We thank the thousands of brain donors, patients, families, and neuroscientists around the world who, during the last two centuries and through their generous gifts and intellectual efforts, helped to discover how the human brain works, to understand devastating brain diseases, and to develop treatments thereof. We particularly thank Mrs. Cecilia V. Feltis for editing and reviewing this manuscript.

사후 인체 조직을 포함하는 절차는 기관 검토위원회의 검토 및 45 CFR (연방 규정 코드)에서 면제되었다. 참고 :이 프로토콜은 인간의 신경 병리학 적 연구에 대한 최종 사후 뇌 평가를위한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다. 인간의 뇌 절단을 수행하는 데 필요한 장치, 장비, 재료 및 소모품의 상세한 설명은 제외됩니다. 뇌 해부 용 재료 및 소모품은 단일 연구자의 재량에 따라 선택되고 허용 또는 각 연구 기관에서 승인 부검 도구를 기반으로합니다. 이 절차에 필요한 도구와 재료의 최소한의 세트는 소재 / 장비의 표에 설명되어 있습니다. 특정 절단 절차와 인간 CJD로 의심되는 전염성 뇌 질환에 대한주의 사항이 원고의 목적 밖에 다른 소스 7에서 사용할 수 있습니다. 1. 대칭 양성반구 뇌 절단 참고 : 2 ~ 3 주 동안의 periagonal, 신진 대사에 따라 (즉, 산도) 및 조직 보존 ((중립 버퍼 10 % 포르말린 예를 들어, 사용) 뇌가 필요한 조직 고정을받은 있는지 확인 즉, 온도) 조건. 그러나, 결상 병리학과 상관 관계 연구 고정의 장기간 (&gt; 5.4 주) (8)이 제안되었다. <ol><li> 연구자에 대하여 반대 방향으로 향하는 정면 극으로 연구자 대향 평평한 뇌 놓는다. </li><li> 모든 피질 뇌회 (gyri) 전체 뇌 (도 1a)의 sulci 완전하고 명확한 시각화를 허용하는 방식으로 뇌에 놓는다. </li><li> 수막 이상에 대한 첫 번째 모습, 거시적 반구 비대칭 (초점, 엽성, 또는 위축의 일반화 된 반구 현상 가능한 지표), 거시적 tissutal 병변 (즉, tumoRS 또는 탈출증), 선천성 기형, 혈관 이상, 그리고 다른 가능한 이상 또는 대뇌 표면의 특별한 프리젠 테이션. 참고 : 인간의 두뇌를 평가하는 방법에 대한 자세한 설명은 시판 신경 병리학 교과서 및 부검 매뉴얼 9,10 참조하십시오. </li></ol> 2. 프로토콜 시퀀스 <ol><li> 연구자가 직면하고있는 반구 (telencephalon)의 피상적 인 측면, 멀리 조사에서 정면 기둥에 직면하고 있습니다. 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 뇌에 수직으로 디지털 사진을 한 (그림 1a를 - 다). </li><li> 마크 프리 뇌를 절단하기 전에 잉크 또는 컬러 바늘을 사용하여 postcentral 대뇌 피질의 뇌회 (gyri) (그림 1b </strong&gt;). 주 :이 절차는 모터 및 절단 후의 주 체성 감각 피질보다 즉시 인식을 용이하게한다. </li><li> 이 같은 방향으로 향하게 유지하면서 180도 두뇌 회전 (즉, 조사에서 멀리 직면하고있는 정면 기둥). 조심스럽게 뇌의 기반을 검사합니다. 뇌 혈관 시스템의 상태 (즉, 기저 및 척추 동맥과 윌리스의 원) 자신의 뇌간 출구 / 입구 수준 및 뇌 신경에 특별한주의를 기울이십시오. 그들의 극단적 인 나약함에, tissutal 열상을 방지하기 위해 특별한주의와 함께 후각 전구 및 소책자를 관리합니다. <ol><li> 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교는 대뇌 피질과 뇌간 표면의 전체를 캡처 수직으로 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. </l난&gt; </ol></li><li> 뇌의베이스를 마주 메스를 사용하여, (뇌의베이스에 가능한 한 가깝게) 뇌교의 상부의 레벨에 뇌간 횡 절단. 조심스럽게 11 (창백위한 즉,)에 SN을 검사하고 다른 이웃 구조 12. 아마도 정상적인 뇌 (13)에 비해 뇌의 특이한 외관, 오디오 레코더 장치를 이용하여, 양지. </li><li> 다시 내측 종 방향 균열을 통해 중앙에서 뇌량을 절단하고 전두 - 후두 방향에 따라 두 개의 반구를 분리, 날카로운 칼을 사용하여, 180도 뇌를 회전합니다. 가능 (예를 들어, 심실 확대 한, 기형, 조직의 연화, 종양 등)의 이상 (13)에 대한 각 반구의 각 측면을 검사합니다. 도 2a를 참조하십시오. <ol><li> 가능한 매크로 이상을 문서화하는 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영하고수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 설명합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 기능을 기록해 둡니다. </li></ol></li><li> 도 2b에 도시 된 바와 같이, 전두엽이 떨어져 조사원으로부터 향하게 그 내측 측면에 누워 두 반구 평 놓는다. 그들의 센터 (표시 반구 비대칭의 경우에도) 터치 방식으로 배치합니다. </li><li> 날카로운 칼을 사용하여 수동으로 정면 기둥에서 시작하여 반구의 전체 길이를 통해 후두 극으로 이동, 두 대뇌 반구를 잘라. (각 반구 18 석판 정도) 뇌 조직의 1cm 두께의 블록이 시리즈를 가져옵니다. </li><li> 별도의 평평한 표면에 해부학 적 조직 (전두 - 후두 방향) 순서로 뇌 슬라브를 놓습니다. 흰색 표면 처를 사용촬영할 때 더 나은 대비를 위해 인쇄 통치자와 CE. 자신의 관상면 직접 눈 검사 및 디지털 사진 (그림 3a) 볼 수 있는지 확인하고, 해부학 대칭 방법 (전두 - 후두 방향)으로 뇌 석판의 두 시리즈를 표시합니다. 보다 정확한 방법으로 뇌의 구조, 크기 및 수 이상을 국산화 양면에 인쇄 millimetric 그리드와 절단 표면을 사용합니다. <ol><li> 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 측면의, (아마도 오디오 레코더 장치를 사용) 참고하십시오. </li></ol></li><li> 날카로운 메스를 사용하여 수동으로 작은 사각형 블록을 해부각 설립 대뇌 지역의 뇌 조직. 표 1에 기술 된 제안 된 뇌 영역 수집 방식을 따릅니다. <ol><li> 별도로 표시 histocassettes의 각 조직 블록을 넣습니다. 주 : 뇌 조직의 각 블록은 최대한 맞게 절단해야 표준 histocassette 최대 볼륨 (30 X 20 X 4mm 3). </li><li> 각각의 경우의 역 식별 코드를 이용하여 특정 신경 해부학 식별자를 사용 histocassettes 라벨 (다른 뇌 랜덤 문자 또는 숫자를 사용하지 않는, 표 1에 나타낸 바와 같이 오히려 항상 해부학 이름 또는 해당 번호와 동일한 지역 사용). 생성 드 식별 코드, 예를 들면, 즉 BRC 130 B는 뇌 유지 여기서, R은 리소스에 대한 유지, C는 센터에 대해 유지 (130)가 프로그레시브의 가입 또는 AD160001이다 (각각의 경우에 대해 랜덤 또는 세미 - 난수를 발생시킴으로써, AD가 약자 여기서 &quot;알츠하이머 질환 연구,&quot;16 인올해 부검가 프로그레시브 가입 표본 번호 (2016)를 수행하고, 0001 때). 참고 :이 단계는 미래 연구에 매우 도움이된다; 전설을 유지하고 반구 (L = 왼쪽 반구, R = 오른쪽 반구)를 지정합니다. 각 반구에 대한 특정 색상을 설정, histocassettes의 두 개의 서로 다른 색상을 사용합니다. </li><li> 가능한 macroanomalies을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 기능을 기록해 둡니다. </li></ol></li><li> 디지털 사진을 촬영 전체 컷 뇌와 관련된 histocassettes의 (필요하거나 원하는 많은 등). </li><li> (아큐 펀치에 의해 예) 펀치 DNA 추출 및 유전자 분석을위한 조직의 작은 조각. 용도직경 5mm - 2의 펀치. 참고 : 게놈 소재의 높은 내용의 소뇌가 바람직한 선택이 될 것입니다; 그러나, 다른 지역은 괜찮습니다. </li><li> 이전 조직 처리의 다음 단계까지 사용 된 고정 제 용액 (예, 10 % 중성 완충 포르말린)와 동일한 유형의 뇌 조직 블록을 포함하는 모든 histocassettes 다시 담가. </li><li> 인간의 포르말린 고정 조직 처리 (14)에 대한 표준 절차를 따르십시오. </li></ol> 3. 특별 접근 방식 : 교류 냉동과 고정 대칭 Bihemispheric 절단 주 : (2)에서 설명한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 프로토콜은 동일한 체계적이고 대칭 방식으로 미 정착 신선한 뇌 조직에서 석판 절단 가능성 (이용 가능) 제공한다. <ol><li> A의 10 분 -80 C의 냉동고 ° 뇌 조직을 강화하는 withou - 거꾸로 (바람직하게는 반구형 그릇 모양의 플라스틱 표면에) 8 전체 신선한 뇌를 배치t는 생화학 적 손상을 유발하고 수동 절단을 용이하게 할 수 있습니다. </li><li> 날카로운 칼을 사용하여, 제 2 항에 기술 된 뇌 절단 프로토콜에 따라 다른 연속적인 방식으로 두 반구를 잘라하지만, 동결의 (a 전두 - 후두 해부학 적 방향 양쪽 반구에서와 함께) 다른 모든 슬래브를 수정합니다. <ol><li> 이 때, 표 1에 기재된 바와 같이, 각 뇌 영역을 절단하지 않는다. 즉시 RNA 또는 단백질 추출 (즉, 유전체 또는 단백체 연구를위한) 15 필요한 경우에만 특정 신선한 뇌 영역을 잘라. </li></ol></li><li> 절단 후, 즉시 각 신선한 조직을, 라벨을 동결하고, 수. 전체 슬래브 시리즈의 디지털 사진을 촬영; 하나의 비닐 봉투의 각 슬래브 팩; 별도의 한 뇌 전용 용기에 슬래브를 수집; 및 전용 -80 ° C 냉장고에 컨테이너를 저장합니다. 주 : 냉동 인간 뇌 조직에만 전념해야한다. 만 나중에 노래한다각 특정 실험에 필요한 르 냉동 뇌 영역이 절단 될 수있다. </li><li> 충분한 정착의 볼륨 (정착액 / 조직 블록 비율의 3/1 볼륨)을 포함하는 별도의 가방에 고정 (10 % 중성 완충 포르말린 또는 다른 정착액)에 대해 선택한 다른 모든 조직 슬래브를 담가. 연속적 전두 - 후두 시퀀스 다음을 번호에 의해 각각의 가방을 레이블. 각각의 가방을 봉인 디지털 사진을 촬영하고, 플라스틱 용기에 보관. </li><li> 조직 고정 2 주 후 정착 함유 가방을 열고 표 1에 설명 된대로 각 뇌 영역을 잘라. </li></ol> 4. Histostain 및 면역 조직 화학 참고 : 뇌 영역의 세트가 제안한 방식에 따라 잘라 (표 1) AD 16 대부분, 모든 경우, 현재 설정된 합의 기반 병리학 적 기준을 만족시키기에 충분, PD (17), 루이체 (18)와 치매, 측두엽 치매 (FTD / MND) <suP&gt; (19), 프로그레시브 Suprabulbar 마비 (PSP) (20), 다중 시스템 위축 (MSA) (21) 등 만성 외상성 뇌증 (CTE) 22. <ol><li> 각 뇌 영역과 두 반구를 들어, histostains 다음과 같은 최소한의를 수행 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; E), 크레 실 바이올렛 (CV, 정량적 형태 계측 학적 연구, 예를 들어 계획하는 경우),은 염색 (있는 경우 &quot;탐색&quot;분석은 필요). </li><li> 각 뇌 영역과 두 반구에 대한 면역 조직 화학 프로토콜의 다음과 같은 최소 세트를 수행합니다 (β A), 인산화 된 타우 (pTau), 인산화 α-synuclein의 (pα-가 SYN) 아밀로이드 β, 및 인산화-TDP43 (pTDP43) 로 14을 설명했다. 주 : (두 반구의 모든 뇌 영역을 사용할 수있는 경우)이 프로토콜은 다음 각 뇌를 평가하기 위해 조직 섹션의 총 수는 46입니다. </li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

이것은 뇌 절단 방법이 여전히 주요 기능 중 하나로서 bihemispheric 대칭 절삭 과정을 유지하면서 (예를 들어, 각 반구 평가 뇌 영역의 개수를 감소시킴으로써) 각 병리학 실험실의 특정 요구 사항에 적합 할 수있다. 이 제안 된 프로토콜은 일상적인 절차 (연구 중심 신경 병리학 센터) 또는 필요한 경우에만 (특정 임상 중심의 연구)에 사용될 수 있습니다. 이것은만을 선택적으로 조사 특정 유형 (?...

Neuropathologists는 인간의 두뇌를 평가하는 과학적인 권한, 지적 명예 및 진단 의무가 있습니다. 수십 년 동안, 뇌 질환 및 주요 노력의 상세한 임상 설명은 인간의 사후 뇌에서의 가능한 neurohistological 상관 관계가 수행 된 개별화합니다. 역사적으로, 이러한 노력은 특히 의료 과학, 신경이, 현대 시대에 진출하는 가장 생산적인 양상을 나타낸다. 이전 저명한 neuropathologists과 헌신, 결정, 장학금, 그리고 놀라운 능력 덕분에 (종종 매우 루디 멘털 도구를 사용하여) 정상 및 비정상 뇌 조직을 구별하기 위해, 우리는 지금 조사 할 수 및 알츠하이머-Perusini 병으로 대상 질환 (부당에만 호출 알츠하이머 병; APD / AD) (1), 파킨슨 병 (PD)이, 크로이츠 펠트 - 야콥병 (CJD) 3, - 루 게릭 병 / 루게릭 Sclerosi의 (ALS) 4, 괌 질환 (5)는, 몇 가지를 언급합니다. , 기능 및 형태 학적 자기 공명 영상 (즉, 자기 공명, 확산 MRI, tractography-MRI 등), 양전자 방출 단층 촬영, 이러한 고해상도 컴퓨터 단층 촬영 (CT 혈관 조영술 즉, 멀티 섹션 나선형 CT 스캔) 등의 신경 영상의 고급 기술, (PET), 초음파 기반 이미징, 그리고 다른 사람은 확실하게 진단하고 신경 및 정신과 환자를 치료하는 방법에 대한 일반적인 접근 방식을 수정했습니다. 그럼에도 불구하고, 신경 영상 기법 살아 그들이 직접적 뉴런 세포의 고도로 복잡한 세포 및 세포 내 구조물을 분석하기 위해 상기 발생 순간에 기회를 제공하지 않을 때 사람의 뇌를 가시화 할 수 있지만; 또는, 마크 시각화 및 세포 내 병변의 특정 유형을 정량화하는 단계; 또는 정확하게 circuital 및 서브에서 자신의 신경 해부학 적 또는 소 지역 현지화를 나타냅니다circuital 해부학 수준. 예를 들어, 뇌 영상 기법의 entorhinal 피질에서 AD의 고전적인 기능을 Substantia 그라 (SN), PD와 관련된 공통의 병리학 적 특징, 또는 신경 섬유 엉킴 (NFT)의 착색 된 신경 세포에서 루이 기관 (LB)를 식별하거나 지역화 할 수 없으며, 다른 뇌 병변. 첨단 디지털 현미경과 함께 신경 병리학 적 조사는 최종 진단을 위해, 따라서 아직 자세한 임상 병리학 적 상관 관계에 대한 unreplaceable하고. 인해 인간의 뇌 특이 anatomo 관능 특성, 특히 해부학 현지화 (즉, 두개골, 그 양은 직접 검사를 허용하지 않는 자연 보호 시스템 내부), 생체 내에서 신경 영상 기술의 도입 이 복잡한 조직의 신비의 일부 초기 답을 찾을 수있는 매우 도움이 임상의와 연구자가 있습니다. 그러나, 임상 또는 neuroimagi가 없습니다직접 부검 뇌 조직을 분석 할 수있는 독특한 기회를 대체 할 수 NG 방법. 만 조직 수집, 보존, 인간 두뇌의 분류 신경 세포와 비 신경 세포들은 세포 내 성분, 세포 내 및 세포 병리학 적 병변의 직접적이고 체계적인 조사를 허용 할 수 있으며, 뇌 내부의 이상을 모든 종류의는, 확인, 수정 또는합니다 임상 진단을 재정의하고 새로운 임상 병리학 적 상관 관계를 발견 할 수 있습니다. 부검 뇌에서의 평가에 관한 분명한 제한 중 하나는이 절차 단면 방법론 사실이었다. 항상 지속적인 신경 병리학 적 과정 (임상 발현 여부) 및 neurohistological 수준을 정의 할 수있는 기회 (있는 경우) 사이에 지연이있을 것입니다. 이 자체를 다시 생성 할 인간 두뇌의 무능력에 주로 기인한다. 이 PE를 생성하지 않고, 생체 내에서 뇌 조직을 얻는 것이 현재 불가능rmanent 손상. 결과적으로, 세로 방향과 같은 뇌 neuropathologically / 사람을 평가하는 것은 불가능하다. 그러나 표준화 된 뇌 은행 절차 및 일반 대중 사이에 뇌의 기부에 대한 증가에 대한 인식이 크게 지속적으로 수집하고 분석 할 수있는 경우의 수를 증가시켜 뇌 부검 타이밍 문제의 해결에 기여할 수있다. 이와 같이, 사후 뇌의 더 충분한 숫자는 각각 인간의 뇌 질환과 관련된 뇌 병변의 각각의 특정 유형에 대한 병리학 적 기원과 진행 일정한 패턴을 정의하기 위해 얻어 질 수있다. 이 모든 연령대에 걸쳐 기부하고 가능한 한 많은 두뇌를 수집하는 신경 정신 장애에 의해 영향을받는 환자뿐만 아니라에서 건강한 대조군을 필요로한다. 한 가지 가능한 방법은 표준 루틴으로 일반 및 전문 의료 센터에서 가능한 한 많은 사후 뇌를 수집 할 수있다. 뇌 기부의 필요성은 최근에 표현 된치매 정상적인 노화 (6)을 연구하는 사람들에 의해. 동일한 필요성은 전체 신경 필드에 의해 표현 될 것이다. 다른 이유 전술과에 대한 지속적인 뇌 절단 절차의 업데이트가 필요합니다. 또한, 절차를 절단 뇌는 세계적으로도 더 나은 결정적 원인과 뇌 질환의 메커니즘, 이해, 희망, 조사하고 현재와 미래의 생명 공학 기술을 적용 할 수있는 가능성 계정에 복용, 세계의 다른 신경 병리학 연구 센터를 통해 표준화되어야한다 인간. 여기서, 주로 연구 목적을 위해, 우리는 사후 뇌 인간 절단 대칭 방법론을 설명한다. 이 절차는 일반적으로 수행보다 두 대뇌와 소뇌 반구에서 더 많은 뇌 영역을 수집 제안한다. 대칭 이중 반구 뇌 절단 과정은 인간의 현재의 지식을 매우 잘 맞는 것입니다신경 해부학, 신경 화학 및 신경 생리학. 이 방법은 또한 가능성이 neuropathologically 같은 높은인지 비인지 기능 일반적으로 또는 독점적으로 본 우리의 종과 관련된 반구 전문화 및 재화 등의 인간의 뇌의 고유 기능을 분석 할 수 있습니다. 반구 전문 / 재화 및 뇌 병변 특정 유형의 사이에 특정 병 인적 관계가 있는지, 또는 특이한 신경 정신 병리학 이벤트가 있는지 여부를 초기에 prevalently, 또는 독점적으로 특정 반구와 연관 기능은 현재 알려져 있지 않다. 이 대칭 뇌 절단 절차를 설명함으로써, 우리는 더 나은 고도로 전문화 된 조직에서 정상 및 병적 상태, 뇌를 이해하는 데 도움이 될 인간의 뇌 해부의 업데이트 방법을 제안하는 것을 목표로하고 있습니다. 이 방법은 고려 만 인간에 존재하는 모토-기능 반구 측면을합니다.

<table><tbody><tr><td>Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin&amp;rsquo;s consent required.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Histology Container</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64233-24</td><td></td></tr><tr><td>Histology Cassettes</td><td>VWR</td><td>18000-142 (orange)</td><td></td></tr><tr><td>Histology Cassettes</td><td>VWR</td><td>18000-132 (navy)</td><td></td></tr><tr><td>Knife Handles and Disposable Blades</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>62560-04</td><td></td></tr><tr><td>Long Blades</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>62561-20</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Blade Knife Handles</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>72040-08</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Blades</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>72049-22</td><td></td></tr><tr><td>Accu-Punch 2 mm</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>69038-02&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Polystyrene Containers &amp;ndash; Sterile</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64240-12</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Board</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>63307-30</td><td></td></tr><tr><td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Solution, Gill No. 2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS280&amp;nbsp;SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y solution, aqueous</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT1102128&amp;nbsp;SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>anti-beta-amyloid</td><td>Covance, Princeton, NJ</td><td>SIG-39220</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-tau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MN1020</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-alpha-synuclein</td><td>Abcam</td><td>ab27766</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-phospho-TDP43</td><td>Cosmo Bio Co.</td><td>TIP-PTD-P02</td><td>1:2000</td></tr><tr><td>Digital Camera</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Head Impulse Sealing machine&amp;nbsp;</td><td>Grainger</td><td>5ZZ35</td><td></td></tr></tbody></table>

symmetric bihemispheric postmortem brain cutting to study healthy and pathological brain conditions in humans

Neuropathologists는 때때로 뇌 부검 요청 된 누구 환자에 기재된 복합 신경 현상에 대한 확실한 진단을 생성하는 데 필요한 지식의 양에 의해 위협을 느낀다. 생물 의학 과학 및 신경 영상의 발전은 신경 정신 분야에 혁명을했지만, 그들은 또한 뇌 부검 만 확증 값을 가지고 있다는 잘못된 생각을 생성했다. 이것은 잘못된 생각 때문에, 감소 된 가능성은 인간 두뇌 아직 알려지지 않은 많은 정상 및 병리학 적 특징을 이해하는데 필요한 상세 광범위한 신경 병리학 조사를 수행하기 위해, 부검 비율의 급격한 감소를 만들어. 관찰 된 신경 정신 현상과 가능한 neurohistological 상관 관계의 대응 현지화 / 특성 사이의 상관 관계의 전통적인 추론 방법은 부정 할 수없는 값이 계속됩니다. neuropsychi의 맥락에서그것은 뇌 조직의 직접적인 물리적 평가에 특히 의존하기 때문에 atric 질환, 기존의 임상 병리학 적 방법은 여전히 ​​해당 신경 병리학 기판에 독특한 신경 기능을 연결하는 최상의 방법 (종종에서만 사용 가능)입니다. 사후 뇌의 평가는 뇌가 다른 신경 병리학 센터마다 다를 절차를 절단을 기반으로합니다. 뇌 잘라 각 기관에 존재하는 다양한 임상 및 학술 사태에 따라 비교적 광범위하고 체계적으로 수행된다. 보다 해부학 포함 대칭 이중 반구 뇌의 절단 방법은, 적어도 깊이 특정 대한 인간의 뇌 (예를 들어, 반구 특성화 및 재화의 특수성과 정상 및 병리학 적 상태에서, 코 히어 런트 조사 인간 병리학 연구 목적을 위해 사용되어야 기능). 보다 포괄적 이거를 제공 할 것 이러한 방법현재와 ​​미래의 바이오 및 뇌 영상 기술을 사용할 수 neuropathologically 잘 특성화 뇌의 ction. 우리는 인간의 뇌의 병리에 반구 차이의 조사 및 전류에 사용뿐만 아니라 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술에 대한 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차를 설명합니다.

프로토콜 길이 하나의 대칭 bihemispheric 고정 뇌 절단 절차 소요 시간은 1 시간으로 추정된다 (, 라벨, 표면을 절개 테이블, 도구를 설정하고, 절단 소요되는 시간은 제외. 등). 냉동 절차 절단 뇌에 고정되는 단일 대칭 이중 반구 교번하는 데 필요한 시간은 2 시간이 걸릴 것으로 추정된다. 하나의 인간의 두뇌 / 주제에 대해 ?...

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Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다.

인간의 건강과 병리학 적 뇌 조건을 연구에 절단 대칭 Bihemispheric 사후 뇌

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

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14.0K 조회수.  Biomedical Research Institute of New Jersey (BRInj).  조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다. 

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Sex Stratified Neuronal Cultures to Study Ischemic Cell Death Pathways

Sex differences in neuronal susceptibility to ischemic injury and neurodegenerative disease have long been observed, but the signaling mechanisms responsible for those differences remain unclear. Primary disassociated embryonic neuronal culture provides a simplified experimental model with which to investigate the neuronal cell signaling involved in cell death as a result of ischemia or disease; however, most neuronal cultures used in research today are mixed sex. Researchers can and do test the effects of sex steroid treatment in mixed sex neuronal cultures in models of neuronal injury and disease, but accumulating evidence suggests that the female brain responds to androgens, estrogens, and progesterone differently than the male brain. Furthermore, neonate male and female rodents respond differently to ischemic injury, with males experiencing greater injury following cerebral ischemia than females. Thus, mixed sex neuronal cultures might obscure and confound the experimental results; important information might be missed. For this reason, the Herson Lab at the University of Colorado School of Medicine routinely prepares sex-stratified primary disassociated embryonic neuronal cultures from both hippocampus and cortex. Embryos are sexed before harvesting of brain tissue and male and female tissue are disassociated separately, plated separately, and maintained separately. Using this method, the Herson Lab has demonstrated a male-specific role for the ion channel TRPM2 in ischemic cell death. In this manuscript, we share and discuss our protocol for sexing embryonic mice and preparing sex-stratified hippocampal primary disassociated neuron cultures. This method can be adapted to prepare sex-stratified cortical cultures and the method for embryo sexing can be used in conjunction with other protocols for any study in which sex is thought to be an important determinant of outcome.

Primary disassociated embryonic hippocampal neuronal cultures are useful for investigating the signaling mechanisms involved in neuron death. Sexing the embryos before the isolation and dissociation of the hippocampus allows the preparation of separate male and female cultures, which enables the researcher to identify and investigate sex-specific cell signaling.

Sex differences in neuronal susceptibility to ischemic injury and neurodegenerative disease have long been observed, but the signaling mechanisms ...

연구

신경과학

3D Modeling of the Lateral Ventricles and Histological Characterization of Periventricular Tissue in Humans and Mouse

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional units of the ventricles are ciliated epithelial cells termed ependymal cells, which line the ventricles and through ciliary action are capable of generating laminar flow of CSF at the ventricle surface. This monolayer of ependymal cells also provides barrier and filtration functions that promote exchange between brain interstitial fluids (ISF) and circulating CSF. Biochemical changes in the brain are thereby reflected in the composition of the CSF and destruction of the ependyma can disrupt the delicate balance of CSF and ISF exchange. In humans there is a strong correlation between lateral ventricle expansion and aging. Age-associated ventriculomegaly can occur even in the absence of dementia or obstruction of CSF flow. The exact cause and progression of ventriculomegaly is often unknown; however, enlarged ventricles can show regional and, often, extensive loss of ependymal cell coverage with ventricle surface astrogliosis and associated periventricular edema replacing the functional ependymal cell monolayer. Using MRI scans together with postmortem human brain tissue, we describe how to prepare, image and compile 3D renderings of lateral ventricle volumes, calculate lateral ventricle volumes, and characterize periventricular tissue through immunohistochemical analysis of en face lateral ventricle wall tissue preparations. Corresponding analyses of mouse brain tissue are also presented supporting the use of mouse models as a means to evaluate changes to the lateral ventricles and periventricular tissue found in human aging and disease. Together, these protocols allow investigations into the cause and effect of ventriculomegaly and highlight techniques to study ventricular system health and its important barrier and filtration functions within the brain.

Using MRI scans (human), 3D imaging software, and immunohistological analysis, we document changes to the brain&#8217;s lateral ventricles. Longitudinal 3D mapping of lateral ventricle volume changes and characterization of periventricular cellular changes that occur in the human brain due to aging or disease are then modeled in mice.

인간과 마우스의 뇌실 주위 조직의 측면 심실 및 조직 학적 특성의 3D 모델링

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional ...

High-resolution Structural Magnetic Resonance Imaging of the Human Subcortex In Vivo and Postmortem

The focus of this study was to test the resolution limits of structural MRI of a postmortem brain compared to living human brains. The resolution of structural MRI in vivo is ultimately limited by physiological noise, including pulsation, respiration and head movement. Although imaging hardware continues to improve, it is still difficult to resolve structures on the millimeter scale. For example, the primary visual sensory pathways synapse at the lateral geniculate nucleus (LGN), a visual relay and control nucleus in the thalamus that normally is organized into six interleaved monocular layers. Neuroimaging studies have not been able to reliably distinguish these layers due their small size that are less than 1 mm thick.
The resolving limit of structural MRI, in a postmortem brain was tested using multiple images averaged over a long duration (~24 h). The purpose was to test whether it was possible to resolve the individual layers of the LGN in the absence of physiological noise. A proton density (PD)1 weighted pulse sequence was used with varying resolution and other parameters to determine the minimum number of images necessary to be registered and averaged to reliably distinguish the LGN and other subcortical regions. The results were also compared to images acquired in living human brains. In vivo subjects were scanned in order to determine the additional effects of physiological noise on the minimum number of PD scans needed to differentiate subcortical structures, useful in clinical applications.

High-resolution Structural Magnetic Resonance Imaging of the Human Subcortex In Vivo and Postmortem

Here we present a protocol to determine the minimum number images that needed to be registered and averaged to resolve subcortical structures and test whether the individual layers of the LGN could be resolved in the absence of physiological noise.

인간 Subcortex의 고해상도 구조 자기 공명 영상<I&gt; 생체</I&gt; 및 사후

The focus of this study was to test the resolution limits of structural MRI of a postmortem brain compared to living human brains. The resolution of ...

Utilizing 3D Printing Technology to Merge MRI with Histology: A Protocol for Brain Sectioning

Magnetic resonance imaging (MRI) allows for the delineation between normal and abnormal tissue on a macroscopic scale, sampling an entire tissue volume three-dimensionally. While MRI is an extremely sensitive tool for detecting tissue abnormalities, association of signal changes with an underlying pathological process is usually not straightforward. In the central nervous system, for example, inflammation, demyelination, axonal damage, gliosis, and neuronal death may all induce similar findings on MRI. As such, interpretation of MRI scans depends on the context, and radiological-histopathological correlation is therefore of the utmost importance. Unfortunately, traditional pathological sectioning of brain tissue is often imprecise and inconsistent, thus complicating the comparison between histology sections and MRI. This article presents novel methodology for accurately sectioning primate brain tissues and thus allowing precise matching between histology and MRI. The detailed protocol described in this article will assist investigators in applying this method, which relies on the creation of 3D printed brain slicers. Slightly modified, it can be easily implemented for brains of other species, including humans.

The overall goal of this protocol is to accurately align magnetic resonance imaging (MRI) image volumes with histology sections via the creation of customized 3D-printed brain holders and slicer boxes.

3D 인쇄 기술을 활용하여 조직학과 MRI를 병합하기 : 두뇌를위한 프로토콜 단면

Magnetic resonance imaging (MRI) allows for the delineation between normal and abnormal tissue on a macroscopic scale, sampling an entire tissue volume ...

Stereotactic Atlas-Guided Laser Capture Microdissection of Brain Regions Affected by Traumatic Injury

The ability to isolate specific brain regions of interest can be impeded in tissue disassociation techniques that do not preserve their spatial distribution. Such techniques also potentially skew gene expression analysis because the process itself can alter expression patterns in individual cells. Here we describe a laser capture microdissection (LCM) method to selectively collect specific brain regions affected by traumatic brain injury (TBI) by using a modified Nissl (cresyl violet) staining protocol and the guidance of a rat brain atlas. LCM provides access to brain regions in their native positions and the ability to use anatomical landmarks for identification of each specific region. To this end, LCM has been used previously to examine brain region specific gene expression in TBI. This protocol allows examination of TBI-induced alterations in gene and microRNA expression in distinct brain areas within the same animal. The principles of this protocol can be amended and applied to a wide range of studies examining genomic expression in other disease and/or animal models.

We describe the use of laser capture microdissection to obtain samples of distinct cell populations from different brain regions for gene and microRNA analysis. This technique allows the study of differential effects of traumatic brain injury in specific regions of the rat brain.

외상 성 부상에 의해 영향을 하는 뇌 영역의 정위 적 아틀라스 유도 레이저 캡처 기정

The ability to isolate specific brain regions of interest can be impeded in tissue disassociation techniques that do not preserve their spatial ...

Exploring Deep Space - Uncovering the Anatomy of Periventricular Structures to Reveal the Lateral Ventricles of the Human Brain

Anatomy students are typically provided with two-dimensional (2D) sections and images when studying cerebral ventricular anatomy and students find this challenging. Because the ventricles are negative spaces located deep within the brain, the only way to understand their anatomy is by appreciating their boundaries formed by related structures. Looking at a 2D representation of these spaces, in any of the cardinal planes, will not enable visualisation of all of the structures that form the boundaries of the ventricles. Thus, using 2D sections alone requires students to compute their own mental image of the 3D ventricular spaces. The aim of this study was to develop a reproducible method for dissecting the human brain to create an educational resource to enhance student understanding of the intricate relationships between the ventricles and periventricular structures. To achieve this, we created a video resource that features a step-by-step guide using a fiber dissection method to reveal the lateral and third ventricles together with the closely related limbic system and basal ganglia structures. One of the advantages of this method is that it enables delineation of the white matter tracts that are difficult to distinguish using other dissection techniques. This video is accompanied by a written protocol that provides a systematic description of the process to aid in the reproduction of the brain dissection. This package offers a valuable anatomy teaching resource for educators and students alike. By following these instructions educators can create teaching resources and students can be guided to produce their own brain dissection as a hands-on practical activity. We recommend that this video guide be incorporated into neuroanatomy teaching to enhance student understanding of the morphology and clinical relevance of the ventricles.

This paper demonstrates the effective use of a fiber dissection method to reveal the superficial white matter tracts and periventricular structures of the human brain, in three-dimensional space, to aid student comprehension of ventricular morphology.

깊은 공간-인간 두뇌의 측면 심 공개 뇌 구조 해부학 적 탐구

Anatomy students are typically provided with two-dimensional (2D) sections and images when studying cerebral ventricular anatomy and students find this ...

Visualization of Cortical Modules in Flattened Mammalian Cortices

The cortex of mammalian brains is parcellated into distinct substructures or modules. Cortical modules typically lie parallel to the cortical sheet, and can be delineated by certain histochemical and immunohistochemical methods. In this study, we highlight a method to isolate the cortex from mammalian brains and flatten them to obtain sections parallel to the cortical sheet. We further highlight selected histochemical and immunohistochemical methods to process these flattened tangential sections to visualize cortical modules. In the somatosensory cortex of various mammals, we perform cytochrome oxidase histochemistry to reveal body maps or cortical modules representing different parts of the body of the animal. In the medial entorhinal cortex, an area where grid cells are generated, we utilize immunohistochemical methods to highlight modules of genetically determined neurons which are arranged in a grid-pattern in the cortical sheet across several species. Overall, we provide a framework to isolate and prepare layer-wise flattened cortical sections, and visualize cortical modules using histochemical and immunohistochemical methods in a wide variety of mammalian brains.

This article describes a detailed methodology to obtain flattened tangential sections from mammalian cortices and visualize cortical modules using histochemical and immunohistochemical methods.

병합 된 포유류 외피가 대뇌 피 질의 모듈의 시각화

The cortex of mammalian brains is parcellated into distinct substructures or modules. Cortical modules typically lie parallel to the cortical sheet, and ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 days a year. Participants consent to donate their brain and spinal cord. Most patients were followed by neurologists at the Cleveland Clinic Mellen Center for MS Treatment and Research. Their clinical courses and neurological disabilities are well-characterized. Soon after death, the body is transported to the MS Imaging Center, where the brain is scanned in situ by 3 T magnetic resonance imaging (MRI). The body is then transferred to the autopsy room, where the brain and spinal cord are removed. The brain is divided into two hemispheres. One hemisphere is immediately placed in a slicing box and alternate 1 cm-thick slices are either fixed in 4% paraformaldehyde for two days or rapidly frozen in dry ice and 2-methylbutane. The short-fixed brain slices are stored in a cryopreservation solution and used for histological analyses and immunocytochemical detection of sensitive antigens. Frozen slices are stored at -80 &#176;C and used for molecular, immunocytochemical, and in situ hybridization/RNA scope studies. The other hemisphere is placed in 4% paraformaldehyde for several months, placed in the slicing box, re-scanned in the 3 T magnetic resonance (MR) scanner and sliced into centimeter-thick slices. Postmortem in situ MR images (MRIs) are co-registered with 1 cm-thick brain slices to facilitate MRI-pathology correlations. All brain slices are photographed and brain white-matter lesions are identified. The spinal cord is cut into 2 cm segments. Alternate segments are fixed in 4% paraformaldehyde or rapidly frozen. The rapid procurement of postmortem MS tissues allows pathological and molecular analyses of MS brains and spinal cords and pathological correlations of brain MRI abnormalities. The quality of these rapidly-processed postmortem tissues (usually within 6 h of death) is of great value to MS research and has resulted in many high-impact discoveries.

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease with no cure. Analysis of brain tissue provides important clues to understanding the pathogenesis of the disease. Here we discuss the methodology and downstream analysis of MS brain tissue collected through a unique rapid autopsy program in operation at the Cleveland Clinic.

다발성 경화증을 가진 개별을 위한 포괄적인 부검 프로그램

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find preventive and curative measures. The most effective way to achieve this is through direct examination of diseased and healthy brain tissue. The authors present a protocol to obtain, process, characterize and store good quality brain tissue donated by individuals registered in an antemortem brain donation program. The donation program includes a face-to-face empathic approach to people, a collection of complementary clinical, biological, social and lifestyle information and serial multi-dimensional assessments over time to track individual trajectories of normal aging and cognitive decline. Since many neurological diseases are asymmetrical, our brain bank offers a unique protocol for slicing fresh specimens. Brain sections of both hemispheres are alternately frozen (at -80 &#176;C) or fixed in formalin; a fixed slice on one hemisphere corresponds to a frozen one on the other hemisphere. With this approach, a complete histological characterization of all frozen material can be obtained, and omics studies can be performed on histologically well-defined tissues from both hemispheres thus offering a more complete assessment of neurodegenerative disease mechanisms. Correct and definite diagnosis of these diseases can only be achieved by combining the clinical syndrome with the neuropathological evaluation, which often adds important etiological clues necessary to interpret the pathogenesis. This method can be time consuming, expensive and limited as it only covers a limited geographical area. Regardless of its limitations, the high degree of characterization it provides can be rewarding. Our ultimate goal is to establish the first Italian Brain Bank, all the while emphasizing the importance of neuropathologically verified epidemiological studies.

This protocol describes a method to track individual brain-aging trajectories through a brain donation program and proper characterization of brains. Brain donors are involved in a long-term longitudinal study including serial multi-dimensional assessments. The protocol contains a detailed description of brain processing and an accurate diagnostic methodology.

노화 뇌 수집, 처리 및 특성화를 위한 Abbiategrasso 브레인 뱅크 프로토콜

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions

The brain is the command center for the mammalian nervous system and an organ with enormous structural complexity. Protected within the skull, the brain consists of an outer covering of grey matter over the hemispheres known as the cerebral cortex. Underneath this layer reside many other specialized structures that are essential for multiple phenomenon important for existence. Acquiring samples of specific gross brain regions requires quick and precise dissection steps.&#160;It is understood that at the microscopic level, many sub-regions exist and likely cross the arbitrary regional boundaries that we impose for the purpose of this dissection.
Mouse models are routinely used to study human brain functions and diseases. Changes in gene expression patterns may be confined to specific brain areas targeting a particular phenotype depending on the diseased state. Thus, it is of great importance to study regulation of transcription with respect to its well-defined structural organization. A complete understanding of the brain requires studying distinct brain regions, defining connections, and identifying key differences in the activities of each of these brain regions. A more comprehensive understanding of each of these distinct regions may pave the way for new and improved treatments in the field of neuroscience. Herein, we discuss a step-by-step methodology for dissecting the mouse brain into sixteen distinct regions. In this procedure, we have focused on male mouse C57Bl/6J (6-8 week old) brain removal and dissection into multiple regions using neuroanatomical landmarks to identify and sample discrete functionally-relevant and behaviorally-relevant&#160;brain regions. This work will help lay a strong foundation in the field of neuroscience, leading to more focused approaches in the deeper understanding of brain function.

We present a hands-on, step-by-step, rapid protocol for mouse brain removal and dissection of discrete regions from fresh brain tissue. Obtaining brain regions for molecular analysis has become routine in many neuroscience labs. These brain regions are immediately frozen to obtain high quality transcriptomic data for system level analysis.

The brain is the command center for the mammalian nervous system and an organ with enormous structural complexity. Protected within the skull, the brain ...