저자는 다니엘 한미 Matlab 코드를 실행 하는 그의 도움에 대 한 학부 및 학부 알렉스 Boettcher 행동 실험 실행에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 이 프로젝트는 NSF IOS 1256799 R.L.M.에 의해 및 보너스 번호 T32DA007234에서 국립 보건원의 약물 남용에 국가 학회에 의해 지원 됩니다.

여기에서 설명한 모든 절차 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 미네소타의 대학에 의해 승인 되며 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에 따라 13 .
 1. 동물과 Cannulation 수술 나이의 대략 55 일에 일반적인 동물 공급 업체에서 <ol><li>받기 시리아 햄스터. 
	참고: 다양 한 실험적인 패러다임의 제약으로 인해 동물의 나이 다르지만 성적 행동에 대 한 그것은 성적으로 성숙 동물을 모두 대략 같은 나이 얻기 위해 중요 한.</li>
	<li>집 동물 제어 온도 (22 ° C)와 (14 h 빛 뒤에 10 h 13시 h 소등 어두운) 조명 환경, 음식과 물을 사용할 수 있는 광고 libitum 제외 하 고 실험 테스트의 기간 동안. 
	참고: 햄스터 계절 재현, 이후이 14시 10분 명암 주기 싫어 하지 그들의 자연 번 식 조건.</li>
	<li>는 1 주일 새 환경 순응 실험실에, 다음과 같은 무 균 양자 ovariectomies 및 intracranial stereotaxic cannulations (예를 들어, pentobarbital), 전신 마 취하에 수행 하 고 관리할 적절 한 제도 승인 수술 후 진통제 및 항생제 치료로 설명한 14 , 15. 
	참고: 성적인 행동의 연구를 위해 ovariectomies은 동물 실험 일정에 따라 외 인 호르몬과 성적 감수를 균일 하 게 유도 될 수 있다 성 호르몬의 주요 생 소스를 제거 하는 데 필요한.
	<ol><li>Dopaminergic와 glutamatergic 프로브 이식에 대 한 stereotaxically 임 플 란 트 가이드 cannulae (0.7 m m 직경; 그림 3) 관심의 영역으로 (예를 들어,이 실습 대상 바로 핵 accumbens (NAc)) 15 stepwise 세부 다른 곳에 설명 된 대로. 
		참고: 비록 동물 당 1 개의 조미료 또는 도파민 프로브의 단일 센서 녹음에서 제시 하는 데이터는,이 시스템 수 있습니다 단일 동물; 최대 4 센서 동시 녹음에 대 한 따라서, 1-4 cannulae 원하는 실험 설계 및 결과 따라 이식 될 수 있었다.
		<ol><li>Stereotaxic atlas를 사용 하 여 관심 영역의 이식 좌표 결정 (예를 들어, 골든 햄스터 두뇌 Morin에 의해 &#38; 나무), 센서 뇌 조직으로는 정 아래 1 m m를 확장 하는 마음에 유지.</li>
		</ol></li> <li>는 정 stereotaxically 복 부 등의 원하는 위치에 낮춘 다, 후 치과 아크릴, 스테인리스 뼈 나사와 플라스틱 머리 확보에서 건설 하는 모자를 사용 하 여 두개골에 부착 마운트 ( 그림 3 ; 15 대 한 자세한 내용은 참조).</li>
		<li>탄소 섬유 테스트용 contralateral 반구에 (350 μ m 직경, 길이 7.5 m m) 기준 전극 삽입. 
		참고: 특정 위치 또는 거리는 정에서 필요; 하지 않습니다. 참조 전극 편리 contralateral 반구에서 어디 든 지 놓일 수.</li>
	</ol></li></ol> 2. 바이오 센서 및 탄소 섬유 테스트 <ol><li>수술에서 회복의 1 주, 다음 성적 감수 유도 호르몬 못쓰게 처방 관리.
	<ol><li>Estradiol benzoate 면 화씨 기름 0.1 ml에서의 10 µ g을 피하 주사 (사우스 캐롤라이나), 약 48 h와 테스트, 성적 감수 남성 11 쪽으로 유도를 하는 성적 행동에 앞서 24 h.</li>
		<li>면 화씨 기름, 사우스 캐롤라이나, 성적 감수 11 유도 남자의 소개 이전에 4 h의 0.1 ml에서 황 체 호르몬의 주사 500 µ g.</li>
	</ol></li> <li>설치류의 사회적 행동 흰 빛과 붉은 빛 조건 16 , 17 테스트에서 변경 될 수 있습니다으로 그들의 매일 주기의 어두운 단계의 시작에서 모든 동물 테스트 , 18.</li> <li>효소 바이오 센서 조미료 테스트, 센서에는 생체 외에서 ( 그림 4) 15 , 이전에 설명 된 대로 사용 하기 전에 보정 19. <ol><li>게 보정 솔루션 20 mL 유리에서 테스트의 날에 신선한 원심 관. 분석 솔루션에 대 한 부드럽게 튜브를 거꾸로 하 여 7.4 m g L-글루탐산의 울트라 순수 H 2 O의 10 mL에 녹. 매우 순수한 H 2 o.의 10 ml에서 176.1 mg AA를 용 해 하 여 interferent 솔루션으로 만들기</li>
		<li>설정 기본 랩 링 스탠드의 기지에는 자력을 배치 하 여 교정 자력, 위에 20 mL 외피 비 커를 배치 하 고 중간 2 단자 클램프를 사용 하 여 장소에 클램프.
		<ol><li>추가 자석 저 어 바와 100 m m 인산 염의 20 mL 외피 비 커에 식 염 수 (PBS)를 버퍼링. 37 버퍼 솔루션 열 순환 물 목욕에 외피 비 커를 연결 ° c. 
			참고: 효소 바이오 센서 교정에서 수행 해야 체온 때문에 효소 활동은 온도 의해 영향을 받습니다.</li>
		</ol></li> <li>외피 비 커 위에 센서 캘리브레이션 홀더를 배치 하 고 4 채널 교정 프리 앰프 위에 직각 클램프를 사용 하 여 장소에 보안 설정. 기록 캘리브레이션 데이터를 데이터 컨디셔닝 및 수집 디바이스는 프리 앰프 연결.</li>
		<li>교정 홀더 꼭대기에 프로브를 배치 하 여 실험 녹음 하기 전에 조미료 (또는 다른 상업적으로 이용 가능한 바이오 센서 프로브 예, 포도 당에 대 한 관심의 다른 analytes) 각 효소 바이오 센서의 감도 테스트를 자 켓된 비이 커, 감지 캐비티와 염화는 (AgCl) 참조의 일부 물속 버퍼 솔루션에 연결 합니다.
		<li><ol>4 채널 교정 프리 앰프에 포트 테스트 (4)까지 각 센서를 연결 하기 전에 무료 다운로드 수집 소프트웨어를 활용 하 여 컴퓨터 인터페이스에 새 녹음을 시작. 안정적인 기준선에 도달 센서 허용.</li>
		</ol></li> <li>센서 안정 기준선에 도달 실정이 주사를 추가 시작. 교정 홀더에서 구멍을 사용 하 여 버퍼 솔루션에 피 펫 팁을 소개. 레코딩 소프트웨어에서 빠른 키 주석 도구를 사용 하 여 주석을 주사 될 때.
		버퍼 솔루션에 분석 솔루션의 <ol><li>pipetting 40 여 조미료의 만들 10 µ M 추가 μ. 센서 추가 사이 안정화를 기다립니다. 분석 솔루션의 3 주사 interferent AA 솔루션 (250 μ M 변화 농도에 대 한 50 μ 주입 볼륨)에서 단일 주사를 추가 하기 전에 추가. 
			참고: 경우 보정 조미료 농도 변화 (2.12 단계에서 효소 실험 기록 중 본) amperometric 신호에 변화 변환할 수 있다. 단계적 교육에 대 한 참조 15를 참조 하십시오. Dopaminergic 프로브가이 실험실에서 사용 되는 상업적인 공급자에 의해 제조 과정에서 보정 됩니다. 그들의 감도 효소 구성 요소 저하 19 시간이 지남에 줄일 수로 사용 시 조미료 프로브를 보정 해야 합니다. 탄소 섬유 전극 저하를 받아야 하지 않습니다, 때문에 이전에 선적 회사에 의해 수행 하는 교정 만으로는 따라 t로여기는 추가 처리를 통해 얇은 탄소 섬유 (350 μ m 직경) 손상의 증가 가능성.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>침구 동물에서 가져온 테스트 챔버를 라인 &#39; s 홈 케이지. 
	참고:이 여성 증가 &#39; s 친숙 테스트 챔버, 뿐만 아니라 여성 estradiol 치료에 대 한 응답에서에 의해 배 부 되었다 후 각 짝짓기 신호를 성적으로 자극 하는 남성 노출.</li>
	<li>가볍게 isoflurane 또는 다른 휘발성 마 취 유도 실에서 프로브 삽입 전에 동물을 anesthetize.</li>
	<li>가이드 정에서 폐색 obdurator를 제거 하 고 탄소 섬유 전극 또는 가이드 샤프트를 통해 효소 프로브 삽입.</li>
	<li>프로브 삽입 후 테스트 챔버에 동물 놓습니다. 
	참고:이 실습 사용 10 갤런 유리 수족관 (24.5 x 48.9 x 29.4 cm), 하지만 같은 영역의 둥근 약 실 또한 고용 수 있습니다.</li>
	<li>상용 소프트웨어 프로그램, 비디오 및 시간 고정 amperometric 신호를 기록 하는 시작에에서 대해서 자세히 설명 다른 15.</li>
	<li>녹음 시스템에 센서가 연결: 전기적 차폐 된 케이블 및 전기 회전을 통해 potentiostat. 헤드 마운트에 핀 첨부를 속이 고 하 여 센서 연결을 고정 시켜야 합니다. 필요한 경우 랩 필름을 사용 하 여 연결을 강화. 
	참고: 사용자 지정된 연결선 탄소 섬유 전극과 참조 전극에 연결할 potentiostat, 효소 조미료 센서는 potentiostat에 직접 연결 될 수 있습니다 하는 동안 필요 하다.</li>
	<li>허용 실험 테스트 하기 전에 두뇌에 있는 equilibrate를 센서. 
	참고: 평형 시간 기록 센서 마다 다릅니다 (예를 들어, 효소 센서 필요 2-4 h 평형, 탄소 섬유 전극만 약 30 분을 필요로 하는 동안). 두 종류의 센서를 이식 하는 경우 장시간 효소 센서에 대 한 equilibrate.</li>
	<li>센서 평형 후 테스트 챔버로 자극 남성 소개.</li>
	<li>실험 목표에 따라 추가 10-30 분에 대 한 녹음을 계속 자극 남성에 의해 성 기 삽입 (불리 수단)와 첫 번째 산 다음.</li>
	<li>여성 분리 행동 테스트, 다음 &#39; s 센서.</li>
	<li>테스트 약 실에서 두 햄스터를 제거합니다. 침구를 제거 하 고 70% 에탄올을 사용 하 여 챔버 청소. 
	참고: 때문에 탄소 섬유 녹음에 필요한 간단한 평형 단계 2.3 2.14 같은 날에 여러 동물 테스트를 반복할 수 있습니다. 효소 센서에 필요한 평형의 약 4 h, 때문에 동물의 차이로 인해 가능한 간 주제 변화를 제한 하는 일 당 하나의 동물을 테스트 하는 반면, &#39; 테스트에서 circadian 시간.</li>
</ol> 3. 희생과 관류 <ol><li>euthanizing 에이전트와 함께 여성 테스트 주제 anesthetize 깊이 테스트 기간에 따라 (예를 들어이 실험실 0.2 mL phenytoin pentobarbital 솔루션의 복 주사를 사용 하 여) .</li>
	<li>Transcardially perfuse 25 mM PBS, pH 7.6, 다음 20 분 고정 4 %paraformaldehyde-PBS를 사용 하 여 모든 순환 혈액 제거와 동물.</li>
	<li>두뇌를 제거 하 고에 후 위 ~ 30 mL 50 mL 원뿔 튜브를 하룻밤에 4 %paraformaldehyde 솔루션의.
	직렬 섹션 준비까지 <ol><li>스토어는 10%에서 뇌 자당 PBS 솔루션. 
		참고: 두뇌 저장 될 수 있습니다 2-주, 오염 물질의 잠재적인 성장을 방지 하기 위해 매주 자당 솔루션 변경.</li>
	</ol></li> <li>직렬 섹션 40 µ m에 뇌 동결 톰으로 이식된 영역을 통해 조각 또는 cryostat 앞에서 설명한 19.</li>
	<li>상용 접착제 코팅 슬라이드에 분할 영역을 순차적으로 탑재 (또는 20을 참조). 적어도 하룻밤 건조 허용.</li>
	<li>얼룩, cresyl 보라색 염료와 슬라이드 및 coverslip 앞에서 설명한 20.</li>
	<li>이미지 센서의 해 부 위치를 확인 하려면 밝은 분야 현미경 검사 법을 사용 하 여 슬라이드.</li>
</ol> 4. 행동 코딩 <ol><li>보기 무료 상업적으로 다운로드할 수 있는 소프트웨어를 사용 하 여 비디오에 주석을 추가 하 고 (재료의 표 참조) 정확 하 게 코드 동작 시간-amperometric 신호에 잠겨 슬로우 모션에서. 
	참고: 분석에서 MATLAB 코드를 사용 하 여 (참조 ), 시작 및 끝 각 여성 주석 &#39; s와 남성 &#39; s 행동.
	<li>여성 그녀의 dorsoflexion를 시작 하 고 그녀의 꼬리를 위쪽으로 결함 때 프레임에서 주석 startLordosis <ol>. 여성 여성 테스트 실에서 다른 위치로 readjusts 때 자주 발생 하는이 자세를 종료 되 면 endLordosis 주석.</li>
		<li>주석을 startAI 여성 절곡 자세에서 이며 남성 여성 쪽으로 그의 주 둥이 이동 &#39; s anogenital 지역, 스니핑, 사슬, 또는 그녀의 교장의 쾌 감 발생할 수 있습니다. 남성은 여성에 가까운 근접에서 그의 주 둥이 제거할 때 endAI 주석을 &#39; s anogenital 지역.</li>
		<li>남성에 접근 하 고 그의 forepaws 마운트 시도 (예를 들어, 측면, 엉덩이)의 방향에 장착 자세에서 여성에 배치 하는 때 startMount를 주석을.</li>
		<li>주석을 startIntromission 성공적인 밀어 여성에 탑재 된 남성 성 기 액세스를 얻을 때 &#39; s 질. 
		참고: 한 수단은 행동 탑재 밀어 남성 가시 그의 몸으로 그의 위 사지를 끌어, 앞으로, 그의 골반을 thrusts 및 침투를 나타내는 그의 꼬리를 위쪽으로 컬로 수단, 이전 발생 하 구별 (참조 < 강력한 클래스 "xfig" = > 그림 4 C).
		<ol><li>해당 하는 경우 주석을 루. 
			참고: 짝짓기 시 합을에 함께 성공적인 수단, 남성은 사정 됩니다. 하나는 실제 방출 시각화 수, 남자 햄스터는 주석을 발 운동의 발생에 루는 수단 21, 동안 그들의 뒷 발 움직임 속에 따라서 특성.</li>
		</ol></li> <li>남성과 그의 앞 두 발을 제거 했다 따라서,가 여자와 접촉 하는 때 endIntromission 및 endMount 프레임에 동시에 주석. 시각화를 자주 못하는 때문 그의 철수, 동시 관찰 짝짓기에 걸쳐 일관성과 신뢰성에 대 한 수 있도록 이러한 두 가지 동작이 코드. 
		참고: 짝짓기 시 합 다음과 성공적인 사정 또는 여성 하나 이상 탑재 다음 절곡 자세 휴식 때.</li>
	</ol></li></ol> 5. 예제 데이터 분석 참고: 도파민에 대 한 고정 잠재력 탄소 섬유와 효소 녹음의 사용을nd 조미료, 각각, 강장제 및 전기 릴리스의 phasic 패턴을 측정 하는 능력에 대 한 수 있습니다. 이 연구소는 무료, 상업 수집 시스템을 사용 하 고 기록 하 고 변환 소프트웨어 기록 아날로그에서 디지털으로 신호 (바이어스 0.600 V, 샘플링 속도 = 1 Hz).
<ol><li>예제 데이터 분석 프로토콜의 설명 <ol><li>다른 프로그램을 사용할 수 있지만 계량 강장제 및 MATLAB을 사용 하 여 기록 된 전기 신호에 phasic (과도) 변화.
		<ol><li>제시 데이터에 대 한 토 닉 신호 50 포인트 이동 평균 필터를 사용 하 여 계산. 신호의 과도 전용 정규화 된 표현 원시 데이터에서 토 닉 신호를 빼서 계산 됩니다. 다양 한 알고리즘 옵션 있다 phasic 봉우리를 식별 하는 경우 (예를 들어, 변경으로 1 보다 더 많은 신호에 봉우리를 라벨 평균 위에 SD).</li>
			<li>식별이 봉우리, 즉, 로컬 맥시 마의 위치, 정규화 된 신호에서 신호의 제곱 평균 설정 최소 피크 진폭 MATLAB 함수 peakfinder를 사용 하 여. 정규화 된 신호에서 감지 하는 봉우리의 위치에서 각 피크 진폭 추출에 사용 되었다. 와, 또는 상대 피크 neurochemical 조사에서 운전 수 시간 동기 행동의 식별에 대 한 봉우리를 검색할 수 있습니다.</li>
		</ol></li> <li>행동 주석 (3 단계 참조)에 따라 처리 된 데이터 세그먼트, 학생 &#39; s t-테스트 토 닉 신경 전달 물질 수준, 과도의 발생의 진폭의 차이 평가 하는 데 사용 했다 복싱 짝짓기 하는 동안 절곡 대 절곡 미리 짝짓기 시 합 중의 과도 전기 방출의 토 닉 패턴에 변화를 측정, 하 절곡 위치 (즉, 미리 짝짓기 시 합 lordosis) 짝짓기 시 합 전에 직접 동안 발생 하는 데이터 요소 짝짓기 시 합 중 데이터 요소에 비교 했다 t-테스트를 사용 하 여 세션</li>
	</ol></li> <li>설명된 데이터 분석 프로토콜에 대 한 원시 데이터의 준비 참고: 명시 된, 있지만 다른 프로그램 또는 분석 될 수 있습니다 동등 하 게 가능한 옵션, 위에서 설명한 MATLAB 코드를 사용 하려면 원시 데이터를 준비 해야 합니다에 다음과 같은 방법으로: <ol><li>주석 및 전압 파일 내보내기. 이렇게 하려면, 아래는 &#39; 파일 &#39; 탭을 선택은 &#39; 수출 &#39; 작동 하 고 선택는 &#39; 주석 &#39; 주석을 저장을 탭. 아래는 &#39; 파일 &#39; 탭을 선택은 &#39; 수출 &#39; 작동 하 고 선택는 &#34; TSV &#39; 전압 측정 TSV 확장 파일로 저장을 탭.</li>
		<li>스프레드시트 프로그램으로 각 파일 열기 및 다른 이름으로 저장 &#39; xls/xlsx &#39; 파일 MATLAB과 호환 수 있도록. 
		: 참고는 &#39; 주석 &#39; 파일, 추가 수동으로 해야 하는 주석 추가 후 수출 스프레드시트 프로그램을 시작 및 끝 (PreMBlordorsis 주석이 달린 두는 미리 짝짓기 시 합 절곡의 지시에 )와 짝짓기 시 합을 했 듯이이 시간 포인트 직접 비교 될 수 있다 단계에서 5.1.2.</li>
		<li>절곡 동작 또한 (startLordosis)을 시작으로 동시에 미리 짝짓기 시 합 절곡 (startPreMBlordosis)의 시작 주석을 탑재 동작을 포함 하 고 또한 새로운 것의 시작에 짝짓기 가릴 경우 여성 절곡 자세 유지.</li>
		<li>시작 처음 탑재 될 때 미리 짝짓기 시 합 절곡 (endPreMBlordosis)의 끝에 주석을.</li>
		<li>이 짝짓기 시 합 시작을 의미 하는 대로 endPreMBlordosis의 동시에 짝짓기 시 합 (startMB)의 시작을 주석을.</li>
		<li>는 탑재 루를 포함 하는의 끝에 짝짓기 시 합 (endMB)의 끝에 주석을 (단계 4.1.4.1 참조), 또는 다음 여성 &#39; 절곡 자세 (endLordosis)의 s 종료.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+brain+microdialysis.">Overview of brain microdialysis.</a> Curr Protoc Neurosci. , (2009).</li><li>Chaurasia, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAPS-FDA+Workshop+white+paper:+Microdialysis+principles,+application+and+regulatory+perspectives.">AAPS-FDA Workshop white paper: Microdialysis principles, application and regulatory perspectives.</a> Pharm Res. 24 (5), 1014-1025 (2007).</li><li>Lindsay, S., Kealey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> High performance liquid chromatography. , (1987).</li><li>Robinson, D. L., Venton, B. J., Heien, M. L., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+subsecond+dopamine+release+with+fast-scan+cyclic+voltammetry+in+vivo.">Detecting subsecond dopamine release with fast-scan cyclic voltammetry in vivo.</a> Clin Chem. 49 (10), 1763-1773 (2003).</li><li>Hu, Y., Mitchell, K. M., Albahadily, F. N., Michaelis, E. K., Wilson, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+glutamate+release+in+the+brain+using+a+dual+enzyme-based+electrochemical+sensor.">Direct measurement of glutamate release in the brain using a dual enzyme-based electrochemical sensor.</a> Brain Res. 659 (1-2), 117-125 (1994).</li><li>Agnesi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wireless+instantaneous+neurotransmitter+concentration+system-based+amperometric+detection+of+dopamine,+adenosine,+and+glutamate+for+intraoperative+neurochemical+monitoring.">Wireless instantaneous neurotransmitter concentration system-based amperometric detection of dopamine, adenosine, and glutamate for intraoperative neurochemical monitoring.</a> J Neurosurg. 111 (4), 701-711 (2009).</li><li>Erksine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solicitation+behavior+in+the+estrous+female+rat:+A+review.">Solicitation behavior in the estrous female rat: A review.</a> Horm Beh. 23 (4), 473-502 (1989).</li><li>Weiner, I., Gal, G., Rawlins, J. N., Feldon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+involvement+of+the+shell+and+core+subterritories+of+the+nucleus+accumbens+in+latent+inhibition+and+amphetamine-induced+activity.">Differential involvement of the shell and core subterritories of the nucleus accumbens in latent inhibition and amphetamine-induced activity.</a> Behav Brain Res. 81 (1-2), 123-133 (1996).</li><li>Heidbreder, C., Feldon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine-induced+neurochemical+and+locomotor+responses+are+expressed+differentially+across+the+anteroposterior+axis+of+the+core+and+shell+subterritories+of+the+nucleus+accumbens.">Amphetamine-induced neurochemical and locomotor responses are expressed differentially across the anteroposterior axis of the core and shell subterritories of the nucleus accumbens.</a> Synapse. 29 (4), 310-322 (1998).</li><li>Pierce, R. C., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+produces+sensitized+increases+in+locomotion+and+extracellular+dopamine+preferentially+in+the+nucleus+accumbens+shell+of+rats+administered+repeated+cocaine.">Amphetamine produces sensitized increases in locomotion and extracellular dopamine preferentially in the nucleus accumbens shell of rats administered repeated cocaine.</a> J Pharmacol Exp Ther. 275 (2), 1019-1029 (1995).</li><li>Pfaff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drive: Molecular and physiological analyses of a simple reproductive behavior. , (1999).</li><li>Carter, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postcopulatory+sexual+receptivity+in+the+female+hamster:+The+role+of+the+ovary+and+the+adrenal.">Postcopulatory sexual receptivity in the female hamster: The role of the ovary and the adrenal.</a> Horm Behav. 3 (3), 261-265 (1972).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. , (2011).</li><li>Meisel, R. L., Camp, D. M., Robinson, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microdialysis+study+of+ventral+striatal+dopamine+during+sexual+behavior+in+female+Syrian+hamsters.">A microdialysis study of ventral striatal dopamine during sexual behavior in female Syrian hamsters.</a> Beh Brain Res. 55 (2), 151-157 (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 4 Channel EEG/EMG/Biosensor Manual V005. , (2012).</li><li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Play-fighting+differs+from+serious+play+fighting+in+both+target+of+attack+and+tactics+of+fighting+in+the+laboratory+rats+Rattus+norvegicus.">Play-fighting differs from serious play fighting in both target of attack and tactics of fighting in the laboratory rats Rattus norvegicus.</a> Aggress Behav. 13 (3), 227-242 (1987).</li><li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+rates+of+attack,+defense+and+counterattack+during+the+developmental+decrease+in+play+fighting+by+male+and+female+rats.">Differential rates of attack, defense and counterattack during the developmental decrease in play fighting by male and female rats.</a> Dev Psychobiol. 23 (3), 215-231 (1990).</li><li>Pellis, S. M., Hastings, E., Shimizu, T., Kamitakahara, H., Komorowska, J., Forgie, M. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+orbital+frontal+cortex+damage+on+the+modulation+of+defensive+responses+by+rats+in+playful+and+non-playful+social+contexts.">The effects of orbital frontal cortex damage on the modulation of defensive responses by rats in playful and non-playful social contexts.</a> Behav Neurosci. 120 (1), 72-84 (2006).</li><li>Wakabayashi, K. T., Kiyatkin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+changes+in+extracellular+glutamate+induced+by+natural+arousing+stimuli+and+intravenous+cocaine+in+the+nucleus+accumbens+shell+and+core.">Rapid changes in extracellular glutamate induced by natural arousing stimuli and intravenous cocaine in the nucleus accumbens shell and core.</a> J Neurophysiol. 108 (1), 285-299 (2012).</li><li>Kapelsohn, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+for+cutting,+mounting,+and+staining+tissue+for+neural+histology.">Improved methods for cutting, mounting, and staining tissue for neural histology.</a> Protoc Exch. , (2015).</li><li>Siegel, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+7:+Male+sexual+behavior.">Chapter 7: Male sexual behavior.</a> The Hamster: Reproduction and Behavior. , (1985).</li><li>Day, J. J., Carelli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nucleus+accumbens+and+pavlovian+reward+learning.">The nucleus accumbens and pavlovian reward learning.</a> Neuroscientist. 13 (2), 148-159 (2007).</li><li>Meisel, R. L., Mullins, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+experience+in+female+rodents:+Cellular+mechanisms+and+functional+consequences.">Sexual experience in female rodents: Cellular mechanisms and functional consequences.</a> Brain Res. 1126 (1), 56-65 (2006).</li><li>Meredith, G. E., Pennartz, C. M., Groenewegen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+framework+for+chemical+signaling+in+the+nucleus+accumbens.">The cellular framework for chemical signaling in the nucleus accumbens.</a> Prog Brain Res. 99, 3-24 (1993).</li><li>Hedges, V. L., Staffend, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+mechanisms+of+reproduction+in+females+as+a+predisposing+factor+for+drug+addiction.">Neural mechanisms of reproduction in females as a predisposing factor for drug addiction.</a> Front Neuroendocrinol. 31 (2), 217-231 (2010).</li></ol>

저자는 공개 없다.

비록 비교적 간단 하 고,이 기술을 채용 하는 경우 몇 가지 문제가 발생할 수 있습니다. 첫째, 조사의 stereotaxic 배치 정확 해야: microdialysis 샘플 조사를 둘러싼 extracellular 환경에의 더 넓은 반경, 달리이 기술은 허용 직접 접촉으로 오는 신경 전달 물질의 측정 와 조사. 둘째, 섬유의 작은 폭으로 인해 탄소 섬유 녹음의 경우 파손 발생할 수 있습니다, 그리고 신중한 주의 프로브를 삽입 해야 합니다. G...

깨어 동작 동물에서 신경 전달 물질 방출 측정 하는 능력을 허용 한다 neurotransmission는 강력한 도구를 조사 메커니즘 및 모두 기본 회로의 공간 및 시간 패턴을 가진 특정 동작을 연결 하는 연구자를 자연 그리고 실시간으로 작동 동작입니다. 역사적으로, microdialysis 뇌1의 세포 외 환경에서 모두 전기 반응과 nonreactive 물질 측정 하 고용 하고있다. 이 기술은 반 투과성 빈 섬유 막2의 팁과 작은 샤프트 구성 microdialysis 프로브를 통해 extracellular 액체에 유사한 이온 성분의 수성 해결책의 지속적인 흐름을 사용 합니다. 프로브 삽입 후 신경 전달 물질 또는 관심의 다른 analytes 수 있습니다 교차 반 투과성 막 이후 분석에 대 한 간격-고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 수집 되 고 전에 수동 확산에 의해 한 일반적으로, 별도로 활용 하는 분석 화학 기술 식별, 그리고 이질적인 혼합물3구성 요소를 계량.
Microdialysis 관심의 거의 모든 분석을 측정 하는 데 사용할 수 있는 중요 한 기술 이지만, 시간적인 해상도 수십 분1,2분 순서 최대 샘플링 속도와 낮은. 빠른 스캔 주기적 voltammetry (FSCV), electroactive 종의 산화 환 원 잠재력에 의존 하는 기술 발명 extracellular 액체의 분석의 즉각적인 농도 근처 명료 수 있습니다. 간단히 (참조 로빈슨 외. 4 광범위 한 검토를 위해), 전극 인상 하 고 낮은 전압 빠른 시간 규모4에 삼각형 웨이브 패션에 적용 됩니다. 전압이 올바른 범위에 있을 때 관심의 화합물은 반복적으로 산화 고 감소. 작은 교류 전류를 생성 하는 전자의 운동에이 산화 및 감소 결과. 산화 및 감소 마이크로초에 발생 하는 화합물의 초 규모 요금 걸릴 장소를 검색 합니다. 결과에서 프로브에 의해 만들어진 배경 현재 빼서 하나 현재 플롯 각 화합물에 대 한 전압을 생성할 수 있습니다. 전압 진동의 시간 규모 알려져 있기 때문에 이러한 데이터는 현재의 시간의 함수로 계산 하 사용할 수 있습니다. 따라서, 화합물의 상대적인 농도 각 산화에 전송 되는 전자의 수와 감소 반응4알려져으로 결정 될 수 있습니다.
이 화학 특이성 및 높은 시간 해상도 확인 FSCV vivo에서화학 농도 변화를 감지 하는 강력한 기술. 그러나, 이러한 매니폴드 장점에도 불구 하 고이 기술은 광범위 한 기술적 전문성과 고가의 장비 및 설치가 필요합니다. 또한, nonelectroactive 신경 전달 물질 (예, 조미료)이이 기술을 사용 하 여 측정 될 수 없습니다. 다행히도, 이러한 발명의 상용화로 서 전기 화학5의 분야에서 기술 발전 깨어 동작 동물에서 비 electroactive 신경 전달 물질을 측정 하는 비교적 간단한 방법 소개 했다 일시적인 정밀도는 기술을 타협 하지 않고 효소 바이오 센서 기술 이라고 합니다. 이 기술은 효소 변환을 사용 관심의 nonelectroactive 신경 전달 물질의 두 개의 기판으로 적용된 가능성5에 의해 생성 되는 amperometric 산화 현재로 감지 하는 과산화 수소 electroactive 중 하나는 . 상업적으로 이용 가능한 바이오 센서 프로브 생 interferents의 기여를 경쟁적으로 줄여 관심의 analytes를 측정 선택적으로 ( 그림 1참조). 조미료, 경우 일반적인 interferent ascorbic 산 (AA)의 기여는 경쟁적으로 감소 측정된 전류에 공동 electroactive 비 하 AA를 변환 하는 센서의 활성 효소 표면 산화 효소 AA 지역화 dihydroascorbate 그리고 물입니다. 또한, 부정 청구 Nafion 폴리머 레이어 효소 레이어에서 현재 생 음이온 화합물 제외합니다.
이 같은 바이오 센서 실험 설치 프로그램 electroactive 신경 전달 물질 FSCV에서 측정할 수 있지만 대신 고정 잠재력 기록6를 사용 하 여. 진동 전압 FSCV에 적용, 달리 고정 잠재력 기록에서 전압은 유지는 산화 환 원에 관심의 분석에 대 한 잠재적인. 여러 신경 전달 물질은 압도적으로 한 신경 전달 물질 쪽으로 왜곡 하는 뇌 영역에서 동일한 산화 환 원 잠재력, 있을 수 있습니다 FSCV 보다 덜 화학적 선택적 이더라도,이 접근의 턴키 자연 화학 물질의 부족을 능가 하는 것 특이성입니다.
모두 electroactive nonelectroactive 신경 전달 물질 릴리스에 거의 실시간으로 측정 하 고 특정 행동의 이벤트와 연결할 수 수렴 신경 전달 물질 자료를 검토 하는 기회를 제공 한다. 이 원고는 응답 깨어 동작 햄스터에 자연적인 보상으로 도파민, 조미료 neurotransmission가이 시스템의 사용을 자세히 설명 합니다. 이 문서의 목표는 다른 행동과 실험 패러다임을 조사 하기 위한 그것의 타당성을 보여주는 목표와 함께 여성 햄스터에 성적인 행동 중이 신경 전달 물질 자료를 측정 하는 과정을 자세히.
햄스터는 전기 녹음에 사용 하기 위해 이상적인 모델 역사적으로, 쥐 및 쥐 모델 성적 행동의 학문에 고용 되었다 있다. 이러한 설치류 종 귀 방도 추적 하 고 궁극적으로는 여성7을 탑재 하는 남성을 유혹 하 고 호핑, 다트를 포함 하는 수많은 여성 요청 동작을 관련 된 동적 copulatory 시퀀스에 참여. 남성 (또는 질 침투 없이)에 의해 장착 기간 동안 여성에에서 종사 하는 그녀의 성적 행동 자세 ( 절곡되 나) 또한 활성 요청 동작을 다시 시작 하기 전에 몇 초 동안만 단 몇 초 지속. 이 패턴의 부동성의 짧은 기간과 interspersed 활동의 높은 수준의 구성 문제의 측정 neurotransmission 동물 행동에 대 한 문제 이다. 첫째, 운동 유물 amperometric 녹음 신경 활동에 관련 되지 않은 수 있습니다. 둘째,는 운동 특정 뇌 영역에 특정 신경 전달 물질의 출시와 함께 연결 됩니다. 예를 들어 도파민 방출 등 쪽과 복 부가8,9, psychostimulant에 따라 도파민의 microdialysis 측정을 위한 기초를 형성 했다 찾는 운동 활동 결합 되어 있다 관리10. 때문에 mos에 여성 일반적인 권유 동작어렵게 neurotransmission에 변화만 최근 공동으로 성적 행동의 명시적 구성 요소에 돌리다, t 설치류, 운동 활동의 높은 수준을 포함 하 고 10 분 성적 행동 테스트 일괄으로 표시 됩니다. 분입니다.
여성 성적인 행동의 neurochemical 프로필을 분석 하이 랩 종은 성적 행동을 동반 하는 최소한의 운전 활동을 추구. 시리아 햄스터 (Mesocricetus auratus)에 copulatory 시퀀스 neurochemical 녹음 권유 행동 일반적으로 쥐 및 쥐11본의 부족에 이상적입니다. 결과적으로, 여성 햄스터 입력 하 고 테스트 세션1210 분 중 9 분 이상을 위한 절곡 자세 유지. 여성, vivo에서 외부 운동 운동의 부족으로 남자와의 성적인 상호 작용의 구성 요소와 연관 될 수 있는 전기 녹음을 얻을 수 있습니다.
햄스터에 copulatory 관찰 소개 후에 남성 자극 동물의 테스트 챔버로, 남성 그녀의 (그림 2A)를 탑재 하기 전에 여성의 anogenital 조사 (AI)에 처음 참여 한다. 위해서 탑재 하 남성, 여성 절곡, 그녀 그녀를 다시 아치 고 장착 남성 성 기에 대 한 액세스 그녀의 음부를 얻을 수 있도록 그녀의 꼬리를 굴절 이라고 받아들이는 성적 자세를 가정 합니다. 남성 여성, 두 발 (그림 2B), 그녀의 엉덩이 쪽을 clasping 탑재 하 고 성 기 수단 (그림 2C)를 얻기 위해 시도에서 밀어 시작 것입니다. 남성은 뿐만 아니라 여러 번 결국 루를 달성 하기 전에 intromit 마운트 (삽입) 없이 여성 것입니다. 마운트 및 사정에 지도 하는 intromissions의이 시퀀스 "copulatory 시 합" 이라고 불린다. 남성은 단일 세션 내에서 여러 copulatory 복싱을 있을 것 이다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1339">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Nembutal</td>
			<td style="width:183px;">Oak Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td style="width:323px;">76478-501-50</td>
			<td style="width:504px;">Pentobarbital sodium injection, USP. This lab uses 8.5mg/100g body weight, injected intraperotineally.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Loxicom analgesic&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Norbrook Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:323px;">6451603670</td>
			<td style="width:504px;">NSAID antinflammatory and analgesic used for post-operative pain control. Generic: meloxicam.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Enroflox antibiotic&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Norbrook Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:323px;">5552915411</td>
			<td style="width:504px;">Fluoroquinolone antibiotic for post-operative infection prevention. Generic: Enrofloxacin.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Beuthanasia-D&#160;</td>
			<td style="width:183px;">Merck Animal Health</td>
			<td style="width:323px;">00061047305</td>
			<td style="width:504px;">Pentobarbital Sodium, Phenytoin Sodium euthanasia agent.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bone screws</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>8111-16</td>
			<td style="width:504px;">1/8&#34; bone screw (Pkg. of 16) used to affix skull cap to skull.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Dental acrylic (Bosworth Duz-All)</td>
			<td>Bosworth&#160;</td>
			<td>166261C&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Self curing dental acrylic is used in construction of a skull cap to affix cannula and head mount to skull.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Hardware biosensor setup&#160;</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>8400-K2</td>
			<td style="width:504px;">Pinnacle offers complete hardware kits for new users of our tethered biosensor system for rats. Kits include a commutator, preamplifier, and data conditioning and acquisition system</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Base video computer package</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>9000-K1</td>
			<td style="width:504px;">The base computer package includes a preconfigured computer with ample hard disk storage, a high-definition monitor, a keyboard and mouse, an uninterruptible power supply, and all necessary cables.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Video EQ700 EverFocus camera&#160; package</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>&#160;9000-K10&#160;</td>
			<td style="width:504px;">EQ700 night vision capable box camera with independent IR source was obtained as part of Pinnacle video computer package. Dome camera (9000-K9) and HD camera (9000-K11) options are also available.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;">Sirenia Acquisition software</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>Free--available to download from pinnaclet.com</td>
			<td style="width:504px;">Sirenia&#160;Acquisition provides a single platform for recording data from any Pinnacle hardware system. The software features synchronization of all data streams, user-configurable settings, data consolidation, and multiple export options. In addition, the software includes basic review and analysis modules for biosensor recordings. Sirenia&#160;delivers free ll-in-one software that is ideal for data acquisition and review.</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;">Tethered rat&#160;in vitro&#160;calibration kit</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>7000-K2-T-BAS&#160;</td>
			<td style="width:504px;">In order to relate the current changes measured by a biosensor to actual changes in analyte concentration, it is necessary to calibrate the biosensor prior to implantation into the animal. The process also confirms the integrity and selectivity of the sensors.&#160;Calibration kit includes 20 mL jacketed beaker (#7058), 1/2&#34; by 1/8&#34; magnetic stir bar (#7059), right angle clamp (#7056), 2 prong single-adjustment clamp (#7055), 4-channel calibration preamplifer (#7053), and calibration holder (#7051).&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Stir plate&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6795-410D</td>
			<td style="width:504px;">Corning digital Stirrer, 5&#34; x 7&#34;, 120 VAC used to spin magnetic stirrer in jacketed beaker during in vitro calibration of glutamate biosensors.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water bath capable of closed loop circulation</td>
			<td>PolyScience</td>
			<td>8006A11B</td>
			<td style="width:504px;">PolyScience 8006A11B 6L Standard Digital Heated Circulating Bath, 120VAC water bath was used with plastic tubing to heat jacketed beaker to physiological temperature.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carbon fiber sensor with BASi rat cannulae</td>
			<td>Pinnacle Technology, Inc.</td>
			<td>7002-CFS</td>
			<td style="width:504px;">Carbon fiber electrode used for recording dopamine neurotransmission.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ag/AgCl reference electrode</td>
			<td>Pinnacle Technology, Inc.</td>
			<td>7065</td>
			<td style="width:504px;">Necessary for carbon fiber recordings.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Glutamate biosensors&#160;</td>
			<td>Pinnacle Technology, Inc.</td>
			<td>7001&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Enzymatic biosensor probe used for recording glutamatergic neurotransmission.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BASi guide cannulae</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>7030&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Guide cannulae implanted into brain region of interest to guide probe.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BASi cannula plastic headpiece for rats&#160;</td>
			<td>Pinnacle Technologies, Inc.</td>
			<td>7011&#160;</td>
			<td style="width:504px;">Headmount stabilizes probe and attaches to potentiostat.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring in vivo changes in extracellular neurotransmitters during naturally rewarding behaviors in female syrian hamsters

신경 전달 물질 방출 빠른 시간 규모를 측정 하는 능력 수 있습니다 특정 동작 또는 조작;에 연결 될 neurotransmission의 패턴을 기본 메커니즘 및 회로 elucidating에 강력한 도구입니다. 측정 하는 뇌의 거의 모든 분석을 수십 년 동안 microdialysis의 기술을 사용 하는 동안이 기법은 시간적 해상도 제한 됩니다. 또는 빠른 검색 주기적 voltammetry가 이다 일시적으로 정확 하 고 매우 민감한; 그러나,이 기술적으로 어려운 방법 관심의 분석의 electroactivity에 의존, 때문에 nonelectroactive 물질 (예를들면, 신경 전달 물질 글루타민 산 염)를 검출 하는 가능성은 제거 됩니다. 이 종이 고정 잠재적인 amperometry 및 임시 정밀 electroactive와 nonelectroactive 신경 전달 물질을 측정 하는 효소 바이오 센 싱 결합 하는 턴키 시스템의 사용을 자세히 설명 합니다. 이러한 두 가지 강력한 기술을의 페어링를 비교적 쉽게 토 닉과 phasic neurotransmission의 측정에 대 한 허용 하 고 허용 하는 동시에 여러 신경 전달 물질의 기록. 이 원고의 목표는 도파민과 조미료 neurotransmission에서 비보에 표시의 궁극적인 목표와 여성 햄스터에 자연스럽 게 보상 행동 (즉, 성적 행동)을 사용 하 여 측정 하는 과정을 설명 하는 이 분석 결과 다른 행동과 실험 패러다임 검사의 기술적 타당성

전기 화학 및 코딩 방법론 위에서 설명한 동작을 사용 하 여,이 연구소는 vivo에서 성적인 행동의 기록 중 토 닉과 도파민에 조미료 phasic 변동 특성 하기 시작 했다. 이 방법론의 일시적으로 정확한 방식으로 인해 우리 보다 정확 하 게 성적인 행동; 동안 neurotransmission을 특성 수 있습니다. 뿐만 아니라 개별 copulatory 동작 (예를 들어, 수단, 사정)의 여성의 접수 ?...

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Measuring In Vivo Changes in Extracellular Neurotransmitters During Naturally Rewarding Behaviors in Female Syrian Hamsters

이 문서 내용을 사용 하 여 탄소 섬유 전극 효소 바이오 센서 기술에 자연적인 보상 행동 동안 도파민과 높은 시간 해상도와 조미료의 릴리스를 측정 하는 고정 잠재력 amperometric 녹음의 사용은 여자는 햄스터

자연스럽 게 여성 시리아 햄스터에 동작을 보람 있는 하는 동안 Extracellular 신경 전달 물질의 생체 내에서 변화를 측정

The ability to measure neurotransmitter release on a rapid time scale allows patterns of neurotransmission to be linked to specific behaviors or ...

measuring-vivo-changes-extracellular-neurotransmitters-during

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JoVE Journal

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Neuroscience

Unit 1

Measuring In Vivo Changes in Extracellular Neurotransmitters During Naturally Rewarding Behaviors in Female Syrian Hamsters

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Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural connectivity form during development. In mice, retinofugal projections are arranged in a topographic manner and form eye-specific layers in the Lateral Geniculate Nucleus (dLGN) of the thalamus and the Superior Colliculus (SC). The development of these precise patterns of retinofugal projections has typically been studied by labeling populations of RGCs with fluorescent dyes and tracers, such as horseradish peroxidase1-4. However, these methods are too coarse to provide insight into developmental changes in individual RGC axonal arbor morphology that are the basis of retinotopic map formation. They also do not allow for the genetic manipulation of RGCs.
Recently, electroporation has become an effective method for providing precise spatial and temporal control for delivery of charged molecules into the retina5-11. Current retinal electroporation protocols do not allow for genetic manipulation and tracing of retinofugal projections of a single or small cluster of RGCs in postnatal mice. It has been argued that postnatal in vivo electroporation is not a viable method for transfecting RGCs since the labeling efficiency is extremely low and hence requires targeting at embryonic ages when RGC progenitors are undergoing differentiation and proliferation6. 
In this video we describe an in vivo electroporation protocol for targeted delivery of genes, shRNA, and fluorescent dextrans to murine RGCs postnatally. This technique provides a cost effective, fast and relatively easy platform for efficient screening of candidate genes involved in several aspects of neural development including axon retraction, branching, lamination, regeneration and synapse formation at various stages of circuit development. In summary we describe here a valuable tool which will provide further insights into the molecular mechanisms underlying sensory map development.

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

We demonstrate an in vivo electroporation protocol for transfecting single or small clusters of retinal ganglion cells (RGCs) and other retinal cell types in postnatal mice over a wide range of ages. The ability to label and genetically manipulate postnatal RGCs in vivo is a powerful tool for developmental studies.

마우스 망막 신경절 세포 Transfection로 생체내에 Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

연구

신경과학

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron is damaged by injury or disease, it may regenerate. Cell-intrinsic and extrinsic factors influence the ability of a neuron to regenerate and restore function. Recently, the nematode C. elegans has emerged as an excellent model organism to identify genes and signaling pathways that influence the regeneration of neurons1-6. The main way to initiate neuronal regeneration in C. elegans is laser-mediated cutting, or axotomy. During axotomy, a fluorescently-labeled neuronal process is severed using high-energy pulses. Initially, neuronal regeneration in C. elegans was examined using an amplified femtosecond laser5. However, subsequent regeneration studies have shown that a conventional pulsed laser can be used to accurately sever neurons in vivo and elicit a similar regenerative response1,3,7.
We present a protocol for performing in vivo laser axotomy in the worm using a MicroPoint pulsed laser, a turnkey system that is readily available and that has been widely used for targeted cell ablation. We describe aligning the laser, mounting the worms, cutting specific neurons, and assessing subsequent regeneration. The system provides the ability to cut large numbers of neurons in multiple worms during one experiment. Thus, laser axotomy as described herein is an efficient system for initiating and analyzing the process of regeneration.

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

A protocol to cut neurons in C. elegans with a MicroPoint pulsed laser is presented. We describe setting up the system, immobilizing worms, and severing labeled neurons. Advantages include a relatively low-cost system and the ability to sever neuronal processes or ablate cells in vivo.

C로 생체내 레이저 Axotomy에서 엘레간스

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from individual neurons are critical for understanding how neural circuits function under natural conditions. Traditionally, these recordings have been performed 'blind', meaning the identity of the recorded cell is unknown at the start of the recording. Cellular identity can be subsequently determined via intracellular1, juxtacellular2 or loose-patch3 iontophoresis of dye, but these recordings cannot be pre-targeted to specific neurons in regions with functionally heterogeneous cell types. Fluorescent proteins can be expressed in a cell-type specific manner permitting visually-guided single-cell electrophysiology4-6. However, there are many model systems for which these genetic tools are not available. Even in genetically accessible model systems, the desired promoter may be unknown or genetically homogenous neurons may have varying projection patterns. Similarly, viral vectors have been used to label specific subgroups of projection neurons7, but use of this method is limited by toxicity and lack of trans-synaptic specificity. Thus, additional techniques that offer specific pre-visualization to record from identified single neurons in vivo are needed. Pre-visualization of the target neuron is particularly useful for challenging recording conditions, for which classical single-cell recordings are often prohibitively difficult8-11. The novel technique described in this paper uses retrograde transport of a fluorescent dye applied using tungsten needles to rapidly and selectively label a specific subset of cells within a particular brain region based on their unique axonal projections, thereby providing a visual cue to obtain targeted electrophysiological recordings from identified neurons in an intact circuit within a vertebrate CNS.
The most significant novel advancement of our method is the use of fluorescent labeling to target specific cell types in a non-genetically accessible model system. Weakly electric fish are an excellent model system for studying neural circuits in awake, behaving animals12. We utilized this technique to study sensory processing by "small cells" in the anterior exterolateral nucleus (ELa) of weakly electric mormyrid fish. "Small cells" are hypothesized to be time comparator neurons important for detecting submillisecond differences in the arrival times of presynaptic spikes13. However, anatomical features such as dense myelin, engulfing synapses, and small cell bodies have made it extremely difficult to record from these cells using traditional methods11, 14. Here we demonstrate that our novel method selectively labels these cells in 28% of preparations, allowing for reliable, robust recordings and characterization of responses to electrosensory stimulation.

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde transport of fluorescent dye labels a sub-population of neurons based on anatomical projection. Labeled axons can be visually targeted in vivo, permitting extracellular recording from identified axons. This technique facilitates recording when neurons cannot be labeled through genetic manipulation or are difficult to isolate using 'blind' in vivo approaches.

역행 형광 라벨이 확인 된 신경 세포의 표적 세포 외 단일 단위 기록을 허용<em&gt; 생체 내</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains technically challenging. One approach, Activation-Induced Manganese-enhanced MRI (AIM MRI), has been used successfully to map neuronal activity in rodents 1-5. In AIM MRI, Mn2+ acts a calcium analog and accumulates in depolarized neurons 6,7. Because Mn2+ shortens the T1 tissue property, regions of elevated neuronal activity will enhance in MRI. Furthermore, Mn2+ clears slowly from the activated regions; therefore, stimulation can be performed outside the magnet prior to imaging, enabling greater experimental flexibility. However, because Mn2+ does not readily cross the blood-brain barrier (BBB), the need to open the BBB has limited the use of AIM MRI, especially in mice.
One tool for opening the BBB is ultrasound. Though potentially damaging, if ultrasound is administered in combination with gas-filled microbubbles (i.e., ultrasound contrast agents), the acoustic pressure required for BBB opening is considerably lower. This combination of ultrasound and microbubbles can be used to reliably open the BBB without causing tissue damage 8-11.
Here, a method is presented for performing AIM MRI by using microbubbles and ultrasound to open the BBB. After an intravenous injection of perflutren microbubbles, an unfocused pulsed ultrasound beam is applied to the shaved mouse head for 3 minutes. For simplicity, we refer to this technique of BBB Opening with Microbubbles and UltraSound as BOMUS 12. Using BOMUS to open the BBB throughout both cerebral hemispheres, manganese is administered to the whole mouse brain. After experimental stimulation of the lightly sedated mice, AIM MRI is used to map the neuronal response.
To demonstrate this approach, herein BOMUS and AIM MRI are used to map unilateral mechanical stimulation of the vibrissae in lightly sedated mice 13. Because BOMUS can open the BBB throughout both hemispheres, the unstimulated side of the brain is used to control for nonspecific background stimulation. The resultant 3D activation map agrees well with published representations of the vibrissae regions of the barrel field cortex 14. The ultrasonic opening of the BBB is fast, noninvasive, and reversible; and thus this approach is suitable for high-throughput and/or longitudinal studies in awake mice.

A technique is described for broadly opening the blood-brain barrier in the mouse using microbubbles and ultrasound. Using this technique, manganese can be administered to the mouse brain. Because manganese is an MRI contrast agent that accumulates in depolarized neurons, this approach enables imaging of neuronal activity.

초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs through activation of their ion channels and neurotransmitter receptors, and process information in part through activity-dependent release of gliotransmitters. Furthermore, astrocytes constitute the main uptake system for glutamate, contribute to potassium spatial buffering, as well as to GABA clearance. These cells therefore constantly monitor synaptic activity, and are thereby sensitive indicators for alterations in synaptically-released glutamate, GABA and extracellular potassium levels. Additionally, alterations in astroglial uptake activity or buffering capacity can have severe effects on neuronal functions, and might be overlooked when characterizing physiopathological situations or knockout mice. Dual recording of neuronal and astroglial activities is therefore an important method to study alterations in synaptic strength associated to concomitant changes in astroglial uptake and buffering capacities. Here we describe how to prepare hippocampal slices, how to identify stratum radiatum astrocytes, and how to record simultaneously neuronal and astroglial electrophysiological responses. Furthermore, we describe how to isolate pharmacologically the synaptically-evoked astroglial currents.

The preparation of acute brain slices from isolated hippocampi, as well as the simultaneous electrophysiological recordings of astrocytes and neurons in stratum radiatum during stimulation of schaffer collaterals is described. The pharmacological isolation of astroglial potassium and glutamate transporter currents is demonstrated.

급성 Hippocampal 슬라이스에 Synaptically-evoked Astroglial와 Neuronal 응답의 듀얼 Electrophysiological 레코딩

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

두피 뉴런에서 생체 내 두 - 광자의 영상은 경험에 의존 분자 변경

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

본래 Vomeronasal 기관 및 액세서리 후각 망울의 생체 준비

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life. The cold plantar assay allows the objective and inexpensive assessment of cold sensitivity in mice, and can quantify both analgesia and hypersensitivity. Mice are acclimated on a glass plate, and a compressed dry ice pellet is held against the glass surface underneath the hindpaw. The latency to withdrawal from the cooling glass is used as a measure of cold sensitivity.
Cold sensation is also important for survival in regions with seasonal temperature shifts, and in order to maintain sensitivity animals must be able to adjust their thermal response thresholds to match the ambient temperature. The Cold Plantar Assay (CPA) also allows the study of adaptation to changes in ambient temperature by testing the cold sensitivity of mice at temperatures ranging from 30 &#176;C to 5 &#176;C. Mice are acclimated as described above, but the glass plate is cooled to the desired starting temperature using aluminum boxes (or aluminum foil packets) filled with hot water, wet ice, or dry ice. The temperature of the plate is measured at the center using a filament T-type thermocouple probe. Once the plate has reached the desired starting temperature, the animals are tested as described above.
This assay allows testing of mice at temperatures ranging from innocuous to noxious. The CPA yields unambiguous and consistent behavioral responses in uninjured mice and can be used to quantify both hypersensitivity and analgesia. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

The Cold Plantar Assay (CPA) measures cold responsiveness between 30 &#176;C and 5 &#176;C, and can also measure cold adaptation. This protocol describes how to use the CPA to measure cold hypersensitivity, analgesia, and adaptation in mice.

마우스에 콜드 민감도 및 적응을 결정하기위한 간단하고 저렴한 방법

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters (CNiFERs) for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

Cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) provide a new tool for neuroscientists to optically detect the release of neurotransmitters in the brain in vivo. A specific CNiFER is created from a human embryonic kidney cell that stably expresses a specific G protein-coupled receptor, which couples to Gq/11 G proteins, and a FRET-based Ca2+-detector, TN-XXL. Activation of the receptor leads to an increase in the FRET signal. CNiFERs have nM sensitivity and a temporal response of seconds because a CNiFER clone utilizes the native receptor for a particular neurotransmitter, e.g., D2R for dopamine. CNiFERs are directly implanted into the brain, enabling them to sense neurotransmitter release with a spatial resolution of less than one hundred &#181;m, making them ideal to measure volume transmission in vivo. CNiFERs can also be used to screen other drugs for potential cross-reactivity in vivo. We recently expanded the family of CNiFERs to include GPCRs that couple to Gi/o G proteins. CNiFERs are available for detecting acetylcholine (ACh), dopamine (DA) and norepinephrine (NE). Given that any GPCR can be used to create a novel CNiFER and that there are approximately 800 GPCRs in the human genome, we describe here the general procedure to design, realize, and test any type of CNiFER.

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters CNiFERs for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

We present a protocol to create cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) for the optical detection of volumetric neurotransmitter release.