 1 ㎜ 칼슘 2 +를 포함하는 생리 식염수에 와이어 myograph에 마운트. 동맥, 37 30 분 equilibrated되었습니다 ° C 일정한 통기 및 CA 2 반응과 + E 결정. PE는 칼슘 2 누적 첨가 다음 5 μm의의 추가에 대한 추적 대표위원회는 + 표시됩니다. CA 2 + 휴식이 심각 Wistar과 DR 쥐에서 그에 비해이 조직에 손상되었습니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" /> 그림 3. 칼슘 2 DR의 쥐에서 PE - 계약 mesenteric 동맥의 + 전자 유도 휴식 1 ㎜ 칼슘 2 +를 포함하는 생리 식염수에 와이어 myograph에 마운트. 동맥, 37 30 분 equilibrated되었습니다 ° C 일정한 통기 및 CA 2 반응과 + PE가 카 2 누적 첨가 다음 5 μm의의 추가에 대한 추적 전자 determined.A 대표 힘을 +가 표시됩니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" /> 그림 4. A. [칼슘 2 +] E - 반응 곡선. DR 및 DS 쥐으로부터 격리 mesenteric 오락실에서는 4 매개 변수 물류 curve.C.CaR 표현에 데이터를 피팅에 의해 결정 휴식 EC 50 값을 보여주는 B. 바 차트.

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	<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents Actions. 2, 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+chronic+sensory+denervation+on+Ca2+-induced+relaxation+of+isolated+mesenteric+resistance+arteries.">Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries.</a> Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).</li><li>Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+Ca2++undergoes+dynamic+changes+sufficient+to+stimulate+nerve-dependent+Ca2+-induced+relaxation.">Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).</li><li>Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+interstitial+Ca2+.">Renal interstitial Ca2+.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).</li><li>Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochrome+P-450+metabolites+of+2-arachidonoylglycerol+play+a+role+in+Ca2+-induced+relaxation+of+rat+mesenteric+arteries.">Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).</li><li>Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. 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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

고혈압, 심혈관 및 신장 뇌성 병적 상태 / 사망률의 주요 원인이다. 고혈압의 발생은 인구의 높은 소금에 민감한 고혈압은 고령화에 특히 높은, 그리고 백인보다 흑인에서 더 유행이다. 이것은 자신의 신장 9 나트륨을 유지하는 흑인의 경향에 의한 것으로 생각됩니다. 소금 감도는 신장 질환의 주요 기여 요인이며 내피 기능 장애와 관련된 있지만 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다. 저...

<table border="1"><tbody><tr><th> 장비 / 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> 자동 듀얼 와이어 Myograph 시스템 - 510A DMT - 미국, 주식 </td><td> 아틀란타, GA. </td><td> 100151 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/4SP 데이터 수집 시스템 </td><td> ADInstruments, 콜로라도 스프링스, (주) </td><td> ML750 </td><td> 4-16 입력 채널과 새로운 모델을 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 델 디멘션 XPS 세대 4 컴퓨터 </td><td> 작은 골짜기 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stemi SV II (APO) 안구와 해부 현미경 </td><td> 칼 자이스 혈구 국제. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Wistar, 달 소금에 민감한, 달 소금 방지 쥐 </td><td> IN 할렌 스프 Dawley, 인디애나. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 설치류 초 </td><td> Harland Tekland, 매디슨, WI. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Phenylephrine </td><td> 시그마 - 올드 리치, 세인트 루이스, MO. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 기타 화학 제품 </td><td></td><td></td><td> 사용된 모든 화학 물질 상업적으로 사용할 수있는 순수한 성적했다. </td></tr></tbody></table>

mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography

같은 mesenteric 동맥으로 근위 저항 선박, 주변 저항에 크게 기여하고 있습니다. 주로 신체의 전반적인 요구 사항에 따라 여러 기관에 혈액 흐름을 감독의 직경 기능에 100-400 μm의 사이의 이러한 작은 선박. 쥐 mesenteric 동맥은 100 μm의보다 큰 직경있다. 첫째 Mulvay 및 Halpern 1 설명한 myography 기술은, Bevan 및 Osher이 제안한 방법을 기반으로했다. 기술은 근육 준비 상당한 단축을 방지합니다 사시 조건에 따라 소형 선박에 대한 정보를 제공합니다. 다른 agonists에 선박의 강제 생산과 감도가 활성 긴장 길이 관계에 의하면, 스트레치의 정도에 따라 있기 때문에, 그것은 장착 전선의 준수를 방지하기 위해 사시 조건 하에서 수축 연구를 수행하는 것이 필수적입니다. 스테인레스 스틸 와이어 때문에 기록된 응답 3 영향을 후자의 산화의 텅스텐 와이어로 선호하고 있습니다. 기법은 혈관 평활근 세포 수용체의 정상적인 기능에 대한 증거를 얻기 위해 탑재된 혈관 작용제 유도된 수축의 비교를위한 수 있습니다. 우리는 phenylyephrine와 계약 격리 mesenteric 동맥은 세포외 칼슘의 누적 농도 (CA 2 + E)를 추가시 휴식 여러 연구에 표시합니다. 결과는 우리가 G 단백질 결합 칼슘 2 + 감지 수용체 (자동차)를 표현하는 것을 perivascular 감각 신경을 빠졌다는 생각이 들어서,이 vasorelaxation 응답을 중재. 자동 와이어 myography 방법을 사용하여, 우리는 Wistar, 달 소금에 민감한 (DS)와 달 소금 방지 (DR)에서 mesenteric 동맥이 쥐이 칼슘 2 + 전자에 다르게 반응 여기에 표시됩니다. Wistar의 쥐에서 조직은 + - 감도 DR 및 DS에서 이들에 비해 높은 칼슘이 보여주었다. DS 쥐에서 mesenteric 동맥의 감소 자동차 표현이 감소 칼슘이 절연, 사전 계약 동맥 + 전자 유도 휴식과 연결합니다. 데이터는, 자동차가 증가 아드레날린 톤 미만 mesenteric 동맥의 이완을 위해 필요하다고 제안하는 등 고혈압의 발생, 그리고 훨씬 더 심각한 DS에 달 동물의 자동차 신호 경로에 내재된 결함을 나타냅니다. 방법 mesenteric 저항 동맥과 다른 agonists 및 / 또는 antagonists 사이에 유사한 작은 혈관과 비교의 혈관 반응의 전의 생체내을 결정하는 데 유용 것은 나란히 6,7,8을 평가 쉽고 지속적으로 수 있습니다.

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Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

28.4K 조회수.  North Carolina Central University, Durham. 절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

비디오: Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

연구

의학

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with small-animal models such as rodents. However, the physiology of the human heart differs significantly from that of the rodent heart, underscoring the need for clinically relevant models to study heart disease. Here, we present a protocol to model ischemic heart disease using cardiomyocytes differentiated from human induced pluripotent stem cells (hiPS-CMs) and to quantify the damage and functional impairment of the ischemic cardiomyocytes. Exposure to 2% oxygen without glucose and serum increases the percentage of injured cells, which is indicated by staining of the nucleus with propidium iodide, and decreases cellular viability. These conditions also decrease the contractility of hiPS-CMs as confirmed by displacement vector field analysis of microscopic video images. This protocol may furthermore provide a convenient method for personalized drug screening by facilitating the use of hiPS cells from individual patients. Therefore, this model of ischemic heart disease, based on iPS-CMs of human origin, can provide a useful platform for drug screening and further research on ischemic heart disease.

We present a model of ischemic heart disease using cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells, together with a method for quantitative evaluation of tissue damage caused by ischemia. This model can provide a useful platform for drug screening and further research on ischemic heart disease.

허혈성 심장 질환 및 심장 근막 수축의 비디오 기반 비교 모델

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Mechanical Control of Relaxation Using Intact Cardiac Trabeculae

Diastolic dysfunction is a common phenotype across cardiovascular disease presentations. In addition to elevated cardiac stiffness (elevated left ventricular end-diastolic pressure), impaired cardiac relaxation is a key diagnostic indicator of diastolic dysfunction. While relaxation requires the removal of cytosolic calcium and deactivation of sarcomeric thin filaments, targeting such mechanisms has yet to provide effective treatments. Mechanical mechanisms, such as blood pressure (i.e., afterload), have been theorized to modify relaxation. Recently, we showed that modifying the strain rate of a stretch, not afterload, was both necessary and sufficient to modify the subsequent relaxation rate of myocardial tissue. The strain rate dependence of relaxation, called the mechanical control of relaxation (MCR), can be assessed using intact cardiac trabeculae. This protocol describes the preparation of a small animal model, experimental system and chamber, isolation of the heart and subsequent isolation of a trabecula, preparation of the experimental chamber, and experimental and analysis protocols. Evidence for lengthening strains in the intact heart suggests that MCR might provide new arenas for better characterization of pharmacological treatments, along with a method to assess myofilament kinetics in intact muscles. Therefore, studying the MCR may elucidate a path to novel approaches and new frontiers in the treatment of heart failure.

Rapid myocardial and cardiac relaxation is essential for normal physiology. Mechanical relaxation mechanisms are now known to be dependent on strain rate. This protocol provides an overview of the acquisition and analysis of experiments to further study the mechanical control of relaxation.

온전한 심장 섬유주를 이용한 이완의 기계적 제어

Diastolic dysfunction is a common phenotype across cardiovascular disease presentations. In addition to elevated cardiac stiffness (elevated left ...

Multimodality Diagnosis of Mesenteric Ischemia

Early diagnosis of mesenteric ischemia remains challenging because mesenteric ischemia presents with no key symptoms or physical findings, and no laboratory data specifically indicates intestinal tissue ischemic status before necrosis develops. While computed tomography is the standard for diagnostic imaging, there are several limitations: (1) repeated assessments are associated with increased radiation exposure and risk of renal damage; (2) the computed tomography findings can be misleading because necrosis occasionally occurs despite opacified mesenteric arteries; and (3) computed tomography is not necessarily available within the golden time of salvaging the intestines for those patients in the operating room or at a place far from the hospital. This article describes a challenge to overcome such limitations using ultrasonography and near-infrared light, including clinical studies. The former is capable of providing not only morphologic and kinetic information of the intestines but also perfusion of the mesenteric vessels in real-time without transferring the patient or exposing them to radiation. Transesophageal echocardiography enables precise assessment of mesenteric perfusion in the OR, ER, or ICU. Representative findings of mesenteric ischemia in seven aortic dissection cases are presented. Near-infrared imaging with indocyanine green helps visualize the perfusion of vessels and intestinal tissues although this application requires laparotomy. Findings in two cases (aortic aneurysm) are shown. Near-infrared spectroscopy demonstrates oxygen debt in the intestinal tissue as digital data and can be a candidate for early detection of mesenteric ischemia without laparotomy. The accuracy of these assessments has been confirmed by intraoperative inspections and postoperative course (prognosis).

This article presents a multimodal approach that aims to overcome the limitations of traditional methods in detecting mesenteric ischemia and preventing bowel necrosis. The presented technique offers a promising solution by combining state-of-the-art ultrasonography with cutting-edge near-infrared light technologies.

장간막 허혈의 다중 양식 진단

Early diagnosis of mesenteric ischemia remains challenging because mesenteric ischemia presents with no key symptoms or physical findings, and no ...

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

상장간막 동맥의 폐색을 통한 장 허혈-재관류 손상의 설치류 모델

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...