Name: use of rabbit eyes in pharmacokinetic studies of intraocular drugs
Uploaded: 2016-07-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
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We would like to thank Ms. Ji Hyun Park and Ji Yeon Park for their technical assistance in the animal experiments. This work was supported by a grant from the Seoul National University Bundang Hospital Research Fund (grant number: Grant No. 14-2014-022) and from a grant (CCP-13-02-KIST) from the Convergence Commercialization Project of the National Research Council of Science and Technology, Seoul, Korea.

우리의 프로토콜은이 프로토콜에 제시된 동물 절차 및 동물 관리 방법을 모두 승인 분당 서울 대학교 병원의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 지침을 따릅니다. IACUC는 실험 동물의 관리 및 사용 (2011)에 대한 안내서의 제 8 판을 완전히 준수에 있습니다. 모든 절차는 동물에서 안과 및 비전 연구에서 동물의 사용을위한 비전 및 안과 정책 연구 협회의 가이드 라인을 준수하여 수행 하였다. 개별 케이지는 토끼를 주택에 사용 하였다. 추가 수술이나 준비이 실험을 수행하기 전에 (즉, 살균)이 필요하지 않을 수 있습니다. 토끼 눈에 약 1. 안구 내 주사 <ol><li> tiletamine 염산염과 zolazepam의 혼합물의 근육 내 주사로 1.5 kg 무게 건강한 뉴질랜드 흰 토끼를 마취염산염 (15 ㎎ / ㎏)와 자일 라진 하이드로 클로라이드 (/ kg 5 mg)을 얻었다. 수술법 (깜박임) 반사를 모니터링하거나 귀 핀치에 의해 마취를 확인합니다. 참고 : 안압 약이 눈 안료에 결합하면 결합의 정도는 약물의 안구 약물 동태의 수정을 유도 할 수 있습니다. 예를 들어, 착색 된 토끼의 유리체 수성 체액에서 안료 결합 약물의 반감기를 증가 알비노 토끼 (14)이 비교 될 수있다. 인간의 눈은 인간의 대응을 표현하지 않을 수도 색소와 알비노 토끼 눈의 상이한 정도가이 경우, 착색 된 토끼의 눈으로부터 얻은 데이터는 인간의 눈에 더 유사하고 적용 할 수있다. 따라서, 약물 - 안료의 상호 작용을 고려하여, 착색이나 알비노 토끼의 사용은 신중하게 고려되어야하며, 그 결과는 토끼의 스트레인 (색소)와 함께 해석되어야한다. 그러나 흰둥이 토끼는 D로 약동학 적 특성을 비교 연구에 사용 권장양탄자 - 안료 상호 작용은 비교의 교란 요인이 될 수있다. <ol><li> 1 % proparacaine 염산염 안과 눈 방울과 국소 마취제를 적용합니다. 마취에서 회복 될 때까지 눈 건조를 방지하기 위해 수의사 연고 (2 % 히드 록시 프로필 메틸 셀룰로오스)를 사용합니다. 참고 : 마취 상태에서 무인 토끼를 두지 마십시오. </li></ol></li><li> 페닐 염산염 tropicamide 한두 방울 동공 팽창. </li><li> 안압 주입하기 전에 수술 준비를 위해, 면봉 5와 눈 주위 피부에 5 ~ 10 %의 포비돈 - 요오드를 적용합니다. 눈의 결막에 5 ~ 10 %의 포비돈 - 요오드 한 방울을 놓습니다. </li><li> 무균 기술 5를 사용 중 유리체 강내 또는에 각막 안압 약을 관리 할 수 있습니다. 참고 : 전신 순환에 흡수 된 약물은 또한 동료의 눈을 관통 할 수있다. 약물이 양쪽 눈에 투여하는 경우, 한쪽 눈의 약물 농도가 약물 주입에 의해 영향을받을 수있다다른 눈. 이 반대측 주입의 영향은 다른 눈을 관통 할 수없는 전신 순환 약물로 무시 될 수 있다고 확인 된 경우, 안구 주사 양안의 사용은 경제적으로 고려 동물의 수는 희생이 최소화 될 수있다 약동학 연구. 안내 주입 다음 전신 농도 약동학 연구를 위해, 오직 하나의 눈의 사용이 적절하다. <ol><li> 유리체 강내 주사의 경우, 공막면 (5)에 수직으로 30 G 바늘과 중 상업 1ml를 주사기, 인슐린 주사기, 또는 유리 주사기를 사용하여 유리체 강내 1mm 상이 측 사분면에서 수술 윤부 뒤에 약물을 주입. 참고 : 전방 내 및 유리체 강내 주입에 사용되는 약물의 양이 조사에서 약물에 따라 달라집니다. 토끼 눈을 사용하여 안티 VEGF 요원에 대한 약동학 실험을 위해, 이전의 연구는 0.025, 0.05 (가장 일반적), 0.1 m를 사용전방 내 또는 유리체 강내 주입 베바 시주 맙 또는 라니 비주 맙의 리터. 항 - 혈관 내피 세포 성장 인자, 베바 시주 맙 (15)의 0.05 ㎖, VEGF 트랩 16 0.025 라니 비주 맙의 ㎖, 0.03 ml로 안내 약동학에 우리의 이전 연구에 사용 하였다. 이 (17)을지지하는 증거가되었지만 천자없이 안전하게 큰 부피를 0.1 ml의 것으로 생각된다. 과도한 양이 어느 하나에 각막 또는 유리체 강내 주입되면 안압이 크게 증가된다. IIOP는 뇌의 뇌졸중과 유사 손상된 안구 혈류 및 망막 중심 동맥 폐쇄, 리드 극단적 인 경우에 직접 안압 상승 (IIOP)에 의한 시신경 손상, 즉 녹내장 성 시신경 손상,뿐만 아니라. </li><li> 전방 내 주사의 경우, 최대 경사와 공막 윤부를 통해 30 G 바늘을 삽입하고 그것을 씩 전진하여 전방에 약물을 주입홍채 렌즈 또는 외상의 위험을 최소화하기 위해 조리개 평면 rallel. 주 : 약물 제형에 따라보다 큰 30 G 사용할 수 바늘. 큰 게이지 바늘을 필요로하는 조건은 약물 함유 미립자 큰 단백질 약물, 고점도 조성물을 포함한다. </li><li> 주사 후 상처 치유를 촉진하기 위해 멸균 솜 팁 어플리케이터 주사 부위를 압축합니다. 참고 : 일반적으로 30 초 30 G 바늘이 안구 내 주사에 사용되는 상처 치유를위한 충분하다. 큰 게이지 주사 바늘이 안구에 사용되는 경우, 더 긴 시간은 공막 상처로부터의 누설을 최소화하기 위해 밀봉 부상에 적합 할 것이다. 공막 상처 누설을 확인하기 위해서는 더 큰 게이지 바늘을 사용하는 경우 특히 안압 주사 후 즉시 사용 안내 약물의 양이 주입량과 동일 함을 보장하는 것이 중요하다. </li></ol></li><li> 매일 처리 토끼에 대한 관찰일주, 그리고 이후 일주일에 한 번, 심한 안구 내 염증 (결막 충혈 및 전방 축 농과)의 징후가 안락사까지. 참고 : 주사 후 진통제는 30 G 바늘은 수술 후 통증을 동반하지 않는 최소 침습 절차 이용 안내 주입이 필요하지 않습니다. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다. </li></ol> 2. 샘플 준비 <ol><li> 적출의 경우, 안내 약물 주입 후 다양한 시점에서 토끼 (예., 1 시간, 1, 2, 5, 9, 14 일 또는 30 일)에 안락사. 참고 :이 시점이 관심의 약물 및 알려진 약동학 적 프로파일에 따라 달라집니다. 각각의 시간 지점에 대한 적어도 2 개의 안구 (13)를 사용한다. 신뢰성있는 데이터에 대해, 샘플링 시간은 약 13 개의 반감기의 적어도 시간 간격에서 균형 샘플링 신중 적어도 네 번 포인트를 선택해야 </&gt; SUP. 우리는 균형 잡힌 샘플링 6-8 시간 포인트가 적합 할 수 있다고 생각합니다. 특히 소분자 (≤1,000 다) (18)의 경우, 제 24 시간 동안 1 개 이상의 시간 지점은 매우 중요하다. 따라서,에 대한 고분자 (&gt; 1000 다) 18 샘플링주기 등으로 1 시간 및 1, 2, 5, 9, 14, 30 일 (19)는 좋은 선택 일 수있다. 소분자 (≤1,000 다), 1, 2, 4, 8 시간 및 1, 3, 7 일간 하나의 옵션 (20) 일 수있다. 분자량에 따라 샘플링주기가 더 변형 될 수있다. <ol><li> 안락사 빠르게 tiletamine 염산 zolazepam 염산염 (15 ㎎ / ㎏)와 자일 라진 하이드로 클로라이드 (/ kg 5 mg)의 혼합물을 근육 주사로 토끼를 마취 한 후 15 % 정맥 KCl을 10 ml의 관리. </li></ol></li><li> 일말의 트랙터와 안 검열을 엽니 다. 윤부에 360 ° 결막 절개 2-3mm 후방을 확인하고 C를 해부하여 후방 연장onjunctiva과 세계에서 장부의 캡슐. </li><li> 전 세계에 자신의 삽입에 가까운 안구 근육을 잘라. 곡선 집게로 시신경을 고정하고 집게와 세계 사이의 신경을 잘라. 그대로 주변 조직을 떠나있는 동안 안구 자체를 제거합니다. 안구 적출술 후 즉시 시선을 고정하고 -80 ° C에 저장합니다. 주 : 즉시 동결에 대한 두 가지 옵션이있을 수 있습니다. 약물 농도가 매우 초기 단계에서 측정되는 경우 (예. 1 시간 미만), 액체 질소는 안구의 더 나은 적시 동결을 보장하는 것이 더 적절할 수있다. 그러나, 후속 기간 동안 얼음 즉시 안구를 냉각하는 데 사용될 수 있으며, 그러면 냉동고는 -80 ° C에서 시선을 저장하는 데 사용될 수있다. </li><li> 시간의 모든 지점에 대해 시선을 얻은 후, 세 개의 구획, 유리체, 방수 내, 망막 / 맥락막에 냉동 시선을 분리한다. defros 전에 이러한 구획을 분리팅. 주 : 세 구획으로 분리를위한 가장 중요한 포인트는 절차의 속도이다. 안구는 매우 빠르게 해동 전에 분리되어야하고, 해동 과정을 지연 얼음에 수행 될 수있다. <ol><li> 세계를 열려면, 메스 블레이드와 각막 윤부 (300 ℃ 이상)에서 절개를합니다. 홍채, 수성 유머 앞에 얼어 붙은 함을 얻습니다. </li><li> 당기 및 조직 집게를 사용 통렬하게 비판하여 고정 조리개와 렌즈를 제거합니다. 유리체에 액세스 할 수있게되면, 남아있는 조직 (망막 / 맥락막 / 공막)에서 분리하여 냉동 유리체을 구하십시오. </li><li> 호 메스 (15) 블레이드를 사용하여, 하부 공막에서 망막 / 맥락막 조직을 분리한다. </li></ol></li><li> 면역 들어, 방수 샘플을 해동하고, 각 샘플의 체적을 측정한다. 튜브 함유 t에서의 빈 튜브의 중량을 뺀 동결 시료의 중량을 측정하여그는 샘플을 동결. 주 : 동결 시료의 비중이 대략 1이기 때문에, 각 시료의 중량을 시료의 양을 계산하는데 사용될 수있다. </li><li> 상기 유리체 샘플 무게 샘플을 해동하고, 밤새 4 ℃에서 회 전자의 1 % 소 혈청 알부민을 함유하는 인산염 완충 염수 중 1.0 ㎖에 용해들을. 그런 다음, 10 분 21 387 XG에서 샘플을 원심 분리기. </li><li> 균질화를위한 냉동 망막 / 맥락막 샘플을 달아. 1시 10분 (조직 1g / 시약 10 ㎖)의 시약 조직의 비율로 단백질 추출 시약을 추가한다. 미리 냉각 microhomogenizer를 사용하여 조직을 균질화. 12,000-20,000 XG에서 10 분 동안 용해 샘플을 원심 분리기 및 냉장 EPP 튜브에 뜨는을 전송합니다. </li></ol> 3. 면역 주 : 여러 분석 방법은 단백질 농도 측정을 위해 사용될 수있다. D, 적절한 정량적 인 방법을 선택합니다감지 범위에 epending. LC-MS / MS는 각각 MRM / PRM 모드 프로파일에 대한 단백질의 나노 그램과 피코 레벨을 검출 할 수있는 반면, 간단히, HPLC 선택된 이온 모니터링 모드는 피코 그램 분자의 수준을 검출 할 수있다. ELISA의 검출 한계는 피코 그램 수준으로 간주된다. <ol><li> 간접 효소 면역 분석법 (ELISA를)의 경우, 항 VEGF 제의 농도를 측정하기 위해 관심있는 약물을 검출하고 공지 된 약물의 농도는 표준 곡선을 생성하는 96- 웰 플레이트에서 ELISA 키트를 사용한다. <ol><li> 유리체의 방수 및 선형 범위 내에 농도 1X 인산 완충 식염수 (PBS) 중 0.1 % 소 혈청 알부민으로 망막 / 맥락막 샘플을 희석하고, 분석을 위해 이들을 사용한다. </li></ol></li><li> 잘 / 100 μL에서 접시에 분취에 샘플을 나눕니다. 4 ℃에서 밤새 인큐베이션 한 후, 플레이트를 0 세정 용액 200 μl를 사용하여 세 번 세척 하였다.1X PBS에서 05% 트윈 20. 참고 : ELISA에 대한 일차 항체로 샘플 행위의 방지 VEGF 존재; 따라서, 차 항체의 추가 사용이 필요하지 않습니다. </li><li> 1X PBS에서 20,000 0.1의 %의 BSA를 잘 당 희석-용액 100 μl를 추가 : 1로 차 항체를 희석. 4 ℃에서 하룻밤 동안 희석 된 이차 항체와 함께 플레이트를 배양 한 후 450 nm 파장에서의 흡광도를 측정한다. 각각의 표준 및 샘플 중복 측정 값의 평균에서 평균 제로 표준 광학 밀도를 뺍니다. </li><li> 이러한 프로 소프트 맥스 등의 4- 파라미터 로지스틱 (4- PL) 곡선 맞춤을 생성 할 수있는 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 데이터를 감소 알려진 농도의 약물 용액에서 상대적 광 신호에 기초하여 표준 곡선을 생성한다. [맞춤] - 표준 곡선을 작성하는 경우, 4 PL 곡선 맞춤은 [표준 곡선]의 [4- 파라미터] 클릭함으로써 획득 될 수있다. </li><li> 견본 FR의 약물 농도를 계산표준 곡선을 옴. 주 : 항 -VEGF 약물의 검출 한계 (LOD)를 본 실험에서 연구 하였다. 베바 시주 맙의 LOD는 ml의 0.024-3.125 NG /했고 aflibercept의는 0.039-10 ng를 / ㎖이었다. </li></ol> 4. 약동학 적 분석 방법 주 : PK 분석을 위해, 하나는 구획되지 또는 구획되지 않은 분석 중 하나를 사용할 수있다. 구획되지 분석에서 분자의 배열 동작은 방정식 (모델)에 의해 설명 될 수있다. 구획되지 않은 모델을 시각화 또는 다른 투여 요법에 대한 농도 - 시간 프로파일을 예측할 수없는 반면에 따라서, 구획되지 PK 분석은 시간 t에서의 농도를 예측할 수있다. 그러나, 구획되지 모델의 피팅은 복잡하고 긴 과정이 될 수 있습니다. 대조적으로, 가정 구획되지 않은 모델에서 덜 제한적이다. 비 구획되지 방법은 간단하며 반감기가 클리어런스 및 분포 부피 등의 약물 동력학 파라미터를 계산하기 위해 일반적으로 사용된다.우리는 안티 VEGF 요원에 대한 약동학 연구에 구획되지 모델을 선택했다. <ol><li> 이러한 피닉스 WinNonlin 소프트웨어로서 모델링 소프트웨어를 사용하여 구획되지 모델 약물 농도 데이터를 분석한다. <ol><li> [WNL5 클래식 모델]에서 [PK 모델]를 클릭하고 [설정] 메뉴에서 관측 시간, 투여 용량, 및 약물 농도를 매핑합니다. </li><li> 에서 [모델 선택] 탭에서 (예를 들어, 구획 수) 구획되지 모델을 선택하고 모델 매개 변수를 계산하기 위해 [실행] 버튼을 클릭합니다. </li></ol></li><li> (. 예를 들어, 표준 에러) (1) 아카 이케 정보 기준 (2) 파라미터 추정의 정밀도, 및 (3) 그래픽 분석 : 분석 한 결과, 가장 아래의 기준에 따라 약물 농도 데이터를 설명하는 최종 구획 모델을 선택 (예., 맞는 그래프의 선 (善)). </li><li> 같은 시간에 집중하고 아래의 반감기 (T 1/2) 및 지역 관심의 약물 동태 학적 파라미터를 계산구획되지 모델에 의해 구동되는 모델 파라미터 방정식으로부터 기 곡선 (AUC). </li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

With the increasing use of intraocular drugs, such as anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) agents, for the treatment of diverse ocular diseases, knowledge of the tissue distribution and clearance of the drug after the intraocular injection is important. Understanding the pharmacokinetics of intraocular drugs is important for understanding the efficacy and safety of drugs, determining the optimal dosage of the drugs, and minimizing systemic or intraocular complications. However, detailed pharmacokinetic studies ...

안구 내 약물 전달의 출현 전에 안구 질환에 대한 의학적 치료의 주된 관심사는 약물이 눈에 침투 할 수있는 효율이었다. 혈액 - 눈 장벽은 눈에 확산, 마약 등 많은 물질을 방지 할 수 있습니다. 따라서, 치료 수준 위에있는 약물의 농도는 쉽게 얻을 수 없다. 약물의 치료 적 농도는 눈 4,5-에서 달성 될 수 있도록 전방 내 강내 주사를 포함하는 안구 내 약물 투여 방법은 수 직접 혈액 - 안구 장벽을 우회 1-3. 따라서, 유리체 강내 약물 전달은 여러 가지 안구 질환 5,6 치료의 인기있는 방법이되고있다. 예를 들어, 강내 주사 널리 연령 관련 황반 변성, 당뇨병 성 망막증, 망막 정맥 폐색, 및 안구 감염 7-10 행한다. 특히, 이후항 -VEGF 약물의 도입은, 강내 주사 주파수는 현저히 망막 질환의 치료에 증가했다. 따라서, 약물 치료의 효능 및 안전성을 평가하기 위해 이러한 약물의 약동학 안압을 이해하는 것이 중요하다. 약물의 안내 행정부가 안구 내 약물 농도를 모니터링 안구 질환에 대한 약물 치료에 중요한 돌파구로 간주되지만 기술적으로 요구하고있다. 인간의 눈은 방수 (약 200 μL) 및 유리질 (4.5 ㎖, 표 1)의 소량을 포함하기 때문에, 약물의 농도를 측정하는 안구 유체의 충분한 양을 획득하는 것은 기술적으로 곤란하다. 또한, 이러한 유리체 도청 또는 전방 천자로 눈 유체를 얻기 위해 사용하는 방법은, 안구 조직을 손상 및 백내장, 안내 염, 또는 심각한 합병증이 발생할 수 있습니다망막 박리 (11, 12). 따라서, 동물 모델은 일반적으로 사용되는 약물 안내 (13)의 약물 동력학 연구에 사용된다. 이러한 동물 모델 중에서, 토끼, 또는 원숭이는 가장 자주 사용되는 동물이다. 가족 토끼의 순서 토끼 목의 작은 포유류 토끼는 세계의 여러 부분에서 발견된다. 토끼 공격적인 없기 때문에, 그들은 처리 실험에서 사용하여 관찰하기 쉽다. 비용 절감, 인간 동물 유사한 아이 사이즈의 준비된 가용성 및 비교 호의 토끼 눈을 사용하여 약동학 연구를 수행하기위한 정보의 대형 데이터베이스. 본 논문에서는 토끼 눈의 안압 약의 약동학 적 연구를위한 프로토콜을 설명한다.

<table><tbody><tr><td>Zoletil</td><td>Virbac Laboratories, Carros Cedex, France</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine hydrochloride&amp;nbsp;</td><td>Fort Dodge Laboratories, Fort Dodge, IA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proparacaine hydrochloride (Alcaine)</td><td>Alcon laboratories, Fort Worth, TX</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phenylephrine hydrochloride and tropicamide</td><td>Santen Pharmaceutical, Co., Osaka, Japan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human VEGF 165</td><td>R&amp;amp;D systems</td><td>293-VE-050</td><td></td></tr><tr><td>Carbobate-Bicarbonate buffer</td><td>SIGMA</td><td>C3041-50CAP</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Microwell 96F w/lid 
Nunclon D Si</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>167008</td><td>96 well plate</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA) 25 g(Net)</td><td>BOVOGEN</td><td>BSA025</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.4 (1x), 500 ml</td><td>gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Sheep anti-Human IgG Secondary Antibody, HRP conjugate</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>PA1-28652</td><td></td></tr><tr><td>Goat Anti-Human IgG Fc(HRP)</td><td>abcam</td><td>ab97225</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Human IgG, Fab&#039;2 Secondary Antibody, HRP conjugate</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>PA1-85183</td><td></td></tr><tr><td>CelLytic MT&amp;nbsp; Cell Lysis Reagent</td><td>SIGMA</td><td>C3228-50ML</td><td>lysis buffer</td></tr><tr><td>100 Scalpel Blades</td><td>nopa instruments</td><td>BLADE #15</td><td></td></tr><tr><td>100 Scalpel Blades</td><td>nopa instruments</td><td>BLADE #10</td><td></td></tr><tr><td>Feather surgical blade stainless steel</td><td>FEATHER</td><td>11</td><td></td></tr><tr><td>1-StepTM TMB-Blotting substrate solution, 250 ml</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>34018</td><td></td></tr><tr><td>Stable Peroxide Substrate Buffer (10x), 100 ml</td><td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>34062</td><td></td></tr><tr><td>Softmax Pro</td><td>Molecular Devices</td><td>v.5.4.1</td><td>software for generating standard curve</td></tr><tr><td>SAAM II&amp;nbsp;</td><td>Saam Institute, Seattle, WA</td><td></td><td>software for pharmacokinetic modeling</td></tr><tr><td>Phoenix WinNonlin</td><td>Pharsight, Cary, NC</td><td>v. 6.3</td><td>software for pharmacokinetic modeling</td></tr><tr><td>Avastin (bevacizumab)</td><td>Genentech</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

use of rabbit eyes in pharmacokinetic studies of intraocular drugs

자신의 전신 흡수를 최소화하면서 약물 투여의 안내 경로, 치료 약물의 높은 농도의 전달을 가능하게한다. 몇몇 약물은 전방 또는 유리체 내로 투여되고, 주사 안내 다양한​​ 안구 질환의 치료에 효과적이었다. 동물이 다른 포유 동물에 비해 취급이 용이하고 경제적이기 때문에 가토 널리 안과 연구에 사용되었고, 토끼 눈의 크기는 사람의 눈의 그것과 유사하다. 30 G 바늘을 사용하여, 약물은 토끼 눈의 전방 내 강내 공간으로 주입 될 수있다. 안구는 분석까지 동결되고, 방수, 유리체, 망막 / 맥락막으로 나눌 수 있습니다. 유리체 망막 / 맥락막 샘플을 균질화하고 분석하기 전에 가용화 할 수있다. 그리고, 면역 각 구획에서 인공 약물의 농도를 측정하기 위해 수행 될 수있다. 적절한 약물 동력 학적 모델 일 수있다이러한 반감기 및 약물의 최대 농도 등 여러 가지 파라미터를 계산하는 데 사용된다. 토끼의 눈은 안구 내 약물의 약동학 적 연구를위한 좋은 모델이 될 수 있습니다.

무균 기법 가토 관심 약물의 체내 주사를 실시하는 데 사용되는 방법은도 1에 도시되어있다. 처리 된 눈 예약 된 시간에 적출하고 -80 ℃에서 보관한다. 그림 2에서 입증 된 바와 같이 분석, 세 개의 구획, 수성 유머, 유리체, 망막 / 맥락막를 들어, 냉동 토끼 눈에서 분리된다. 구획의 샘플은 ELISA에 대 한 준비가되어 있습니다. 이차 항체와 함께 배양...

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Use of Rabbit Eyes in Pharmacokinetic Studies of Intraocular Drugs

Rabbits are widely used to study the pharmacokinetics of intraocular drugs. We describe a method for conducting pharmacokinetic studies of intraocular drugs using rabbit eyes.

안구 약의 약동학 연구에서 토끼 눈의 사용

The intraocular route of drug administration enables the delivery of high concentrations of therapeutic drugs, while minimizing their systemic absorption. ...

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Novel Photoacoustic Microscopy and Optical Coherence Tomography Dual-modality Chorioretinal Imaging in Living Rabbit Eyes

Photoacoustic ocular imaging is an emerging ophthalmic imaging technology that can noninvasively visualize ocular tissue by converting light energy into sound waves and is currently under intensive investigation. However, most reported work to date is focused on the imaging of the posterior segment of the eyes of small animals, such as rats and mice, which poses challenges for clinical human translation due to small eyeball sizes. This manuscript describes a novel photoacoustic microscopy (PAM) and optical coherence tomography (OCT) dual-modality system for posterior segment imaging of the eyes of larger animals, such as rabbits. The system configuration, system alignment, animal preparation, and dual-modality experimental protocols for in vivo, noninvasive, label-free chorioretinal imaging in rabbits are detailed. The effectiveness of the method is demonstrated through representative experimental results, including retinal and choroidal vasculature obtained by the PAM and OCT. This manuscript provides a practical guide to reproducing the imaging results in rabbits and advancing photoacoustic ocular imaging in larger animals.

This manuscript describes the novel setup and operating procedure of a photoacoustic microscopy and optical coherence tomography dual-modality system for noninvasive, label-free chorioretinal imaging of larger animals, such as rabbits.

살아있는 토끼 눈에 소설 Photoacoustic 현미경 및 광학 일관성 단층 촬영 듀얼 적임 Chorioretinal 이미징

Photoacoustic ocular imaging is an emerging ophthalmic imaging technology that can noninvasively visualize ocular tissue by converting light energy into ...

연구

공학

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal abnormalities. In addition, pathological myopia is a common irreversible cause of visual impairment and blindness1-3. Our study demonstrates the effect of scleral crosslinking using riboflavin and ultraviolet-A radiation on the development of axial myopia in a rabbit model. The axial length of the eyeball was measured by A-scan ultrasound in New Zealand white rabbits aged 13 days (male and female). The eye then underwent 360&#176; conjunctival peritomy with scleral crosslinking, followed by tarsorrhaphy. Axial elongation was induced in 13 day-old New Zealand rabbits by suturing their right eye eyelids (tarsorrhaphy). The eyes were divided into quadrants, and every quadrant had two scleral irradiation zones, each with an area of 0.2 cm&#178; and a radius of 4 mm. Crosslinking was performed by dropping 0.1% dextran-free riboflavin-5-phosphate onto the irradiation zones 20 sec before ultraviolet-A irradiation and every 20 sec during the 200 sec irradiation time. UVA radiation (370 nm) was applied perpendicular to the sclera at 57 mW/cm&#178; (total UVA light dose, 57 J/cm&#178;). Tarsorrhaphies were removed on day 55, followed by repeated axial length measurements. This study demonstrates that scleral crosslinking with riboflavin and ultraviolet-A radiation effectively prevents occlusion-induced axial elongation in a rabbit model.

We demonstrate the effect of scleral crosslinking with riboflavin and UVA on an axial elongation rabbit eye. Axial elongation was induced in 13 day-old New Zealand rabbits (male and female) by suturing their right eye eyelids (tarsorrhaphy).

공막 래빗 모델에 축 방향 근시의 예방 리보플라빈 및 자외선-A 방사선을 사용하여 교차 결합

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

의학

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

토끼의 망막 수술에 대한 단계 프로토콜에 의해 단계

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Spatio-Temporal In Vivo Imaging of Ocular Drug Delivery Systems using Fiberoptic Confocal Laser Microendoscopy

Subconjunctival injection is an attractive route to administer ocular drugs due to easy trans-scleral access that bypasses anterior ocular barriers, such as the cornea and conjunctiva. While therapeutic effects and pharmacokinetics of the drugs upon subconjunctival injection have been described in some studies, very few assess the ocular distribution of drugs or drug delivery systems (DDS). The latter is critical for the optimization of intraocular DDS design and drug bioavailability to achieve the desired ocular localization and duration of action (e.g., acute versus. prolonged). This study establishes the use of fiberoptic confocal laser microendoscopy (CLM) to qualitatively study the ocular distribution of fluorescent liposomes in real-time in live mice after sub-conjunctival injection. Being designed for in vivo visual inspection of tissues at the microscopic level, this is also the first full description of the CLM imaging method to study spatio-temporal distribution of injectables in the eye after subconjunctival injection.

Spatio-Temporal In Vivo Imaging of Ocular Drug Delivery Systems using Fiberoptic Confocal Laser Microendoscopy

We present a protocol for the use of fiberoptic confocal laser microendoscopy (CLM) to non-invasively study the spatio-temporal distribution of liposomes in the eye after subconjunctival injection.

광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사를 사용하여 안구 약물 전달 시스템의 생체 내 측두 체 이미징

Subconjunctival injection is an attractive route to administer ocular drugs due to easy trans-scleral access that bypasses anterior ocular barriers, such ...

생체공학

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

코카나발린A에 의해 유도된 수성 결핍 안구 건조증의 토끼 모델: 약물 효능 연구에 적용

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...

Establishment of a Severe Dry Eye Model Using Complete Dacryoadenectomy in Rabbits

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic step. Despite advances in our understanding of DED, significant knowledge gaps remain. Advances are limited in part due to the lack of informative animal models. The authors recently reported on a method of DED induced by injecting all orbital lacrimal gland (LG) tissues with the lectin concanavalin A. Here, we report a novel model of aqueous-deficient DED based on the surgical resection of all orbital LG (dacryoadenectomy) tissues. Both methods use rabbits because of their similarity to human eyes in terms of the size and structure of the ocular surface. One week after removal of the nictitating membrane, the orbital superior LG was surgically removed under anesthesia, followed by removal of the palpebral superior LG, and finally removal of the inferior LG. Dacryoadenectomy induced severe DED, evidenced by a marked reduction in the tear break up time test and the Schirmer&#39;s tear test, and significantly increased tear osmolarity and rose bengal staining. Dacryoadenectomy-induced DED lasted at least eight weeks. There were no complications and animals tolerated the procedure well. The technique can be mastered relatively easily by those with adequate surgical experience and appreciation of the relevant rabbit anatomy. Since this model recapitulates the features of human aqueous-deficient DED, it is suitable for studies of ocular surface homeostasis, DED, and candidate therapeutics.

A novel approach is presented to induce chronic dry eye disease in rabbits by surgically removing all orbital lacrimal glands. This method, distinct from those previously reported, produces a stable, reproducible model of aqueous deficient dry eye well suited to study tear physiology and pathophysiology and ocular therapeutics.

토끼의 완전한 다크레오아데네절제술을 이용한 중증 안구건조증 모델 구축

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic ...

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

신경과학

면역조직화학 연구를 위한 토끼 눈 절제 및 냉동 절제술

Obtaining High-Quality Cryosections of Whole Rabbit Eye

This protocol describes how to obtain high-quality retinal cryosections in larger animals, such as rabbits. After enucleation, the eye is briefly immersed in the fixative. Then, the cornea and iris are removed and the eye is left overnight for additional fixation at 4 &#176;C. Following fixation, the lens is removed. The eye is then placed in a cryomold and filled with an embedding medium. By removing the lens, the embedding medium has better access to the vitreous and leads to better retinal stability. Importantly, the eye should be incubated in embedding medium overnight to allow complete infiltration throughout the vitreous. Following overnight incubation, the eye is frozen on dry ice and sectioned. Whole retinal sections may be obtained for use in immunohistochemistry. Standard staining protocols may be utilized to study the localization of antigens within the retinal tissue. Adherence to this protocol results in high-quality retinal cryosections that may be used in any experiment utilizing immunohistochemistry.

저자 스포트라이트: 토끼 모델에서 면역조직화학을 위한 망막 조직 처리 최적화

This protocol describes a reliable method for obtaining high-quality cryosections of whole rabbit eyes. It details rabbit eye dissection, fixation, embedding, and sectioning procedures, which may be easily adapted for use in any study utilizing immunohistochemistry in larger eyes.

Whole Rabbit Eye의 고품질 냉동 절개 획득 

This protocol describes how to obtain high-quality retinal cryosections in larger animals, such as rabbits. After enucleation, the eye is briefly immersed ...

안구 약의 약동학 연구에서 토끼 눈의 사용

요약

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살아있는 토끼 눈에 소설 Photoacoustic 현미경 및 광학 일관성 단층 촬영 듀얼 적임 Chorioretinal 이미징

공막 래빗 모델에 축 방향 근시의 예방 리보플라빈 및 자외선-A 방사선을 사용하여 교차 결합

토끼의 망막 수술에 대한 단계 프로토콜에 의해 단계

광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사를 사용하여 안구 약물 전달 시스템의 생체 내 측두 체 이미징

코카나발린A에 의해 유도된 수성 결핍 안구 건조증의 토끼 모델: 약물 효능 연구에 적용

토끼의 완전한 다크레오아데네절제술을 이용한 중증 안구건조증 모델 구축

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

Whole Rabbit Eye의 고품질 냉동 절개 획득

Whole Rabbit Eye의 고품질 냉동 절개 획득

Whole Rabbit Eye의 고품질 냉동 절개 획득