우리는 비디오 편집을위한 가축 용 Eleut 에르난데스, 현미경 전문 지식에 대한 게이브 Gaidosh 및 Khue 트란과에서 Zhenyang 자오에 빚된다. 국립 안과 연구소에 의해 투자 된이 연구는 UM에 UCSD와 EY014801에 JLG 및 P30 보조금 EY022589에 R01-EY022129을 부여; 미국 심장 협회 (American Heart Association), 제임스와 에스더 킹 재단, 복단 대학 대학원 (제 2010033)의 박사 과정 학생 교환 프로그램 기금, 연구에서 무제한 부여 실명, 주식 회사를 방지하는

모든 동물의 절차는 캘리포니아 샌디에고와 마이애미 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 대학의 대학에 의해 승인 안과 및 Visual 연구에서 동물의 사용에 대한 ARVO 방침에 따라 수행되었다. 모든 시약 및 수술에 사용되는 장비는 멸균 수 있습니다. 1. 마취 및 수술에 대한 쥐를 준비 <ol><li> 절차 이전에, 래트를 체중에 따라 케타민 하였다 (60 mg / kg)과 자일 라진 (8 ㎎ / ㎏)을 복강 내 주사하여 마취시켰다. 마취의 적절한 깊이 발가락 핀치 자극에 대한 부정적인 반응에 의해 결정되어야한다. </li><li> 마취 후, 질식을 방지하고 수술 중 각막의 건조를 방지하기 위해 두 눈에 연고를 윤활 적용 할 앞으로의 혀를 잡아 당깁니다. </li><li> 헤어 커터를 사용하여 수술 부위를 면도 면적을 10 % 프로 비돈 요오드 세제 용액과 70 % 에탄올로 3 회 와이프. </li><li> 드레이프 T멸균 분야 내에서 그는 동물. 무균 장갑 및 수술 도구는 생존 수술시 사용됩니다. 동물 사이에 뜨거운 비드 살균기를 사용하여 상품의 팁을 다시하는 것은 소독. </li></ol> 2. 수술 적 접근 <ol><li> PION 유도 <ol><li> 대퇴 정맥 카테터 <ol><li> 준비하고 수술 부위를 청소하십시오. 헤어 커터를 사용하여 오른쪽 허벅 다리를 면도하고, 10 % 프로 비돈 요오드 세제를 70 % 에탄올로 영역을 세 번 각 와이프. </li><li> 튜브를 준비합니다. 70 % 에탄올로 소독 폴리에틸렌 튜브의 길이 40cm (PE 10)를 자른다. (20 mg / kg (체중)의 투여 량을 산출 1 μL / mg)을 식염수로 튜브를 세척하고 2 % erythrosin의 B 염료의 미리 측정 된 용액을 함유하는 1 ml의 시린지에 연결. 600 μL / min의 속도로 설정 풋 스위치 제어 주입 펌프에 주사기를 탑재합니다. </li><li> 15 호 칼날을 사용하여, 수평 방향에 작은 절개를오른쪽 허벅지베이스. 잘라 내기 및 내부 멤브레인을 전파하고 멸균 면봉으로 영역을 청소합니다. </li><li> 대퇴 정맥의 가지가 보일 때까지 집게와 근육을 분리합니다. 칼집은 동맥, 정맥 및 신경을 둘러싸고 있습니다. Vannas 스프링 가위로 삼각형 모양의 쐐기의 기본 근처 (2-4mm는 일반적으로 적합) 핀치와 집게 (미세 팁 뒤몽 집게)로 상승이 칼집을 당겨, 작은 절개를 잘라. 필요에 따라 절단을 확장합니다. </li><li> 정맥의 방향에 무딘 미세 수술 후크 평행 정맥과 동맥을 분리합니다. 섬세한 막과 정맥 분지가 손상되지 않도록주의하십시오. 그런 다음, 부드럽게 정맥을 들어 올려 기본 결합 조직에서 분리. </li><li> 바늘 나일론 봉합사를 확보하고 대퇴 정맥 옆에 놓습니다. 마이크로 훅을 이용하여 수술, 혈관을 상승 및 원위 영역 아래에 미세한 팁 집게를 통과한다. 봉합사의 한쪽 끝을 잡고 아래 당겨정맥. 단단히 말초 혈관을 결찰. 근위 정맥에서 비슷한 방법으로 두 번째 봉합을 전달하고 느슨한 매듭을합니다. </li><li> Vannas 스프링 가위로 원위부 결찰 근처의 정맥에 작은 상처를 확인합니다. 미세 팁 집게로 필요에 따라 구멍을 확장합니다. 일부 피가 컷을 통해 누수 될 수 있습니다. 감기, 멸균 BSS 및 멸균 면봉으로 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 컷 가장자리 정맥 벽 채 바늘 홀더를 사용하여 제조 된 생리 식염수로 플러시 튜브 용기를 카테 테르를 꽂다. 정맥 및 튜브 주위 근위 매듭을 조입니다. 그리고, 원위 봉합사로 묶어서 배관 앵커. </li><li> 1 ml를 적절 &lt;식염수를 주입하는 풋 스위치를 눌러 카테터의 품질을 확인합니다. 튜브가 방해받지 않고 누출이 없는지 확인합니다. 일시적으로 카테터와 조직을 보호하기 위해 봉합과 절개를 닫습니다. </li></ol></li><li> 시신경의 노출 <ol><li> 위해 준비 할즉, 10 % 프로 비돈 요오드 세제 용액, 70 % 에탄올로 왼쪽 눈 위를 3 회 프리 면도 영역 닦아 수술 부위. </li><li> 제 15 호 블레이드와 눈 뒤에 피부 2-3mm 따라 절개를합니다. 핀치와 톱니 모양의 집게와 결합 조직을 들어 올린 Vannas 스프링 가위로 작은 절개를합니다. 이 작은 절개는 일반적으로 길이가 약 5mm이지만, 훈련 외과 의사에 대한 큰 노출을 제공하기 위해 더 이상 할 수 있습니다. 혈관을 방해하지 않도록주의하면서 퉁명스럽게 궤도 뼈의 우수한 림을 따라 결합 조직을 해부 계속합니다. 면봉으로 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 직근이 보일 때까지 결막을 통해 아래로 해부하다. 핀치와 근육을 통해 해부; 근육은 궤도 내 깊은 곳에서 해방됩니다. 이제, 주변 조직의 시각화가 용이 눈 후퇴 및 승강을 돕기 위해 사용될 수있다. </li><li> 레측면과 아래쪽 피부와 결합 조직의 플랩을 기관 및 봉합 및 지혈과 장소에서 개최. 이 시신경 주위의 지방을 함유 칼집을 공개하기 위해 앞으로 바깥쪽으로 눈을 회전합니다. </li><li> 신중 날카로운 한 쌍의 겸자를 삽입 시스 주변 결합 조직을 분리하는 시신경에 평행하게 확장. 포셉의 날카로운 팁 시신경을 만지지 마십시오. </li><li> 시신경 주변 시스의 5mm 길이는 지금 볼 수 있어야합니다. 외피의 표면에 미세 혈관 망은 시신경을 둘러싸. 이러한 레이저 조사시 대상이 될 것입니다. </li></ol></li><li> Erythrosin B 및 레이저 조사의 정맥 내 주사 <ol><li> 녹색 레이저 빛으로부터 자신을 보호 할 수있는 레이저 조사 장치를 운영하면서 항상 오렌지 색 보안경을 착용 할 것. 레이저를 켜고 셔터를 열고 피크와 평균 포웨를 조정레이저의 중계국은 필요한. 셔터를 닫습니다. </li><li> 레이저 조사 장치에 래트를 위치. 빔 적절한 배치를 보장하기 위해, 약한 조준 빔 공간적 닫힌 셔터 블레이드 천공 100 ㎛ 직경의 구멍을 통해 레이저를 필터링함으로써 생성된다. 잘 팁 포셉 한 쌍의 시신경을 다시 노출, 3 mm이고, 시신경 유두 뒤에 4mm 사이의 안와 내 시신경에 조준 빔을 배치합니다. </li><li> 주입 펌프의 작동을 통해 2 % erythrosin (B)의 용액을 주입한다. 외과 시신경의 표면을 습하게하는 BSS의 작은 방울을 추가하는 동안 몇 초 동안 순환된다. </li><li> 조준 빔의 위치를​​ 확인하고 조사를 시작하기 위해 풋 스위치를 누르십시오. 현미경의 광로에 첨가 오렌지색 안전 필터는 즉시 1 초 지연 후 셔터의 개방 하였다 트리거 될 것이다. </li><li> 9 시신경 조사135mW의 피크 전력과 15 %의 듀티 사이클을 갖는 250 Hz에서 회전 빔 초퍼에 의해 생성 18mW의 평균 전력을 0 초 (이것은 열 효과를 최소화). 안전 필터를 통해 밝은 오렌지색으로 시각화 한 황색 형광을, 시신경의 우수한 표면으로부터 출사 된 빔은 대칭 신경을 조사하도록 충분한다. </li><li> 조사 후, 오렌지 색의 안전 필터가 자동으로 열립니다. 미세 출혈은 몇몇 경우에 관찰 될 수있다. </li><li> 여분의 안구 근육의 견인을 완화하고 중립 위치로 눈을 돌려줍니다. 중단 봉합과 절개를 닫습니다. 그런 다음 카테터를 철회 누출을 방지를 위해 단단히 대퇴 정맥을 묶어; 중단 된 봉합사로 닫습니다. 모두 절개에 항생제 연고를 적용합니다. 망막 중심 정맥과 동맥의 혈관 무결성을 검증하는 안저을 확인합니다. </li></ol></li></ol></li><li> 역행 라벨링. 망막 신경절 세포 (망막 신경절 세포) 주 : RGC 생존, fluorogold (FG)와 역행 라벨을 평가하기 위해 PION 전에 일주를 완료해야합니다. 방법은 주피터 프로토콜 819 (13)에 상세하게 설명한다. <ol><li> 간단히 : 케타민 (60 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (8 ㎎ / ㎏)과 동물을 마취하고 머리를 면도. </li><li> 수술 절개 부위를 스크럽과 머리에서 정중선 절개는 두개골을 노출 할 수 있습니다. </li><li> 두개골을 통해 양자 홀 (O의 2 × 2 ㎜) 모두 시상 및 횡 봉합 0.5 mm의 드릴입니다. </li><li> 조심스럽게 진공 펌프를 사용하여 우수한 둔덕 (SC)의 등 표면 위에 놓여 대뇌 콘텐츠 대기음. 그리고, SC의 표면에 4 % FG 적신 gelfoam을 작은 조각을 배치. </li><li> 표준 수술 후 관리를 사용하여 동물에 대한 봉합과 절개를 닫고 관심. </li></ol></li><li> 수술 후 치료 및 안락사 <ol><li> 동물이 복구 될 때까지 수술 후 순환 가열 물 패드의 상단에 별도의 깨끗한 새장에 동물을 배치합니다. </li><li> 수술 후 진통제 (부 프레 노르 핀 염산은 0.01 ㎎ / ㎏)의 불편을 최소화하기 위해 세 개의 연속 일 동안 하루에 두 번 투여해야한다. </li><li> 쥐 별도로 보관하고 그들이 흉골 드러 누움을 유지하고 충분한 의식을 회복 할 수있을 때까지 관찰해야한다. </li><li> 복구 및 건강의 징후는 수술 후, 또는 봉합사 제거 및 최신 발생 중 수술 부위의 적절한 치유 될 때까지 적어도 5 일 동안 매일 모니터링됩니다. </li><li> 조사의 관심에 따라 수술 후 과학적 적절한 시점에서 4 % PFA와 관류 동물을 안락사. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Wang, Y., Brown, D. P., Duan, Y., Kong, W., Watson, B. D., Goldberg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+rodent+model+of+posterior+ischemic+optic+neuropathy..">A novel rodent model of posterior ischemic optic neuropathy..</a> JAMA Ophthalmology. 131, 194-204 (2013).</li><li>Rucker, J. C., Biousse, V., Newman, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+optic+neuropathies.">Ischemic optic neuropathies.</a> Curr Opin Neurol. 17, 27-35 (2004).</li><li>Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posterior+ischaemic+optic+neuropathy:+clinical+features,+pathogenesis,+and+management..">Posterior ischaemic optic neuropathy: clinical features, pathogenesis, and management..</a> Eye (Lond). 18, 1188-1206 (2004).</li><li>Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inter-Individual+Variation+in+Blood-Supply+of+the+Optic-Nerve+Head..">Inter-Individual Variation in Blood-Supply of the Optic-Nerve Head..</a> Doc Ophthalmol. 59, 217-246 (1985).</li><li>Jacobson, D. M., Vierkant, R. A., Belongia, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+-+A+case-control+study+of+potential+risk+factors..">Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy - A case-control study of potential risk factors..</a> Arch Ophthalmol-Chic. 115, 1403-1407 (1997).</li><li>Kosmorsky, G., Straga, J., Knight, C., Dagirmanjian, A., Davis, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+transcranial+Doppler+in+nonarteritic+ischemic+optic+neuropathy..">The role of transcranial Doppler in nonarteritic ischemic optic neuropathy..</a> Am J Ophthalmol. 126, 288-290 (1998).</li><li>Hayreh, S. S., Zimmerman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-arteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy:+role+of+systemic+corticosteroid+therapy..">Non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy: role of systemic corticosteroid therapy..</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology. 246, 1029-1046 (2008).</li><li>Prado, R., Dietrich, W. D., Watson, B. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+Induced+Graded+Spinal-Cord+Infarction+-+Behavioral,+Electrophysiological,+and+Morphological+Correlates..">Photochemically Induced Graded Spinal-Cord Infarction - Behavioral, Electrophysiological, and Morphological Correlates..</a> J Neurosurg. 67, 745-753 (1987).</li><li>Dietrich, W. D., Busto, R., Watson, B. D., Scheinberg, P., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+infarction.+II.+Edema+and+blood-brain+barrier+disruption..">Photochemically induced cerebral infarction. II. Edema and blood-brain barrier disruption..</a> Acta Neuropathologica. 72, 326-334 (1987).</li><li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis..">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis..</a> Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).</li><li>Watson, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+photochemically+induced+brain+ischemia+and+stroke..">Animal models of photochemically induced brain ischemia and stroke..</a> Cerebrovascular Disease - Pathophysiology, Diagnosis and Treatment. , 52-73 (1998).</li><li>Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+spinal+cord+injury+in+the+rat..">Photochemically induced spinal cord injury in the rat..</a> Brain Research. 367, 296-300 (1986).</li><li>Chiu, K., Lau, W. M., Yeung, S. C., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+labeling+of+retinal+ganglion+cells+by+application+of+fluoro-gold+on+the+surface+of+superior+colliculus..">Retrograde labeling of retinal ganglion cells by application of fluoro-gold on the surface of superior colliculus..</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Here we describe in detail a method for inducing PION in a rat model. The most critical part of the protocol is the exposure and irradiation of the optic nerve &#8211; to expose the nerve as long as possible while avoiding damage caused by the sharp fine tip forceps or from stretching. In rats, the ophthalmic artery enters the optic nerve &#8804;1 mm from the optic nerve head. Therefore, irradiation of the optic nerve 3-4 mm away from the optic nerve head should only result in ischemia of the capillaries feeding the nerv...

50 세 이상 환자에서 허혈성 시신경 병증 (ION)은 급성 시신경 병증 (2)의 가장 일반적인 유형입니다. 전방 (아이온) 또는 후방 (PION) 3 : 조건은 특정 영향을받는 혈액 공급과 임상 양상의 원인에 따라 하나 두 하위 유형으로 표시 할 수 있습니다. 아이온의 병인과 과정은 광범위 4-7 연구되었지만, PION은 가난으로 인해 낮은 유병률, 변수 프리젠 테이션, 잘못 정의 된 진단 기준 및 동물 모델의 부족으로 이해 남아있다. 또한, 더 효과적으로 치료하거나 예방하거나 AION PION에서 시력 손실을 역방향으로 입증되지 않았다. 따라서 PION의 재현성 및 신뢰성있는 동물 모델 생체 내에서 질병 과정을 연구하고 신경 축삭 재생을위한 새로운 치료법을 테스트 큰 값이다. 광 화학적 vasog 결과 미세 혈관에 허혈 손상을 유도enic 부종과 혈전증 효과적으로 지역 조직 허혈 8-12을 만듭니다. 혈관 순환 내로 주입 한 후, 감광성 염료 erythrosin B는 목표 혈관 레이저 조사에 의해 활성화시 반응성 중항 산소 분자를 생성한다. 일 중항 산소를 직접 혈소판 부착 / 응집을 촉진하고 혈전 형성을 폐쇄로 이어지는, 혈관 내피 세포를 peroxidizes. 허혈성 손상이 주변 지역으로 확산 및 추가 인해 vasogenic 부종에 미세 혈관의 압축에 의해 악화된다. 이 프로토콜의 전반적인 목표는 광 화학적 PION에 의한 피해를 미러링 구후 시신경의 허혈을 유도하는 것입니다. 우리의 지식에,이 후방 시신경 1 허혈 손상의 첫 번째 모델이다. 물리적 외상을 피하면서이 모델은 허혈을 생산로서, 후방 허혈성 시신경 병증의 생리적 과정은 더 나은 모방하고 연구한다. 또한,이 모델은 광학 신경 병증 및 기타 중추 신경계 허혈성 질환에 대한 후보 치료제의 스크리닝을위한 새로운 플랫폼을 제공합니다. 여기서, 쥐 모델에서 PION 대퇴부 정맥 카테터, 시신경 노출 Erythrosin B의 정맥 내 주입과 레이저 조사에 대한 상세한 프로토콜 설명한다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>532-nm Nd:YAG laser&#160;</td>
			<td>Laser glow</td>
			<td>LRS-532-KM-200-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beam chopper</td>
			<td>custom-made</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mechanical shutter and corresponding shutter drive timer</td>
			<td>AAM Vincent Associates</td>
			<td>SD-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25-cm focal length spherical lens</td>
			<td>CVI/Mellles-Griot</td>
			<td>01 LPX 293</td>
			<td>plano-convexBK7 glass lens with HEBBARTM antireflection coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythrosin B&#160;</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>190449</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorogold</td>
			<td>Fluorochrome,LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>CAH1203421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tubing (PE10)</td>
			<td>BD Intramedic</td>
			<td>427400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 Blade</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>91150-20</td>
			<td>DUMONT #5 RUSTLESS NON-MAGNETIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps with Teeth</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11153-10</td>
			<td>Germany stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>18025-10&#160;</td>
			<td>Germany stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas spring scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>2-220&#160;</td>
			<td>JJECK Stainless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J488G</td>
			<td>7-0 suture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemostat</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12075-12&#160;</td>
			<td>Germany stainless</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rat model of photochemically-induced posterior ischemic optic neuropathy

후방 허혈성 시신경 병증 (PION)는 임상에서 시력 파괴적인 질병이다. 그러나, 그 발병 기전과 자연의 역사는 제대로 이해 남아있다. 최근에는 PION의 신뢰성, 재현성이 동물 모델을 개발하고,이 모델 (1)에 약간의 신경 영양 인자의 치료 효과를 시험했다. 이 비디오의 목적은 후방 허혈성 시신경 병증의 우리의 광 화학적으로 유도 된 모델을 설명하고, 망막 신경절 세포의 역행 라벨과 그 효과를 평가하는 것입니다. 후방 시신경, 광 증감 색소, erythrosin (B)의 노출 수술에 이어, 정맥 내 주사하고, 레이저 빔은 시신경 표면 상에 집중된다. 혈소판 혈전증 및 부종 압축에 의해 매개 미세 혈관 폐색을 묻는 조사 손상, 혈관 내피 세포, 동안 erythrosin B와 레이저의 광 화학적 상호 작용. 그 결과 허혈성 손상은 점진적하지만 pronounc를 산출원격 부상 유도 및 임상 적 결과 - 축삭 입력의 손실로 인해, 망막 신경절 세포 dieback 에드. 따라서,이 모델은 PION의 병태 생리 학적 과정을 연구하기위한 새로운 플랫폼을 제공하고, 또한 광학 신경 병증 및 기타 CNS 허혈성 질환에 대한 치료 방법을 테스트하기 위해 최적화 될 수있다.

이 기술에 의해 유도 된 결과 허혈성 손상은 허혈성 축삭 손상 후 망막 신경절 세포의 점진적인 발음하지만 사망 산출한다. 이것은 인간의 질환에서 관찰 된 것과 유사한 임상 적 결과이다. FG 역행 라벨은 PION 후 RGC 생존을 정량화하는 데 사용됩니다. 동일한 방법이 성공적인 모델 생성을 검증뿐만 아니라 다른 치료법의 효과를 평가하기 위해 사용된다. (1)는 제어부로부터의 망막 평?...

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Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

이 프로토콜의 목적은 화학적 랫트 후부 시신경에 허혈 손상을 유도하는 것이다. 이 모델은 후방 허혈성 시신경 병증의 병태 생리에 대한 연구 및이를위한 치료 적 접근 방법과 다른 광섬유에 중요한 신경 병증,뿐만 아니라 다른 CNS 허혈성 질환이다.

광 화학적으로 유도 된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history ...

rat-model-photochemically-induced-posterior-ischemic-optic

Research

JoVE Journal

Medicine

8.5K 조회수.  University of Miami Miller School of Medicine.  이 프로토콜의 목적은 화학적 랫트 후부 시신경에 허혈 손상을 유도하는 것이다. 이 모델은 후방 허혈성 시신경 병증의 병태 생리에 대한 연구 및이를위한 치료 적 접근 방법과 다른 광섬유에 중요한 신경 병증,뿐만 아니라 다른 CNS 허혈성 질환이다. 

비디오: Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and affect the nutritional status and surgical outcomes. Study of the pathophysiological changes occurring in the liver and other organs is of importance. Various studies have been done in cholestatic rat models.
We used a reversible cholestatic rat model in our recent study looking at the role of methylprednisolone in the ischemia reperfusion injury. Various techniques for creation of a reversible cholestatic model have been described. Creation of a reversible cholestatic rat model can be challenging in view of the smaller size and unique hepatopancreatobiliary anatomy in rats. This video article demonstrates the creation of a reversible cholestatic model.
This model can be used in various studies, such as looking at the changes in nutritional, physiological, pathological, histological and immunological changes in the gastrointestinal tract. This model can also be used to see the effects of cholestasis and various therapeutic interventions on major hepatic surgeries.

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Creation of a reversible cholestatic rat model can be challenging in view of the smaller size and unique hepatopancreatobiliary anatomy in rats. This video article demonstrates the creation of a reversible cholestatic model.

가역 Cholestatic 쥐 모델의 생성

Cholestasis is a clinical condition commonly encountered by both surgeons and gastroenterologists. Cholestasis can cause various physiological changes and ...

연구

의학

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

잠복기 모델에서 허혈성 심장 마비에 대한 유전자 전송

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

허혈성 상처 모델 생산을위한 단순화된 테크닉

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

허혈성 쥐 폐의 혈관 신생

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

쥐 허혈성 피부 상처 모델의 데모

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their lifetime. NAION results in optic nerve edema, selective loss of the retinal ganglion cell neurons (RGCs) and atrophy of the optic nerve. A rodent model of NAION that expresses most NAION features and sequelae has been developed, which is applicable to both rats and mice. This model utilizes a focal laser application of 532 nm wavelength to illuminate a photoactive dye, Rose Bengal (RB), to cause capillary damage and leakage at the targeted anterior optic nerve (the laminar region). After rNAION induction, there is an early optic nerve ischemia, optic nerve edema, and intraneural inflammation, followed by selective RGC and axonal loss. Since the optic nerve is a CNS white matter tract, the rNAION model is applicable to mechanistic studies of selective white matter ischemia, as well as neuroprotective analyses and short and long-term mechanisms of glial and neuronal response to ischemia.

The Rodent Model of Nonarteritic Anterior Ischemic Optic Neuropathy rNAION

The following report describes how to replicate the rodent model of nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (rNAION), using the appropriate dye, contact lens and laser parameters. We also reveal the appropriate steps for evaluating the rNAION lesion in vivo.

Nonarteritic 전방 허혈성 시신경 병증의 설치류 모델 (rNAION)

Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy (NAION) is a focal ischemic lesion of the optic nerve that affects 1/700 individuals throughout their ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

설치류에 있는 허혈성 망막 질병을 위한 산소 유도한 망막병증 모형

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...