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재조합 및 유전자 표적화

Overview

현대 생물학에서 가장 널리 사용되는 도구 중 하나는 제한 효소를 가진 분자 복제이며, 이는 DNA 단편 간에 호환되는 끝을 만들어 결합 할 수 있습니다. 그러나, 이 기술은 크거나 복잡한 DNA 구조물 생성을 위한 그것의 적용성을 제한하는 특정 제한이 있습니다. 이러한 단점 중 일부를 해결하는 새로운 기술은 동종 재조합 (HR)을 사용하여 DNA를 수정하는 재결합, 유사하거나 동일한 서열의 뻗어에 따라 다른 DNA 분자 사이의 교환. 특정 loci에서 유기체의 게놈을 변경하는 내인성 HR을 활용하는 유전자 타겟팅과 함께 HR 기반 복제 기술은 고처리량 유전 공학의 속도와 효능을 크게 향상했습니다.

본 영상에서는 세균성 인공 염색체(BAC)와 같은 재조합 능력이 있는 유기체 및 게놈 라이브러리를 포함한 재결합 실험을 수행하는 데 필요한 기본 구성 요소뿐만 아니라 HR의 원리를 소개합니다. 그런 다음 재결합을 사용하여 궁극적으로 배아 줄기 세포로 트랜스로 감염되어 형질전환 동물을 생성하는 유전자 표적 벡터를 생성하는 프로토콜을 거닐습니다. 마지막으로, 재결합 기술의 유용성과 다양성을 강조하는 여러 응용 프로그램이 제공됩니다.

Procedure

동종 재조합에 의한 복제, 또는 재결합, 크게 높은 처리량 유전 공학을 수행하는 연구원의 능력을 향상시켰습니다. 고전적인 분자 복제는 벡터와 인서트의 소화를 필요로하여 "재결합"을 위해 호환되는 끝을 생성하지만 특히 게놈 DNA의 스트레칭과 같은 더 긴 서열에서 영역을 분리하려고 할 때, 항상 관심 영역 을 중심으로 고유하게 절단되는 효소를 제한하지 않으며, 지역 내 또는 다른 서열의 다른 곳에서는 그렇지 않다. 이러한 제한 부위의 필요성을 피함으로써, 재결합은 유전 공학 구조를 만드는 훨씬 더 효율적이고 비용 효율적인 방법을 제공합니다.

이 비디오에서는 유전자 재조합의 원리를 소개하고, 유전자 표적 벡터를 재결합하기 위한 일반적인 프로토콜을 제공하고, 이러한 기술의 여러 응용 분야에 대해 논의할 것입니다.

먼저 재조합이 무엇이며 어떻게 적용할 수 있는지에 대해 살펴보겠습니다.

유전 적 재조합은 DNA 분자 사이의 정보의 교환을 수반한다.

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