We thank Dr. Roger Erickson for his support and assistance with the preparation of the manuscript. This work was supported by the National Cancer Institute at the National Institutes of Health through grant numbers RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 and VA funded program project number 1P1 BX001604.

동물과 관련된 모든 절차에 대한 프로토콜 검토 및 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받아야한다. 관리 및 실험 동물의 사용을 위해 공식적으로 승인 된 절차를 따르십시오. 인트라 전립선 주입 오픈 복부 수술을 필요로하며, 동물은 수술 적절한 무균 기술은 전체 과정 동안 사용되는 수술 지정된 방 무균 환경에서 유지되어야한다. 주입을위한 세포의 1. 준비 주 : 연구 필요에 따라 임의의 전립선 암 세포주가 사용될 수있다. 세포주 공급자의 지침에 따라 배양한다. <ol><li> 안정적 반딧불 루시퍼 라제 유전자를 표현하는 PC3M 룩-C6 세포주 최소 필수 매체 (MEM)에서 배양 된 세포를 10 % 태아 소 혈청 (FBS), 1X 비 필수 아미노산이 보충 된, 1X Phleomycin D1 및 1mM의 피루브산 나트륨 . 인큐베이터 w에서 셀을 유지i 번째 37 ° C에서 95 % 공기 및 5 % CO 2의 가습 된 분위기. PC3M 룩-C6 세포는 UCSF의 핵심 시설에서 조달했다. </li><li> 트립신 처리하여 수확 세포. 인산염 완충 식염수 (PBS)로 한번 배양 접시를 씻으십시오. 세포가 분리되는 때까지 37 ° C에서 95 % 공기 및 5 % CO 2의 가습 된 분위기 인큐베이터에서 10cm 접시에 2 ml의 0.05 % 트립신을 첨가하고 3-5 분 동안 배양한다. <ol><li> 응집을 방지하기 위해, 타격 또는 세포 분리를 기다리는 동안 접시를 흔들어 세포를 선동하지 않습니다. 완전한 미디어 5ml에 세포를 수집하고 200 x g에서 5 분 동안 스핀 다운. 트립신을 제거하기 위해 PBS로 세포 펠렛을 씻으십시오. </li></ol></li><li> 은 트리 판 블루 배제 분석법에 의해 생균 열거. 0.4 %의 10 μL (중량 / V) 트리 판 블루 용액을 PBS에서 세포 현탁액 10 μL를 혼합한다. 혈구 계산 또는 챔버 슬라이드에 혼합물을 넣고 현미경으로 즉시 세포 계산 또는 셀 COU에서 챔버 슬라이드를 읽어nter. <ol><li> 10 μl의 배지에서 2.5 × 105 세포를 함유하는 세포 현탁액을 준비한다. 10 μl의 기저막과 같은 세포 외 기질 추출물과 세포 현탁액을 혼합하고 얼음에 세포를 배치합니다. 세포 현탁액에 루시페린 추가 (1 : 200 μL, 재고 30 ㎎ / ㎖ 농도) 마우스에 주입하기 전에. 참고 :이 다른 실험군 중 세포 주입의 일관성을 확인하기 위해 동물의 즉각적인 바이오 이미징을 할 수 있습니다. 세포 생존율은 박리 후에 급격히 감소 이후 트립신 처리 후, 바람직하게는 30 분 이내에 가능한 빨리 세포를 주입한다. </li></ol></li></ol> 외과 영역 2. 준비 <ol><li> 무균을 촉진 정돈, 소독 지역에서 수술을 수행합니다. </li><li> 수술 전 표백제 용액으로 카운터 / 실험실 벤치를 소독. 참고 : 알코올의 사용으로 인해 효과 (15 분)을 취할 필요가 긴 접촉 시간에 실망입니다. </li><li> 멸균 커튼을 사용하여흡수 패드 나 수건을 청소하고, 각각의 수술 세션 후 이러한 자료를 대체합니다. 사용하기 전에 모든 악기를 소독. 바람직한 방법은 증기 오토 클레이브 유리 비드 살균제, 산화 에틸렌 가스, 과산화수소 증기 멸균한다. </li><li> 수술 절차를 수행하기 위해 무균 청소 해부 현미경을 사용하거나 경험이 풍부한 연구자들은 현미경없이 수행 할 수 있습니다. </li></ol> 종양 세포의 주입 3 <ol><li> 남성 6~8주 된 면역을 Balb / C 또는 NOD / SCID 마우스를 사용합니다. 참고 : 종양의 성장과 전이의 느린 반응 속도를 갖는 경향이 작은 동물과 큰 동물에서 작동하는 것이 더 어렵다. </li><li> 동물 시설의 지시에 따라 미리 수술 통증 약물을 주입. 예를 들어, 0.1 ㎎ / ㎏ 체중의 투여 량으로 복강 내 부 프레 놀핀 사용할 수있다. </li><li> 산소와 웨스턴 오스트 레일 리아 1-3 %의 이소 플루 란과 함께 이소 플루 란 챔버로 배치하여 동물을 마취그것은 동물은 완전히 마취 될 때까지. 이 시점에서의 근육의 어떠한 토우 반사가 없다는 것을 보장한다. 전신 마취 중에 안구 건조증으로 인한 실명을 방지하기 위해 적절한 수의 안과 연고 윤활제를 사용합니다. 주 : 펜토 바르 비탈 나트륨을 위해, 연구자의 ​​바람직한 방법의 예에 의해 동물을 마취는 g 체중 당 0.05 ㎎을 복강 내 또는 케타민 / 크 실라 진 용액을 투여 (농도 : 17.16 ㎎ / ㎖) 65 밀리그램의 용량 / kg 체중 피하 사용됩니다. 이소 플루 란 흡입은 마취의 바람직한 방법이다. 눈 연고 부드럽게 각막에 마찰없이 적용되어야한다. </li><li> 이소 플루 란 챔버에서 동물을 제거하고 동물을 진행하기 전에 전체 마취 있는지 확인하기 위해 산소의 1 ~ 2 %의 이소 플루 란의 연속적인 흐름과 코 콘 장치에 배치합니다. <ol><li> 면도에 의해 쥐에서 머리를 제거하거나 절차를 시작하기 전에 헤어 크림을 사용합니다. 주 : 수술 중 멸균 가열 패드에서 마우스를 배치하는 것이 바람직 할 것이다. </li></ol></li><li> 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 포비돈 - 요오드 용액을 70 % 에탄올 면봉 다음에 W / W 10 %와 하복부를 청소합니다. </li><li> 미세 집게 한 쌍, 2mm 포피 선 위의 음경의 외​​피 위 약 1-2cm, 그리고 흉곽의 바닥 아래에 2 ~ 3 cm의 피부의 영역을 올립니다. </li><li> 제 메스로 피부를 통해 다음 시저 (도 1)와 근육층 통해 길이 정중선 절개 1cm합니다. </li><li> 체강에서 방광을 찾습니다. 그것은 절개 (그림 1) 바로 아래에있는 노란색 밝은 갈색 구형 기관이다. </li><li> 미세 겸자 파지하는 한 쌍의 블래 더와 음경 시스 향해 체강에서 하방 후 상방으로 들어 올려. 이 흰색 주머니 모양의 기관의 쌍과 명확하게 구별되는 두 개의 정낭에 노출됩니다. </li><li> 와면봉은 각 손에서 정낭 하나씩 구체화 한 체강 그들을 끌어들이 중간에 블래 더 (도 2)와 복부의 외면에 아래로 향하게 배치. </li><li> 두 지느러미 전립선 엽 명확하게 표시되도록 면봉을 사용하여 부드럽게, 음경 피복으로, 방광의 목 근처에 삽입 지점에 정낭을 뒤로 기울이십시오. 조직 손상 (그림 3)을 방지하기 위해 젖은 면봉을 사용합니다. </li><li> 주사기에 넣기 전에 마이크로 피펫을 가진 세포 현탁액을 교반한다. </li><li> 면봉 위치에 정낭을 배치하는 동안, 현미경 지느러미 전립선 엽 (그림 4)에 주사기 바늘을 삽입합니다. 수포 형성이 확인 될 때​​까지 천천히 세포 현탁액 20 μL를 주입. X 창 수포는 주사가 올바른지을 나타냅니다. </li><li> 와 주사 부위에 가볍게 침을 누릅니다 후퇴하는 동안몇 초 동안 면봉 길게는 누설을 방지합니다. </li><li> 조심스럽게 면봉과 정낭을 들어 올려 방광 다음에 의해 다시 체강 하나에 삽입. 이 절차를 수행하는 동안 &#39;달리기&#39;내부 장기를 피하십시오. </li><li> 체강 내로 다시 장기를 배치 한 후, 비 흡수성 4-0 나일론 봉합사와 외과 피부 폐색 하였다 흡수성 장선 4-0 크롬 봉합사와 중단 패턴 제 근육층 봉합사. 피부는 완전히 절개를 닫 함께 뽑아 외과 클램프로 닫을 수 있습니다. 참고 : 마우스는 봉합과 함께 추천 긁힘 때문에, 상처의 개방을 다시 조직 접착제의 사용 될 수 있습니다 자신의 상처에 무는 습관이있다. 이미지 동물은 즉시 모든 실험군 중 동일한 생물 발광 강도가 있음을 확신합니다. </li><li> 새장을 청소하고, 온난화 램프 또는 열에서 그들을 유지하기 위해 동물을 반환패드를 보내고. 그들이 완전히 마취에서 회복하고 흉골 드러 누움을 유지 지속적 때까지 동물을 모니터링합니다. </li></ol> 동물의 4. 모니터링 <ol><li> 기관 프로토콜에 따라, 실험이 종료 될 때까지 주기적으로 동물을 모니터한다. 수술 금속 클립을 사용하는 경우, 1 ~ 2 주 후 제거합니다. 실험 기간은 특정 연구의 필요성에 따라 달라집니다. 주 :이 실험은 마우스에서 전립선 암세포 이식의 성공 확립을 확인 21 일간 실시 하였다. </li><li> 동물 시설의 지침에 따라 진통제를 관리 할 수​​ 있습니다. 필요에 따라 예를 들어 0.1 ㎎ / ㎏ 체중의 투여 량으로 복강 내 부 프레 놀핀 6 시간 추가 투여 후 제 복용량 절차시​​ 매 8-12 시간을 사용할 수있다. </li><li> 동물 체중, 음식 소비, 피부 색깔과 질감 활성 및 소변 및 배변 빈도를 모니터한다. 동물에게 IMMED를 안락사iately 15 %보다 더 큰 체중의 상당한 손실이있는 경우. <ol><li> 안락사 무의식 완전한 마취제가 발생되도록 CO 2 천천히 챔버를 입력 할 수 있도록, 상기 챔버 또는 케이지 볼륨 / 분 10-30 %의 변위 유량 미 혼잡 케이지에 가압 된 탱크로부터 CO 2 전달 사망하기 전에. </li><li> 호흡 정지 후 1 분 이상이 CO 흐름을 유지하고 죽음 물리적 방법을 수행하기 전에 발생되도록 충분한 시간 동안 상기 챔버에 동물을 떠난다. </li><li> 수행 잘린, 자궁 경부 전위 또는 다른 IACUC는 화학적으로 동물을 안락사 후 물리적 방법을 승인했다. 주 : 상당히 감소 체중 종종 혼수 상태를 나타낸다. 종양 함유 동물 실험이 끝날 때까지 종양의 존재를 제외하고 건강하게해야한다. 안락사는 안락사에 AVMA 지침과 일치해야하고 liste해야합니다승인 된 IACUC 프로토콜 라. </li></ol></li></ol> 동물의 5. 비 침습적 바이오 이미징 <ol><li> 주간 암세포, 종양 성장 및 원격 전이의 정착을 추적하기 위해 비 침습성 영상화 기술을 사용하여 동물을 모니터한다. 참고 : 등 GFP 이미징, 루시 페라 이미징, X 선 또는 3D 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (UCT)와 같은 이미징 양식이 특정 연구에 따라 사용할 수는 12-15이 필요합니다. </li></ol>

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저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

이 원고는 인간의 소성을 전립선 암 이종 이식 마우스 모델을 설정하기위한 상세한 절차를 설명합니다. 이 모델은 면역 쥐의 등 전립선 로브에 인간 전립선 암 세포주 PC3M 룩-C6의 직접 주입에 의해 수립되었다. 종양은 실험의 과정을 통해 발전 할 수 있었다. 종양 성장 실험 동안에 비 침습적 생물 발광 이미징 시스템에 의해 매주 모니터링 하였다. 이종 이식 종양 모델을 확?...

전립선 암은 옆에있는 폐와 기관지 (28 %) 1 암, 미국 남성 중 암 사망 (9 %)의 두 번째 가장 일반적인 원인이다. 최근의 데이터에 따르면, 220, 800 새로 진단 전립선 암의 경우 27, 540 사망 2015 1에서 발생할 것으로 예상된다. 고급 전이성 질환 즉 동안 초기 전립선 암 오년 상대 생존율은&gt; 99 %이고 28 % 1. 고급 전이성 질환의 치료에 대한 주요 과제는, 특히 전립선 암 빈번한 사이트 뼈에 다른 장기로 전이이 질병의 경향을 기초 분자 메커니즘에 대한 이해의 부족이다. 따라서, 진보 된 전이성 질환 2,3-으로 진행에 대한 효과적인 치료법을 개발하기 위하여 이러한 전립선 종양의 분자 화장 공부 분명한 필요성이 존재한다. 전립선은 전시 HIG를 종양이진행에 잘 정의 된 경로가없는 시간 생물 학적 이질성. 전이는 종종 종양의 침윤 4없이 이전의 표시와 함께 발생합니다. 이 이질성은 임상 적 전립선 암의 분자 다양성에 기인한다. 이러한 치명적인 종양의 분자 메이크업을 이해하는 것은이 질병에 대한 더 나은 진단 및 치료 전략을 설계하는 열쇠입니다. 따라서, 전립선 암 연구 현재 이해 및 전이를 방지하는데 초점을 맞추고있다. 전임상 생체 내 마우스 모델 고급 전이성 전립선 암의 진행의 분자 메커니즘을 이해하기 위해 다양한 옵션을 제공한다. 또한, 이러한 모델은 본 질병에 대한 새로운 치료 전략의 임상 평가에 중요하다. 가장 흔히 사용되는 동물 모델은 트랜스 제닉 마우스 모델의 꼬리 정맥 주사, 인트라 심장 이식 인간 소성을 마우스 모델을 포함한다. 형질 전환 연구는 시간 consumi 있습니다NG 인간의 그것과 생쥐의 전립선 암 발생의 상관 관계 변화 (11)을 보여 주었다. 자발적 전이 마우스 모델에서, 세포 순환에 직접 주입되고, 이들이 신속한 처리 시간을 가질지라도, 이들은 차 종양 또는 전이성 캐스케이드 (5)의 초기 단계를 연구하기 위해 사용될 수 없다. 동소 이종 이식 모델은 뼈 전이성 병변 전립선 암 전이 공통 사이트 개발의 한계를 가지고있다. 그럼에도 불구하고, 인간의 동소 전립선 암 이종 이식 마우스 모델 잘 특성화 널리 일차 종양 발생, 종양 및 장기 미세 치료 개입 6 전이성 질환 실험 약물 사용의 초기 위상 사이의 크로스 토크 (cross-talk)의 분자 사건을 연구하는 데 사용되는 , 7,8-11.

<table><tbody><tr><td>PC3 prostate cancer cell line&amp;nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1435</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium (MEM)&amp;nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>11095-080</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>Invitrogen,Life Technology</td><td>R250-01</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin&amp;nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>25300-54</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&amp;nbsp;</td><td>Xenogen-Caliper</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insulin Syringes (300 &amp;micro;l, 28.5 g)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309300</td><td></td></tr><tr><td>Mice</td><td>Charles River Laboratories, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Swabs</td><td>MEDEquip Depot</td><td>326895 BD</td><td></td></tr><tr><td>PVP Iodine Prep Pad</td><td>MEDEquip Depot</td><td>C12400PDI</td><td></td></tr><tr><td>Surgical CatGut Chromic Suture</td><td>Demetech</td><td>CC224017F0P</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr></tbody></table>

pre-clinical orthotopic murine model of human prostate cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

후방 전립선 로브로 PC3M 룩-C6 세포의 동소 이식 이후, 생쥐는 주간의 실험 과정 (- B도 5a)를 통해 세포의 정착 종양의 성장을 모니터링하는 살아있는 동물의 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 영상화 하였다. 생물 발광 신호의 정량화는 PC3M 룩-C6 세포가 성공적으로 전립선 로브를 식민지 것으로 나타났다. 증가 생물 발광 실험 (도 5b)에</str...

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Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

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Medicine

14.2K 조회수.  VA Medical Center and UCSF. Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

비디오: Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified to secrete human Prostate Specific Antigen (PSA), and the procedure for the confirmation of tumor implantation. In brief, mice are anesthetized using injectable drugs and are made to lay in the dorsal position. Urine is vacated from the bladder and 50 &#181;L of poly-L-lysine (PLL) is slowly instilled at a rate of 10 &#181;L/20 s using a 24 G IV catheter. It is left in the bladder for 20 min by stoppering the catheter. The catheter is removed and PLL is vacated by gentle pressure on the bladder. This is followed by instillation of the murine bladder cancer cell line (1 x 105 cells/50 &#181;L) at a rate of 10 &#181;L/20 s. The catheter is stoppered to prevent premature evacuation. After 1 h, the mice are revived with a reversal drug, and the bladder is vacated. The slow instillation rate is important, as it reduces vesico-ureteral reflux, which can cause tumors to occur in the upper urinary tract and in the kidneys. The cell line should be well re-suspended to reduce clumping of cells, as this can lead to uneven tumor sizes after implantation.
This technique induces tumors with high efficiency. Tumor growth is monitored by urinary PSA secretion. PSA marker monitoring is more reliable than ultrasound or fluorescence imaging for the detection of the presence of tumors in the bladder. Tumors in mice generally reach a maximum size that negatively impacts health by about 3 - 4 weeks if left untreated. By monitoring tumor growth, it is possible to differentiate mice that were cured from those that were not successfully implanted with tumors. With only end-point analysis, the latter may be mistakenly assumed to have been cured by therapy.

This protocol describes the generation of murine orthotopic bladder tumors in female C57BL/6J mice and the monitoring of tumor growth.

쥐 동소 이식 방광 종양 모델 및 종양 탐지 시스템

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

연구

암 연구학

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

발광 및 형광 Orthotopic Syngeneic Murine 모델 Androgen 종속 및 거세 내성 전립선 암

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) for prostate cancer are hampered by tumor heterogeneity and its complex microevolution dynamics. Traditional prostate cancer mouse models include, amongst others, germline and conditional knockouts, transgenic expression of oncogenes, and xenograft models. Generation of de novo mutations in these models is complex, time-consuming, and costly. In addition, most of traditional models target the majority of the prostate epithelium, whereas human prostate cancer is well known to evolve as an isolated event in only a small subset of cells. Valuable models need to simulate not only prostate cancer initiation, but also progression to advanced disease.
Here we describe a method to target a few cells in the prostate epithelium by transducing cells by viral particles. The delivery of an engineered virus to the murine prostate allows alteration of gene expression in the prostate epithelia. Virus type and quantity will hereby define the number of targeted cells for gene alteration by transducing a few cells for cancer initiation and many cells for gene therapy. Through surgery-based injection in the anterior lobe, distal from the urinary track, the tumor in this model can expand without impairing the urinary function of the animal. Furthermore, by targeting only a subset of prostate epithelial cells the technique enables clonal expansion of the tumor, and therefore mimics human tumor initiation, progression, as well as invasion through the basal membrane.
This novel technique provides a powerful prostate cancer model with improved physiological relevance. Animal suffering is limited, and since no additional breeding is required, overall animal count is reduced. At the same time, analysis of new candidate genes and pathways is accelerated, which in turn is more cost efficient.

This protocol describes a newly established method for virus delivery to the murine prostate. Using either CRISPR/Cas9 technology, gene overexpression, or Cre recombinase delivery, the technique allows orthotopic alteration of gene expression and implements a novel mouse model for prostate cancer.

CRISPR의 바이러스 배달 Murine 전립선 유전자 변경에 대 한 가이드

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate cancer (PCa). Understanding the anatomy and histology of the mouse prostate is important for the efficient use and proper characterization of such animal models. The mouse prostate has four distinct pairs of lobes, each with their own characteristics. This article demonstrates the proper method of dissection and identification of mouse prostate lobes for disease analysis. Post-dissection, the prostate cells can be further cultured in vitro for mechanistic understanding. Since mouse prostate primary cells tend to lose their normal characteristics when cultured in vitro, we outline here a method for isolating the cells and growing them as 3D spheroid cultures, which is effective for preserving the physiological characteristics of the cells. These 3D cultures can be used for analyzing cell morphology and behavior in near-physiological conditions, investigating altered levels and localizations of key proteins and pathways involved in the development and progression of a disease, and looking at responses to drug treatments.

Genetically engineered mice are useful models for investigating prostate cancer mechanisms. Here we present a protocol to identify and dissect prostate lobes from a mouse urogenital system, differentiate them based on histology, and isolate and culture the primary prostate cells in vitro as spheroids for downstream analyses.

식별, 조직학 특성화 및 체 외 3D 회전 타원 체 문화 모델에 대 한 마우스 전립선 돌출부의 해 부

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

작은 분자 CLT1 펩타이드 표적 조영제와 전립선 암의 MR 분자 영상

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

의학

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

New therapies for two common prostate diseases, prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend critically on experiments evaluating their hormonal regulation. Sex steroid hormones (notably androgens and estrogens) are important in PrCa and BPH; we probe their respective roles in inducing prostate growth and carcinogenesis in mice with experiments using compressed hormone pellets. Hormone and/or drug pellets are easily manufactured with a pellet press, and surgically implanted into the subcutaneous tissue of the male mouse host. We also describe a protocol for the evaluation of hormonal carcinogenesis by combining subcutaneous hormone pellet implantation with xenografting of prostate cell recombinants under the renal capsule of immunocompromised mice. Moreover, subcutaneous hormone pellet implantation, in combination with renal capsule xenografting of BPH tissue, is useful to better understand hormonal regulation of benign prostate growth, and to test new therapies targeting sex steroid hormone pathways.

We describe the manufacture of compressed hormone pellets, as well as subcutaneous surgical implantation into mice. This strategy can be combined with the growth of cell and tissue xenografts under the renal capsule of athymic nude mice to evaluate hormonal carcinogenesis and regulation of benign prostate growth.

전립선 발암 및 양성 전립선 비대증의 평가를위한 신장 캡슐 Xenografting 및 피하 펠렛 주입

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is essential to understand the process and related mechanisms of prostate cancer bone metastasis for developing new therapeutics. For this, an animal model of bone metastasis is an essential tool. Here, we report detailed procedures to generate a bone metastasis mouse model via intra-cardiac injection of prostate cancer cells. A bioluminescence imaging system can determine whether prostate cancer cells have been accurately injected into the heart and monitor cancer cell metastasis since it has great advantages in monitoring metastatic lesion development. This model replicates the natural development of disseminated cancer cells to form micro-metastases in the bone and imitates the pathological process of prostate cancer bone metastasis. It provides an effective tool for further exploration of the molecular mechanisms and the in vivo therapeutic effects of this disease.

Here, we present a protocol for the intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to generate a mouse model with bone metastasis lesions.

인간 전립선암 세포의 심장내 주사를 통해 뼈 전이 이종이식 마우스 모델 생성

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, biologic studies, and personalized medicine strategies. Circulating tumor cells (CTC) play a critical role in tumor metastasis and have been isolated from patients with several tumor types. Recently, CTCs have been used to generate PDX experimental models of breast and prostate cancer. This manuscript details the method for the generation of prostate cancer PDX models from CTCs developed by our group. Advantages of this method over conventional PDX models include independence from surgical sample collection and generating experimental models at various disease stages. Density gradient centrifugation followed by red blood cell lysis and flow cytometry depletion of CD45 positive mononuclear cells is used to enrich CTCs from peripheral blood samples collected from patients with metastatic disease. The CTCs are then injected into immunocompromised mice; subsequently generated xenografts can be used for functional studies or harvested for molecular characterization. The primary limitation of this method is the negative selection method used for CTC enrichment. Despite this limitation, the generation of PDX models from CTCs provides a novel experimental model to be applied to prostate cancer research.

This manuscript details a method used to generate prostate cancer patient derived xenografts (PDXs) from circulating tumor cells (CTCs). The generation of PDX models from CTCs provides an alternative experimental model to study prostate cancer; the most commonly diagnosed tumor and a frequent cause of death from cancer in men.

전립선 암 환자의 발생은 종양 세포를 순환에서 이종 이식 모델을 파생

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse. We also depict representative results produced by these protocols. Finally, we discuss the advantages and utilization of these protocols.

쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...