We thank the Western University of Health Sciences for the Intramural Grant.

아래에서 설명하는 프로토콜은지도와 웨스턴 대학의 동물 관리 및 사용위원회의 승인하에 실행된다. 모든 실험은 모든 관련 지침, 규정 및 규제 기관 준수 수행됩니다. 1. 세포 배양 <ol><li> 전체 매체의 제조 <ol><li> 클래스 II 생물학적 안전 캐비넷을 사용 무균 RPMI 배지 500㎖의 병에 소 태아 혈청 (FBS) 및 페니실린 스트렙토 마이신 (P / S)을 첨가하여 완전 배지를 준비한다. 소용돌이에 의해 부드럽게 섞는다. 각 보충제의 최종 농도는 10 % FBS와 1 % P / S (V / V). 예를 들어, 56 ML의 FBS 6 ML의 P / S와 미디어 500㎖의 보충. </li><li> 37 ° C에서 물을 욕조에 완전 배지를 놓습니다. </li></ol></li><li> 해동 및 전파 세포 <ol><li> 액체 질소에서 PANC-1 GFP 세포를 검색합니다. 37 ° C에서 물을 욕조에 부드러운 교반하여 병을 해동. 노트:(- 3 분 약 2) 해동은 신속해야한다. </li><li> 라벨 T-75 플라스크 (a) 셀 라인 명, (B)의 통로 번호, (c) 기간, 및 (d) 연구자의 글자와 함께 사용될 수있다. </li><li> 바이오 안전성 캐비닛에 70 % 에탄올 및 전송 유리 병으로 병을 닦습니다. </li><li> 세포를 전파 15 ML 원뿔 튜브에 완전한 매체의 9.0 ml에 추가합니다. 1.0 ml의 피펫을 사용하여 조심스럽게 세포 현탁액을 전송하고 완전 배지 9 mL에이를 중지. </li><li> 실온에서 8 분 동안 125 XG에 원심 분리기. 바이오 안전성 캐비닛에 원뿔 병을 전송하고 펠렛을 방해하지 않고 뜨는을 대기음. </li><li> 부드럽게 상하 현탁액을 피펫 팅하여 신선한 완전 배지 10ml에 펠릿을 정지. </li><li> 혈구와 세포를 세어 2.1 × 10 6 세포 / 플라스크의 밀도로 T-75 플라스크에서 그들을 판. 37 ° C에서 인큐베이터에서 플라스크를 놓고 5 % CO 2. </li><li> 눈으로하고 현미경 매일 세포를 모니터링합니다. 독감의 경우갱신이 필요한 ID는, 무균 플라스크에서 완전한 성장 매체를 대기음 및 폐기합니다. 신선한 완전 배지의 동일한 볼륨을 추가합니다. </li></ol></li><li> 세포를 전파 <ol><li> 무균 플라스크에서 매체를 제거합니다. 세포를 씻어 버리고 둘 베코의 인산 완충 식염수 (DPBS)의 5 ML을 추가합니다. </li><li> 0.25 % 트립신 3 ㎖를 첨가하여 플라스크로부터 세포를 분리. 5 내지 10 분 동안 37 ° C에서 트립신 및 5 % CO 2를 함유하는 플라스크를 인큐베이션. </li><li> 현미경 (10X 배율)에서 세포를 관찰하고 그들이 라운드 빠질 수 있습니다 확인합니다. </li><li> 완전 배지의 동일한 볼륨을 추가하여 트립신을 중화하고 부드럽게 피펫 팅 아래로 대단히 짧은 시간을 휴식. </li><li> 혈구를 사용하여 세포를 세어 1.2.7에서 언급 한 세포 밀도로 새로운 플라스크로 적절한 세포 현탁액 부피를 전달; 최종 부피 플라스크 당 10 ml의 그래서 충분히 신선한 매체를 추가 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 셀 Suspens주입을위한 이온 준비 참고 : 기저막 매트릭스, 높은 농도, 실온에서 응고하기 때문에, 얼음에 모든 재료를 보관하십시오. 하룻밤 냉장고에있는 모든 멸균 피펫 팁 및 튜브를 놓고 정지에서 작업하는 동안 얼음에 보관하십시오. <ol><li> 얼음에 어떤 첨가물없이 RPMI 미디어의 병을 유지합니다. 제조업체의 지침에 따라 기저막 매트릭스, 고농도, 해동. 바람직하게는, 작은 유리 병에 나누어 여러 동결 해동 사이클 (10)을 방지 할 수 있습니다. </li><li> 대기음 모든 플라스크에서 미디어 및 DPBS 5 ㎖로 씻어냅니다. 1.3.4 단계로까지 이전 섹션의 모든 단계를 반복합니다. </li><li> 실온에서 8 분 동안 125 XG에 15 ML 원뿔 튜브와 원심 분리기에 내용을 전송합니다. 바이오 안전성 캐비닛에 원뿔 유리 병을 전송하고 DPBS 10 ㎖를 사용하여 펠렛을 다시 일시 중지합니다. </li><li> 조심스럽게 펠렛을 헤어 위아래 정지를 피펫. 혈구를 사용하여 세포를 계산합니다. </li><li> 의에 설명을 다시 원심 분리기로1.4.3 TEP. 대기음 상등액과 세포의 수에 따라, 50 μL의 부피에 3 × 106 세포를 수득하기 위해 적절한 희석제를 추가한다. 1 (v / v)의 비율 희석제는 한 혈청이없는 배지 고농도 지하 매트릭스 멤브레인의 혼합물 일 것이다. </li><li> 부드럽게 정지 와동과 항상 얼음에 보관하십시오. 서스펜션은 이제 주입을위한 준비가되어 있습니다. </li></ol></li><li> 외과 주입 참고 : 모든 수술 용 재료 및기구는 멸균 있는지 확인합니다. 항상 무균 기술을 연습 할 수 있습니다. <ol><li> 테이블에 가열 패드를 놓고 멸균 드레이프로 커버. 마취 기계를 설정하고 모든 소모품은 손이 닿는 내에 확인합니다. </li><li> 마취 마스크에 동물의 주둥이를 놓고 산소 1 L / 분, 2.5 %의 이소 플루 란으로 마취를 설정합니다. </li><li> 조심스럽게 요오드와 동물의 측면 스크럽, 70 % 에탄올로 씻어냅니다. 세 번 반복합니다. </li><li> 확인하려면동물 완전히 뒷 발을​​ 곤란하게하여 마취됩니다. 응답이 관찰되지 않은 경우 동물은 수술을 위해 완전히 마취와 준비가되어 있습니다. 그러나 동물이 움찔 경우, 기화기에 충분한 마취가 확인하고 동물 마취에서 완전히 이동하는 데 더 많은 시간을 허용합니다. </li><li> 부하는 약 18 G 바늘을 1.0 ml의 TB 주사기에 세포 현탁액 200 ㎕를가 (이전 냉각). 27 G 바늘과 바늘을 교체하고 사용할 준비가 될 때까지 얼음으로 돌아갑니다. </li><li> 비장의 일반 영역 (복부의 왼쪽 상단 사분면)를 찾아 사용하는 집게 해당 지역의 상단에 피부를 꼬집어. 수술 가위는 약 1.0 cm의 절개를 사용하여 포켓을 만들 수 있습니다. 마찬가지로, 비장 위에 평활근 핀치 및 복강에 접근하기 위해 실수로. </li><li> 조심스럽게 비장의 꼬리 끝을 잡고 몸 밖으로 당깁니다. 췌장은 비장에 첨부됩니다. 습식 성을 이용하여 췌장 확산erile Q-팁은 췌장의 꼬리를 찾아. </li><li> 췌장의 꼬리에 50 μL 주입을 제공, 10 초 안에 바늘을두고 천천히 췌장에서 바늘을 돌립니다. 성공적인 주입은 누수없이 피상적 거품과 같이 표시됩니다. </li><li> 복강에 췌장과 비장을 돌려줍니다. 먼저 근육을 넣고 다음 개별적으로 피부를 묶습니다. 절개를 닫 6-0 봉합 또는 스테이플을 사용합니다. 관리] 케토 프로 펜 피하 (SC) (5 ㎎ / ㎏) 24 시간 이상 동물의 고통을 방지 할 수 있습니다. (- 0.1 ㎎ / ㎏ 0.05) 36 시간에 걸쳐 매 12 시간 또는 프레 노르 핀 사우스 캐롤라이나를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 마취에서 동물을 복구하고 케이지로 돌아갑니다. 또한 통증 모니터링 할 수 있습니다. 수술 - 동물 (선제 또는 이전에)시의 통증 완화와 함께 제공해야합니다. 추가 통증 완화가에서 정하는 IACCUC 프로토콜에 따라 고통을 경험 동물에 제공해야합니다수의사 또는 지명을 돌봐. </li></ol></li><li> 생체 내 이미징에서 주 : 촬상 어두운 챔버 GFP 영상에 적절한 필터를 구비 한 상용 촬상 시스템을 이용하여 수행 하였다. (-; 513-557 nm의 방출 495 nm의 여기 455) 이미지 획득은 CCD 카메라와 교체 여기 / 발광 렌즈로 이루어진 광학 시스템을 사용하여 수행 하였다. 밝은 필드 이미지는 각 시점에 대한 1 × 1 비닝 (binning)에서 필터없이 촬영했다. GFP의 여자는 크세논 멀티 스펙트럼 광원을 이용했다. 동물은 이미징 시스템의 어두운 챔버로 통합 된 가스 매니 폴드 마취로 마취 기계를 연결하여 촬영 과정에서 마취를 유지 하였다. <ol><li> 1.5.2에 설명 된대로 동물을 마취. 마취 마스크는 이미징 동안 마취하에 동물을 유지하기 위해 상용 촬상 시스템의 어두운 챔버의 내부에방법. </li><li> 올바른 여기 및 방출 필터를 설정합니다. </li><li> 단지 백색광을 사용하여 초기 화상을 획득함으로써 시작한다. 이미징 세션에 걸쳐 동물의 같은 위치를 유지하고 두 번째 이미지를 촬영하기 위해 GFP 필터로 전환합니다. </li><li> 최선의 결과는 두 이미지를 중첩. 형광 영역과 강도에 대한 이미지를 분석합니다. </li></ol></li></ol>

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	<li>Smyth, E., Cunningham, D., Kasper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Harrison's Principles of Internal Medicine. , (2015).</li><li>Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+borderline+resectable+pancreatic+cancer.">Management of borderline resectable pancreatic cancer.</a> World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).</li><li>De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+pancreatic+cancer.">Diagnosis and management of pancreatic cancer.</a> Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).</li><li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+mouse+cancer+models.">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7, 645-658 (2007).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multiple+uses+of+fluorescent+proteins+to+visualize+cancer+in+vivo.">The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo.</a> Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).</li><li>Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+orthotopic+pancreatic+cancer+mouse+model:+cells+suspended+and+injected+in+Matrigel.">Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel.</a> World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).</li><li>Arranz, A., Ripoll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+optical+imaging+for+pharmacological+studies.">Advances in optical imaging for pharmacological studies.</a> Front Pharmacol. 6, 189 (2015).</li><li>Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+serial+selection+of+human+pancreatic+cancer+cells+in+orthotopic+mouse+models+produces+high+metastatic+variants+irrespective+of+Kras+status.">In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status.</a> J Surg Res. 184, 290-298 (2013).</li><li>Kim, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).</li><li>Katz, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+efficacy+of+adjuvant+cytosine-analogue+CS-682+in+a+fluorescent+orthotopic+model+of+human+pancreatic+cancer.">Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer.</a> Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).</li><li>Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model.">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).</li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

따라서 우리는 생체 내 형광 이미징 (그림 1) 몸 전체를 사용하여 종양 성장의 비 침습적 모니터링을 허용, GFP를 표현 췌장암의 소성을 쥐 모델을 설명합니다. 이 기술은 실시간으로 종양 발생을 모니터링있게 해준다 (도 3); 이 연구팀은 췌장암에 대한 새로운 제제의 치료 효과를 연구하기위한 중요한 도구가 될 수 있습니다. 이 모델의 또 다른 중요한 측면은...

췌장암은 다른 암에 비해 빈도 증가로 진단하고 미국에서 암 관련 사망의 4 번째 주요 원인이다. 진단시에서 환자의 90 % 이상이 5 년 이내에 1,2- 다이. 현재 외과 적 종양 제거 췌장암 유일한 치료법이지만, 환자의 20 % 이하로 인해 질병이 상당히 진행되고 3,4 전이있다 진단시 주로 수술을받을 수있다. 특정 증상의 부족은 췌장암에게 자동 질병을 만든다; 증상 중 일부는 복부 통증, 허리 통증, 식욕 부진, 황달과 구토의 손실을 포함한다; 이는 쉽게 일반적인 소화기 질환 (4)로 해석 될 수있다. 이 때문에, 췌장 암의 진단 및 치료에 도움이 새로운 약물 학적 도구를 개발하는 것이 중요하다. 동물 모델의 사용은 pancre의 생물학을 이해하기 위해 우리가 할 수 있습니다ATIC 암과 인간이 지식을 적용에 대한 통찰력을 제공한다. 종양이 기원 (5)의 장기 성장 때문에 췌장암의 이종 이식 동 소성 모델은 현실이다. 세포주 또는 종양 단편을 피하 주입 이소성 모델과 달리 소성을 모델링 주변 6 종양 미세 환경을 모방하고 종양 세포의 상호 작용의 오락을 허용한다. 여기에 설명 된 이종 이식 모델은 유전 녹색 형광 단백질 (GFP)을 발현하도록 유전자 조작 된 인간 췌장암 세포주 PANC-1 GFP에서 종양을 유도한다. GFP 검출은 비파괴 이미징 및 종양의 성장 및 전이 (7)의 모니터링을 가능하게한다. 종양 발생 자발적 빠르게 발생하며, 밀접 인간 췌장암 환자 (8)의 일차 종양의 것을 닮았다. 동소 이식 모델 동안 치료제에 반응하여 약효의보다 정확한 예측을 제공하는종양 미세 환경을 흉내 낸. 전술 한 바와 같이, 이러한 동물 모델은 실시간 종양 성장 및 전이의 형광 검출 할 수있다. 형광 검출 발광에 비해 더 직접적인 / 라이브 영상 수 있습니다. 형광 발광은 짧은 파장의 다른 광에 의해 여기 한 결과이고; 발광에 반해, 발광은 화학 반응의 결과와 강한 발광 구를 수 없다. 또한, 생체 내 형광 이미징 몸 전체 동물에 해가되지 않으며 연구자들은 치료 적 치료에 반응 시간에 따른 종양의 성장을 모니터링 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>RPMI media 1640</td><td>Caisson Labs</td><td>RPL03-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10437-077</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel HC basement membrane, high concentration</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>SutureVet PGA 6-0 PGA</td><td>Henry Schein</td><td>39010</td><td></td></tr><tr><td>Alcare or Foamed Antiseptic Handrub</td><td>Steris</td><td>639680</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dubelcco&#039;s Phosphate-Buffered saline)&amp;nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>21300025</td><td></td></tr><tr><td>TB Syringe 27 G 1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Blutler Schein</td><td>50562</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors, 5.5&quot; straight mayo&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein</td><td>22-1600</td><td></td></tr><tr><td>PANC-1 GFP cell line&amp;nbsp;</td><td>Anticancer, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small Animal Imaging System: iBox Scientia</td><td>UVP, LLC. Upland, CA.</td><td></td><td>Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals</td></tr></tbody></table>

fluorescent orthotopic mouse model of pancreatic cancer

췌장암은 생존 지난 수십 년에 실질적으로 개선되지 않은의 암 중 하나 남아있다. 만 진단 된 환자의 7 % 5 년 이상 살아남을 것입니다. 이해 췌장 종양 미세 환경을 모방하기 위해, 우리는 실시간 종양 진행의 비 침습성 영상화를 허용 췌장암 동소 뮤린 모델을 이용했다. 녹색 형광 단백질 (PANC-1 GFP)을 발현 췌장암 세포 (예, 마트 리겔 HC), 혈청이없는 배지로하고이 개복술을 통해 췌장의 꼬리 주입 기저막 매트릭스 높은 농도로 현탁시켰다. 실온에 도달하면 고농도 기저막 매트릭스에서 세포 현탁액은 겔상 물질된다; 이 주사 부위에서의 밀봉을 만들고 셀 누설 방지 췌장과 접촉 할 때 따라서 겔화. 다른 장기에 종양의 성장과 전이를 실시간으로 모니터링된다형광을 이용하여 동물. 이 GFP의 여기 및 방출에 대한 적절한 필터를 사용하는 것이 중요합니다. 연구자들이 쉽게 누드 마우스의 절차를 복제 할 수 있도록 소성을 주입하는 단계는이 문서에 자세히 설명되어 있습니다. 이 프로토콜의 주요 단계는 생체 이미징 세포 현탁액의 제조 외과 이식 및 전신 형광이다. 이 동 소성 모델은 기본 및 전이성 종양에 대한 새로운 치료제의 효능을 조사하기 위해 설계되었습니다.

이 방법은 주사, 설치류 적절한 마취 개복술을 통해 세포 현탁액을 전달하기위한 세포 현탁액의 제조에 초점을 형광 인간 췌장암 세포 수술 동 소성 이식을 설명 형광 생체 작은 동물 이미징 용도. 이 3 주 사이에 녹색 형광 신호 (GFP 신호) 후 주입의 검출은, 현상 췌장암 종양 (그림 1)의 존재를 확인하기 위해 연구자에게 시각적 큐를 제공한다. (1)?...

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Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

16.6K 조회수.  Western University of Health Sciences. A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here. 

비디오: Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

연구

암 연구학

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

췌장암의 진행 발광 동소 모델

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

의학

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, immune cells, vessels, nerves, and extracellular matrix components. Over the years, different mouse models of PDAC have been developed to address the challenges posed by its progression, metastatic potential, and phenotypic heterogeneity. Immunocompetent mouse orthotopic allografts of PDAC have shown good promise owing to their fast and reproducible tumor progression in comparison to genetically engineered mouse models. Moreover, combined with their ability to mimic the biological features observed in autochthonous PDAC, cell line-based orthotopic allograft mouse models enable large-scale in vivo experiments. Thus, these models are widely used in preclinical studies for rapid genotype-phenotype and drug-response analyses. The aim of this protocol is to provide a reproducible and robust approach to successfully inject primary mouse PDAC cell cultures into the pancreas of syngeneic recipient mice. In addition to the technical details, important information is given that must be considered before performing these experiments.

Syngeneic mouse orthotopic allografts of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) recapitulate the biology, phenotypes, and therapeutic responses of disease subtypes. Owing to their fast, reproducible tumor progression, they are widely used in preclinical studies. Here, we show common practices to generate these models, injecting syngeneic murine PDAC cultures into the pancreas.

췌장암을 모델링하기 위한 Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.

동소 이식 췌장 암 마우스 모델의 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

<meta charset="utf8"></head><body>췌장암 모델에서 종양 침투 림프구를 사용한 입양 요법

Flow Cytometry-Based Isolation and Therapeutic Evaluation of Tumor-Infiltrating Lymphocytes in a Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer is an aggressive malignancy with a dismal prognosis and limited therapeutic options. Adoptive cell therapy, which involves isolating and activating a patient&#39;s own immune cells, such as tumor-infiltrating lymphocytes (TILs), before re-infusing them, represents a promising experimental approach. However, techniques for adoptive cell transfer in preclinical pancreatic cancer models are not well established. Here, we describe a detailed protocol for adoptive cell therapy using TILs from a syngeneic pancreatic cancer mouse model. The procedure involves implanting live or irradiated mouse pancreatic cancer cells in fluorescence-labeled reporter mice to initiate immune cell influx, then isolating lymphocytes from primary tumors via flow cytometry sorting and/or activating and expanding tumor-reactive T cells ex vivo, and adoptively transferring these activated T cells intraperitoneally into tumor-bearing mice, followed by interleukin-2 administration.&#160;Bioluminescent tumor imaging allows for longitudinal monitoring of orthotopic tumor growth and response to therapy, especially evaluating the tumor-specific cytotoxic effects. This approach recapitulates the logistics involved in developing adoptive cell transfer therapies for pancreatic cancer patients. The results demonstrate enhanced antitumor efficacy of adoptively transferred tumor-reactive T cells compared to irrelevant lymphocyte controls. This versatile methodology enables the in vivo study of adoptive immunotherapy in pancreatic cancer as well as the optimization of cell processing parameters and combination treatment regimens.

<meta charset="utf8"></head><body>췌장암의 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구의 유세포 분석 기반 분리 및 치료 평가

We describe a method to utilize tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) from mice through flow cytometry for adoptive cell transfer. This protocol aims to verify the specific cytotoxicity of TILs against tumors in a syngeneic pancreatic cancer mouse model, providing insights into the development of adoptive cell therapies for pancreatic cancer.

췌장암의 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구의 유세포 분석 기반 분리 및 치료 평가

Pancreatic cancer is an aggressive malignancy with a dismal prognosis and limited therapeutic options. Adoptive cell therapy, which involves isolating and ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

췌장 인트라바이탈 이미징 창이 있는 뮤린 모델에서 췌장의 생체 내 세포 수준 시각화안정화

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

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췌장암의 진행 발광 동소 모델

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동소 이식 췌장 암 마우스 모델의 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상

췌장암의 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구의 유세포 분석 기반 분리 및 치료 평가

췌장암의 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구의 유세포 분석 기반 분리 및 치료 평가

췌장암의 마우스 모델에서 종양 침윤 림프구의 유세포 분석 기반 분리 및 치료 평가

췌장 인트라바이탈 이미징 창이 있는 뮤린 모델에서 췌장의 생체 내 세포 수준 시각화안정화