This study was supported by the National Health and Medical Research Council of Australia (NHMRC) Project grant 1022839. AJH is an Australian Research Council (ARC) FT3 Future Fellow (FT100100835). The Florey Institute of Neuroscience and Mental Health acknowledges support from the Victorian Government&#8217;s Operational Infrastructure Support Grant.

참고 : 동물의 모든 실험 절차는 신경 과학 및 정신 건강 동물 윤리위원회의 플로리 연구소의 승인을 호주의 국립 보건 의학 연구위원회 (Medical Research Council)을 준수 하였다는 과학적인 목적을 위해 동물의 관리 및 사용에 대한 실천의 코드 (7 번째 버전을 발표 2004). 1. 환경 노는 <ol><li> 성별 페어링 <ol><li> 성적으로 성숙 (&gt; 8 주 이전), 연령대 남성과 여성의 마우스를 사용합니다. 참고 : 우리는 일반적으로 C57BL / 6 마​​우스를 사용하지만,이 프로토콜에 스위스의 마우스를 사용하여 동일한 결과가 있었다. 우리는 일반적으로 N = (N = 4 수컷) N = 2 남성에서 남성 쌍으로 나누어, 각 실험에 대해 N = 8 수컷 및 N = 8 암컷을 사용하여 2 암형 암 쌍 (N = 4 암컷), 및 N = 4 남성 여성 쌍 (N = 4 남성과 N = 4 여성). </li><li> 동물 지주 시설, 그룹-집에 도착하자마자&gt; 3 일간 성별 마우스는 순응한다. 여기 통해 서심은 성별 페어링, 외부 환경의 자극을 유지 (예 : 주위 온도, 빛 : 어두운주기, 음식, 물, 처리 및 청소) 상수 또는 모든 마우스에 동일하게 배포 할 수 있습니다. </li><li> 무작위로 남성 - 남성 쌍, 여성 - 여성 쌍, 또는 암수 한 쌍의 각각의 마우스를 할당합니다. 음식과 물에 대한 광고 무제한 액세스 격리에 깨끗한 케이지 (2 마우스 / 케이지)에 각 쌍을 배치하고 단지 7 일간 계속이 방법으로 집. 참고 : 일상적인 축산이 기간 동안 OK이지만 모든 마우스에 동등하게 분배해야합니다. 남성과 여성의 한배 새끼의 페어링 않도록주의하십시오. </li></ol></li><li> 환경 심화 <ol><li> 성적으로 성숙 (&gt; 8 주 이전), 연령대 남성 또는 여성 마우스를 사용합니다. 참고 : 우리는 일반적으로 N = 6 / 치료 그룹으로 나누어 각 실험에 대한 N = 18 마우스를 사용합니다. </li><li> 그룹 보관 동일한 표준에 수납을 유지 동물 보유 시설에 도착하면 (SH) (예 : </em&gt; 삼일이 순응하기&gt;이 단계에서) 아래의 조건을 참조하십시오. 다음과 실험을하는 동안, 외부 환경의 자극을 유지 (예 : 주위 온도, 빛 : 어두운주기, 음식, 물, 처리 및 청소) 상수 또는 모든 마우스에 동일하게 배포 할 수 있습니다. </li><li> 환경 농축을 시작하려면, 무작위로 세 그룹 중 하나에 각 마우스 할당 : SH를; 실행 휠 (RW), 또는 환경 농축 (EE)과 함께 음식과 물에 대한 광고 무제한으로 액세스 할 수있는 동일한 깨끗한 케이지에 마우스의 각 그룹을 배치합니다. 참고 : 모든 그룹은 여기, 더 큰 쥐 잡고 케이지, 42cm 길이, 폭 27cm를 측정하고, 깊은 16cm 사용 하였다. <ol><li> 또한, 다음의 각 그룹의 환경 조건을 제공한다 : 유일한 바닥에 쓰레기를 포함 SH (종이 펠렛 또는 톱밥); RW 포함 SH 플러스 2 실행 바퀴; EE는 (로프, 사다리, 터널, 빈 종이 타월 롤과 조직 종이 조각 같은 개체) RW 플러스 장난감을 포함하는과 전에plore, 놀이, 등산, 숨기기와 둥지. </li><li> 14 일 동안 계속해서 이런 식으로 그들을 집. 참고 : 일상적인 축산이 기간 동안 OK이지만 모든 마우스에 동등하게 분배해야합니다. </li></ol></li><li> 1시간 / 일 (같은 시간 매일), 오일은 / 주를 위해 새로운 장난감을 포함하는 더 큰 케이지에 그들을 함께 배치하여 추가 &#39;슈퍼 농축&#39;(SE)에 따라 EE 마우스. 참고 : 여기에, 46cm, 폭 69cm 길이와 40cm 깊이 플라스틱 욕조를 사용 하였다. <ol><li> 장난감의 다른 세트 각 세션을 제시하여 새로운 항목을 유지한다. 청결한 장난감 비눗물와 냄새를 제거하기 위해 80 % 에탄올로 마우스에 다시 제시한다. </li><li> 각 SE 세션에 이어, 자신의 EE 케이지에 마우스를 반환합니다. 핸들 SH 및 RW 마우스이 기간 동안 (SE 자체 제외) SE 마우스와 동일 (예 제거에서 그 케이지에 각 SH 및 RW 마우스를 반환). </li></ol></li></ol></li></ol><ol><li> 준비하기 <ol><li> 상업적으로 사용할 수있는 살균 삼투 펌프 및 뇌 주입 키트를 사용합니다. 주입 전날, 무균 기술을 사용하여, 각각의 펌프를 충전 (펌프와 함께 제공되는 지침에 설명 된대로) 멸균 약물 또는 차량 솔루션 관과 정맥을 연결하여 주요 임플란트. 둘을 연결하고 37 ℃에서 하룻밤 멸균 식염수에 품어. 교차 오염을 방지하기 위해 별도 약물 및 차량 채워진 보형물을 품어. </li></ol></li><li> 수술. 참고 : 실험자의 국가에 따라이 특별한 동물 실험 허용하거나 수당은 수술과 수술 후 실험 이러한 유형을 추구해야합니다. <ol><li> 모든 수술 장비를 소독 및 전반에 걸쳐 무균 기술을 사용합니다. (예 : 공기의 1 ~ 2 % 이소 플루오 란 사용) 마우스를 마취하고 stere에 배치otaxic headframe. 절차 전반에 걸쳐 마취의 깊이를 확인하고 필요에 따라 추가로 마취 관리 (유해 발 핀치에 사지 철회 등이없는 것은 적절한 마취를 나타낸다). 확인 눈은 윤활유 눈 연고에 의해 탈수으로부터 보호, 마우스의 체온 절차 전반에 걸쳐 정상 유지됩니다. </li><li> CM 두개골의 뒤쪽 가장자리에 후부 2 눈 사이와 마무리에서 시작하여 피부를 통해 중간 선 절개를합니다. 편안 펌프와 캐 뉼러 (연결 관이 완료되면 구부러진 수 없습니다) 이식되면 연결 관에 맞게 충분히 큰 피하 &#39;포켓&#39;을 만들기 위해 멀리 마우스의 뒷면 아래 기본 근막으로부터 피부를 해부 무딘. 두개골의 지느러미 측면을에서 근막을 취소 쳤어요. </li><li> , 약 1.5 mm 직경의 치과 버를 사용하여 적절한 정위가 U 좌표에서 두개골에 드릴 다운ntil 뼈의 얇은 유연한 계층은 남아있다. 껍질 멀리 미세 집게를 사용하여이 계층 (이 치과 버와 기본 경막과 뇌 손상을 피한다). 확인 두개골은 혈액과 뼈 조각의 청소하지 않으며,이 있음을 더 이상 출혈. </li><li> 정맥 홀더에 의해 유지 캐 뉼러로, 마우스의 뒷면을 덮는 피하 &#39;주머니&#39;에 펌프와 연결 관을 배치합니다. 이어서, 적당한 정위 좌표 및 뇌의 표면 상에 캐 뉼러의 선단 위치. 조심스럽게 뇌에 캐 뉼러를 낮출 수 있지만, 필요한 깊이의 짧은 약 1mm를 중지합니다. 주 : 나머지 깊이 치과 아크릴의 제 1 층의 도포 다음과 협상한다. </li><li> 두개골의 표면이 깨끗하고 건조 다시 확인한 후 치과 아크릴의 작은 볼륨을 준비하고 제 주위의 두개골을 통해 버 홀에 포함, 두개골의 전체 노출 영역에 그것을 부드럽게 이쑤시개를 사용전자 정맥. 아크릴 견고하기 전에, 캐 뉼러 대상으로 남아있는 깊이 팁을 낮 춥니 다. </li><li> 장소에 캐 뉼러를 해결하기 위해, 캐 뉼러의 흰색 플라스틱 지원을 통해뿐만 아니라, 치과 아크릴의 또 다른 작은 볼륨을 준비하고 첫 번째 제품이 계층. 필요에 따라 아크릴의 추가 레이어를 반복합니다. </li><li> 아크릴이 강화되면, 조심스럽게 캐 뉼러 홀더를 제거하고 부탄 불꽃으로 가열 메스 블레이드를 사용하여 흰색 플라스틱 이동식 정맥 탭을 잘라. 마지막으로, 전체 임플란트에 대해 닫혀 피부를 봉합. </li></ol></li><li> 동물의 수술 후 치료 <ol><li> 피부 마진 살균 연고를 적용하고 마우스에 항 염증를 관리 (예 : 멜 록시 캄, 3 ㎎ / kg SC). 프레임에서 마우스를 제거 가열 램프 아래에 배치하고, 의식을 회복 할 때까지 관찰합니다. 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 마우스를 반환하지 않습니다. 참고 : 특급성별 페어링 및 환경 농축 등 erimental 조작이 시작 또는 초기에 수술 다음 날 재개 할 수 있습니다. </li><li> 자신의 체중, 매일 일반적인 동작과 모양을 모니터링합니다. 국소 살균 연고와 수술 절개 주위 감염의 징후 (예 : 부종, 발적, 고름)을 취급합니다. 필요에 따라 전신 진통제 및 / 또는 항생제 징후 질병, 통증, 스트레스 또는 불편 (&gt; 10 % 체중, 사회적 철회, 정리의 부족의 소멸, &quot;플러 핑&quot;, 운동 장애, 발작) 치료. </li><li> &gt; 15 % 체중 감소 또는 질병, 통증, 스트레스 또는 불편 증상이 회복 처리 1 주일 이내에 복구 할 수없는 경우 쥐를 안락사. </li></ol></li></ol> 3. 뇌 조직 준비, 면역 조직 화학적 처리 및 Stereology를 <ol><li> 관류 <ol><li> 즉시 환경 / 약물 조작에 따라, 연구를 위해 뇌를 준비합니다. <br/&gt; 주 : 여기에보고 된 실험에서 SNC + TH 뉴런의 수를 측정하고, 다른 처리 군에 각각 비교 하​​였다. </li><li> 먼저 (예 : 100 ㎎ / ㎏ IP 나트륨 펜토 바르비 톤) 쥐를 죽일 마취제의 과다 복용을 관리 할 수 있습니다. 일단 마취하지만 심장 박동이 정지하기 전에, 그 뒷면에 마우스를 놓고 넥타이 또는 두 앞발을 아래로 핀. </li><li> 메스를 사용하면 흉부 후 복강으로 흉곽 아래의 근육을 절개 덮는 피부를 절단. 흉곽의 칼 모양의 과정에 클램프를 놓고 조리개 노출 간로부터 멀리 흉곽를 들어 올립니다. </li><li> 다이어프램을 통해 측면으로 흉곽이 다시 폐와 심장을 노출 머리 접을 수있을 때까지 큰 가위를 사용하여 양쪽의 갈비뼈를 잘라. 미세 가위 종료 혈액 지점 및 관류 솔루션과 우심방의 작은 절개를 사용하여, 다음 왼쪽 ventri의 자료를 잘라사이클과 좌심실, 좌심방을 통해 정맥을 배치하고 대동맥에. </li><li> 헤파린 따뜻한 (37 ° C)를 펌프 제자리에 캐 뉼러를 클램프과 우심방을 종료 솔루션까지 혈관을 통해 0.1 M 인산 완충 생리 식염수 (PBS)는 혈액 완전히 무료입니다. 전체 마우스가 잘 해결 될 때까지 다음, 혈관을 통해 감기 (4 ° C) 정착액 솔루션 (PBS에서와 같은 4 % 파라 포름 알데히드를) 펌프. 뇌 싱크까지 2~3일 30 % 자당에 PBS의 뇌와 장소를 제거합니다. 참고 : 조직 준비의 다른 유형은 해당 실험실에서 전문 지식에 따라 적용 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 무료 부동 저온부의 준비 <ol><li> 관심있는 뇌 영역을 통해 시리얼 부분을 잘라 PBS에이를 수집합니다. 참고 : 우리는 저온 유지 장치를 사용하여 40 μm의 두께 부분을 잘라. 조직 절편의 다른 유형의 correspondi 전문성에 따라 적용 할 수있다NG 실험실. </li></ol></li><li> 면역 조직 화학 <ol><li> 관심의 단백질에 대한 표준 면역 조직 화학 염색을 수행합니다. 48 시간 동안 39 ° C에서, (400 (1)) 다음, 폴리 클로 날 오티 닐화 염소 항 폴리 클로 날 토끼 항 TH와 다음, 30 분 동안 immunoreact를 실온에서 PBS 중 5 % 정상 염소 혈청과 0.3 % 트리톤 X-100의 섹션을 인큐베이션 실온에서 2 시간 동안 : -rabbit (1000 1). </li><li> 18-20 분 동안 실온에서 다음과 니켈 - 코발트 - 강화 미노 벤지딘 (0.5 ㎎ / ㎖)에서 1 시간 동안 실내 온도에서 : 다음에, 아비딘 - 퍼 옥시다아제 (500 1)에서 부화 미노 벤지딘 인큐베이션 마지막 크로마 3-5 분 동안 침전을 촉매 과산화수소 (0.01 %)를 추가한다. 전, 후, 그리고 위의 각 단계 사이에 PBS 섹션을 10 분 3 회 각을 씻으십시오. </li><li> 다음, 공기를 건조, 젤라틴 현미경 슬라이드에 Nissl 얼룩 (중립 적색) 섹션을 탑재, 알코올, 분명 (X-3B), 및 커버 슬립 탈수. </li></ol></li><lI&gt; Stereology를 <ol><li> 공평 stereological 방법을 사용하고 TH-TH + SNC (VTA 및 및 LC) 뉴런의 수를 추정한다. stereologist받은 치료에 눈이 있는지 확인합니다. 소마 지름 &lt;5 ㎛ 인 기초 신경교 제외하고 가시 핵과 셀만 카운트. </li><li> TH + 세포와 Paxinos 왓슨 (7)의 뇌지도 책에 따라 해부학 적 / 경계의 공간 위치하여 SNC (과 VTA와 LC)를 확인합니다. (; X = 100 ㎛, Y = VTA와 LC 100 μm의 X = Y 140 μm의 = SNC 140 μm의) 정기적으로 미리 정해진 간격으로 계산 프레임 내에서 TH + 세포 (55 X 55 μm의 = 3025 μm의 2) 카운트 매 4 번째 섹션의 각 핵에 걸쳐. </li></ol></li></ol>

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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+enrichment+and+brain+repair:+harnessing+the+therapeutic+effects+of+cognitive+stimulation+and+physical+activity+to+enhance+experience-dependent+plasticity.">Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity.</a> Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).</li><li>Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enriched+environments,+experience-dependent+plasticity+and+disorders+of+the+nervous+system.">Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system.</a> Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).</li><li>Chmiel, D. J., Noonan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preference+of+laboratory+rats+for+potentially+enriching+stimulus+objects.">Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects.</a> Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).</li><li>Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+runway+paradigm+to+assess+the+relative+strength+of+rats'+motivations+for+enrichment+objects.">Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects.</a> Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).</li><li>Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene-environment+interactions+and+construct+validity+in+preclinical+models+of+psychiatric+disorders.">Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders.</a> Progress in neuro-psychopharmacology &amp; biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).</li><li>Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strength+of+preference+for+nesting+material+as+environmental+enrichment+for+laboratory+mice.">Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice.</a> Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).</li><li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+environmental+enrichment+on+gene+expression+in+the+brain.">Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).</li><li>Eckert, M. J., Abraham, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+environmental+enrichment+exposure+on+synaptic+transmission+and+plasticity+in+the+hippocampus.">Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).</li><li>Sztainberg, Y., Chen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+environmental+enrichment+model+for+mice.">An environmental enrichment model for mice.</a> Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).</li><li>Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environment+and+brain+plasticity:+towards+an+endogenous+pharmacotherapy.">Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy.</a> Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

환경 조작 이러한 조작 환경 (성별 페어링 및 환경 농축)의 디자인 뒤에 동기 환경 여부를 확인하는, 그리고 / 또는 동작 환경에서 메시지는 중뇌 DA 신경 세포의 수의 변화와 연관된다. 초점은 환경을 제공하고 중뇌 DA 신호를 참여 가능성이 행동을 자극에 따라서이었다. 이러한 이성에 포함 된 페어링하고, 놀이를 탐험 등반, 숨길 바퀴, 로프, 사다리, 터널, 및 개체를 ?...

중뇌의 배쪽 피개 영역 (VTA)과 substantia nigra에의 유리체 compacta (SNC)의 신경 세포에 의해 DArgic 신호는 보상 동기 부여인지, 감정 및 모터 행동에 중요 할 것으로 생각된다. 그러나, 너무 많거나 너무 적은 중뇌 DA 시그널링은 비활성화 많은 신경계 장애의 다양한 증상 (예를 들어 파킨슨 병, 주의력 결핍 및 과다 활동 장애, 정신 분열병, 및 약물 중독)을 야기한다. 증가 또는 DA는 이러한 증상을 완화 신호 감소 마약, 그러나 그들은 또한 조절 이상 신호로 인한 부작용 및 오프 대상 효과를 생산하고 있습니다. 약물 효과는 또한 뇌의 보상 반응에 시간이 지남에 따라 감소한다. 도전 따라서 표적으로 생리 방식 정상 중뇌 DA 시그널링을 복원하고, 선호 접근법 증가 또는 중뇌 DA 뉴런의 수를 감소시킴으로써이다. 증거는 SEV에 대한 축적 된(1 검토) 성숙한 성인 세포에서 대사와 인신 매매 DA 및 기타 카테콜아민에 관여하는 유전자와 단백질의 발현이 수정할 수 있음을 대한 일반적인 수십 년. TH immunonegative (TH-) 신경 세포의 수가 반대 패턴을 나타내고있다 중뇌, 티로신 수산화 효소 면역 양성의 개수 (TH +, DA 합성에서 속도 - 제한 효소) 뉴런은 (즉, 증가 신경독 투여 2,3- 따라 증가시킨다 감소 다음) 3을 감소시킨다. 이것은 다음 몇 가지 세포에 의한 &#39;DA 표현형&#39;의 이득 손실과 일치한다. TH-TH + 및 SNC 뉴런의 수는 이러한 셀 4,5의 전기적 활성도를 변경 다양한 치료 다음 동일하지만 반대 방향으로 변화하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 2 주 중뇌에 작은 컨덕턴스의 주입, 칼슘 - 활성화 된 칼륨 (SK) 채널 길항제 apamin는 (동일한 양으로)를 TH + 민과의 수가 증가 감소TH-SNC의 mber은 4,5 뉴런. 대조적으로, SK 채널 작용제 -1- EBIO의 주입 TH +의 수를 증가시키고 (동량)에 의해 TH-4,5- SNC 뉴런의 수를 감소시킨다. 비슷한 변화는 구 심성 입력 4를 대상으로하는 일부 포함 SNC 신경 세포의 활동을 대상으로 다양한 트리트먼트 다음 보였다. 구 심성 신경 활성 및 입력에 의해 SNC DArgic 뉴런의 수의 이러한 규정은 명백한 환경 또는 행동 SNC 뉴런의 수에 영향을 줄 수있는 가능성을 제기한다. 다른 환경에 노출 실제로 성인 마우스는 다소 중뇌 (VTA 및 SNC) TH + 뉴런, 이러한 환경에 의해 유도 된 변화들 중 적어도 일부 중뇌 6 시냅스 동시 입력의 봉쇄에 의해 폐지되어있다. (1) 우리의 환경 조작 및 약물 주입을 구현하는 방법에 대한 자세한 내용을 제공,이 통신의 목적은 할 수 있습니다 및 (2) E 우리의 경합을 더욱 지원 데이터를 제공 할nvironment은 구 심성 입력을 통해, 중뇌 DA 뉴런의 수를 조절한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1300">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:636px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Isofluorane</td>
			<td style="width:636px;">Baxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, Australia</td>
			<td style="width:119px;">AHN3640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">ALZET Osmotic pump 1002</td>
			<td style="width:636px;">DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530</td>
			<td>0004317</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">ALZET Brain infusion kit 1</td>
			<td style="width:636px;">DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530</td>
			<td>0004760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">ALZET cannula holder 1</td>
			<td style="width:636px;">DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530</td>
			<td>0008860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Vertex Monomer Self-curing (dental acrylic solvent)</td>
			<td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Vertex Self Curing (dental acrylic powder)</td>
			<td>Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">METACAM (Meloxicam)</td>
			<td>Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 Australia</td>
			<td style="width:119px;">L10100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Sodium Pentobarbitone</td>
			<td>Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Australia</td>
			<td style="width:119px;">571177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Normal goat serum</td>
			<td>chemicon-temecula, CA</td>
			<td style="width:119px;">S26-Litre</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Triton X-100</td>
			<td>Merck Millipore Headquarters&#160;, 290 Concord road, Billerica, MA 01821</td>
			<td style="width:119px;">1.08603.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Polyclonal rabbit anti-tyrosine hydroxylase</td>
			<td>Merck Millipore Headquarters&#160;, 290 Concord road, Billerica, MA 01821</td>
			<td style="width:119px;">AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyclonal biotinylated goat anti-rabbit</td>
			<td>Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Australia 2060</td>
			<td style="width:119px;">EO432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Avidin peroxidase</td>
			<td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td>
			<td style="width:119px;">A3151-1mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Diamino-benzidine</td>
			<td>Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU</td>
			<td style="width:119px;">D-5637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereo Investigator</td>
			<td>MicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

environmental modulations of the number of midbrain dopamine neurons in adult mice

뇌 또는 &#39;뇌 가소성&#39;에 오래 지속되는 변화는 질병이나 부상으로 다음과 같은 적응 행동 및 뇌 수리의 기초가. 또한, 우리의 환경과의 상호 작용은 뇌 가소성을 유도 할 수 있습니다. 점점 연구는 뇌와 행동 장애의 치료에 도움이 뇌 가소성을 자극하는 환경을 식별하기 위해 노력하고있다. 두 조작 환경을 설명하는 증가 또는 성인 마우스 중뇌 신경 세포 티로신 수산화 효소 면역 양성의 개수 (TH +, 도파민 (DA) 합성에서 속도 - 제한 효소)을 감소시킨다. 첫 번째는 페어링 남성과 함께 지속적으로 남성의 약 12​​ % 중뇌 TH + 뉴런을 증가 일주, 대한 여성 마우스를 포함하지만, 여성의 약 12​​ % 중뇌 TH + 뉴런을 감소시킨다. 두 번째는 등 실행 바퀴, 장난감, 로프, 중첩 물질을 포함하는 &#39;농축 환경&#39;(EE)에서 2 주 연속 주택 마우스를 포함하는 전남성의 약 14 % 중뇌 TH + 뉴런을 ncreases. 또한, 프로토콜은 동시에 환경에 의한 뇌 가소성을 기본 메커니즘을 식별하는 데 도움이 환경 조작 중에 직접 중뇌에 약물을 주입에 대해 설명한다. 예를 들어, 더 중뇌 TH + 뉴런의 EE-유도는 중뇌 신경 세포 상에 시냅스 입력의 동시 봉쇄에 의해 폐지된다. 함께, 이러한 데이터는 환경에 대한 정보가 또는 &#39;DA&#39;유전자의 발현 끄려면 중뇌 신경 세포에 시냅스 입력을 통해 전달되는 것을 나타냅니다. 따라서, 기전 표적화 적절한 환경 적 자극 또는 약물, 중뇌 DA 불균형과 관련된 뇌 및 행동 장애를 치료하는데 유용 할 수있다 (예를 들어 파킨슨 병, 주의력 결핍 및 과다 활동 장애, 정신 분열병, 및 약물 중독).

이러한 환경 조작을 실시 성인 마우스는 중뇌의 숫자 (SNC와 VTA),하지만 LC를 변경 한 TH + 뉴런, EE 플러스 피크로 톡신 또는 bicuculline 하나의 동시 중뇌 주입 (GABA 수용체 길항제) 및의 EE-유도를 폐지 더 SNC TH + 뉴런. 이 자료는 이전에 6 년에 출판되었다. 본 데이터는 이전 연구의 일환으로 수행 복제 실험에서 컴파일 된,하지만 다른 곳에서 출판되지 않았다. 특히, 성인 ?...

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Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

This protocol describes two different environmental manipulations and a concurrent brain infusion protocol to study environmentally-induced brain changes underlying adaptive behavior and brain repair in adult mice.

성인 마우스의 중간 뇌 도파민 뉴런의 수의 환경 변조

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...

environmental-modulations-number-midbrain-dopamine-neurons-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

8.7K 조회수.  The University of Melbourne. This protocol describes two different environmental manipulations and a concurrent brain infusion protocol to study environmentally-induced brain changes underlying adaptive behavior and brain repair in adult mice.

비디오: Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Neuroscientists study the function of the brain by investigating how neurons in the brain communicate. Many investigators look at changes in the electrical activity of one or more neurons in response to an experimentally-controlled input. The electrical activity of neurons can be recorded in isolated brain slices using patch clamp techniques with glass micropipettes. Traditionally, experimenters can mimic neuronal input by direct injection of current through the pipette, electrical stimulation of the other cells or remaining axonal connections in the slice, or pharmacological manipulation by receptors located on the neuronal membrane of the recorded cell.
Direct current injection has the advantages of passing a predetermined current waveform with high temporal precision at the site of the recording (usually the soma). However, it does not change the resistance of the neuronal membrane as no ion channels are physically opened. Current injection usually employs rectangular pulses and thus does not model the kinetics of ion channels. Finally, current injection cannot mimic the chemical changes in the cell that occurs with the opening of ion channels.
Receptors can be physically activated by electrical or pharmacological stimulation. The experimenter has good temporal precision of receptor activation with electrical stimulation of the slice. However, there is limited spatial precision of receptor activation and the exact nature of what is activated upon stimulation is unknown. This latter problem can be partially alleviated by specific pharmacological agents. Unfortunately, the time course of activation of pharmacological agents is typically slow and the spatial precision of inputs onto the recorded cell is unknown.
The dynamic clamp technique allows an experimenter to change the current passed directly into the cell based on real-time feedback of the membrane potential of the cell (Robinson and Kawai 1993, Sharp et al., 1993a,b; for review, see Prinz et al. 2004). This allows an experimenter to mimic the electrical changes that occur at the site of the recording in response to activation of a receptor. Real-time changes in applied current are determined by a mathematical equation implemented in hardware.
We have recently used the dynamic clamp technique to investigate the generation of bursts of action potentials by phasic activation of NMDA receptors in dopaminergic neurons of the substantia nigra pars compacta (Deister et al., 2009; Lobb et al., 2010). In this video, we demonstrate the procedures needed to apply a NMDA receptor conductance into a dopaminergic neuron.

In this video, we demonstrate how to apply a conductance into a dopaminergic neuron recorded in the whole cell configuration in rat brain slices. This technique is called the dynamic clamp.

동적 클램프 기법을 사용 랫 Midbrain Dopaminergic 뉴런에서 NMDA 수용체의 전도의 응용

Neuroscientists study the function of the brain by investigating how neurons in the brain communicate. Many investigators look at changes in the ...

연구

신경과학

Studying the Integration of Adult-born Neurons

Neurogenesis occurs in adult mammalian brains in the sub-ventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and in the sub-granular zone (SGZ) of the hippocampal dentate gyrus throughout life. Previous reports have shown that adult hippocampal neurogenesis is associated with diverse brain disorders, including epilepsy, schizophrenia, depression and anxiety (1). Deciphering the process of normal and aberrant adult-born neuron integration may shed light on the etiology of these diseases and inform the development of new therapies.
SGZ adult neurogenesis mirrors embryonic and post-natal neuronal development, including stages of fate specification, migration, synaptic integration, and maturation. However, full integration occurs over a prolonged, 6-week period. Initial synaptic input to adult-born SGZ dentate granule cells (DGCs) is GABAergic, followed by glutamatergic input at 14 days (2). The specific factors which regulate circuit formation of adult-born neurons in the dentate gyrus are currently unknown.
Our laboratory uses a replication-deficient retroviral vector based on the Moloney murine leukemia virus to deliver fluorescent proteins and hypothesized regulatory genes to these proliferating cells. This viral technique provides high specificity and resolution for analysis of cell birth date, lineage, morphology, and synaptogenesis.
A typical experiment often employs two or three viruses containing unique label, transgene, and promoter elements for single-cell analysis of a desired developmental process in vivo. The following protocol describes a method for analyzing functional newborn neuron integration using a single green (GFP) or red (dTomato) fluorescent protein retrovirus and patch-clamp electrophysiology.

A way to study the integration of newborn dentate granule cells in adult animals is described. This technique uses an engineered retrovirus to label newborn neurons, followed by electrophysiological recordings to determine in vivo functional integration.

성인에서 태어난 뉴런의 통합을 공부

Neurogenesis occurs in adult mammalian brains in the sub-ventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and in the sub-granular zone (SGZ) of the ...

An In-vitro Preparation of Isolated Enteric Neurons and Glia from the Myenteric Plexus of the Adult Mouse

The enteric nervous system is a vast network of neurons and glia running the length of the gastrointestinal tract that functionally controls gastrointestinal motility. A procedure for the isolation and culture of a mixed population of neurons and glia from the myenteric plexus is described. The primary cultures can be maintained for over 7 days, with connections developing among the neurons and glia. The longitudinal muscle strip with the attached myenteric plexus is stripped from the underlying circular muscle of the mouse ileum or colon and subjected to enzymatic digestion. In sterile conditions, the isolated neuronal and glia population are preserved within the pellet following centrifugation and plated on coverslips. Within 24-48 hr, neurite outgrowth occurs and neurons can be identified by pan-neuronal markers. After two days in culture, isolated neurons fire action potentials as observed by patch clamp studies. Furthermore, enteric glia can also be identified by GFAP staining. A network of neurons and glia in close apposition forms within 5 - 7 days. Enteric neurons can be individually and directly studied using methods such as immunohistochemistry, electrophysiology, calcium imaging, and single-cell PCR. Furthermore, this procedure can be performed in genetically modified animals. This methodology is simple to perform and inexpensive. Overall, this protocol exposes the components of the enteric nervous system in an easily manipulated manner so that we may better discover the functionality of the ENS in normal and disease states.

An In-vitro Preparation of Isolated Enteric Neurons and Glia from the Myenteric Plexus of the Adult Mouse

We demonstrate a cell culture protocol for the direct study of neuronal and glial components of the enteric nervous system. A neuron/glia mixed culture on coverslips is prepared from the myenteric plexus of adult mouse providing the ability to examine individual neuron and glia function by electrophysiology, immunohistochemical, etc.

<em&gt; 체외</em성인 마우스 Myenteric 신경총에서 분리 된 장내 뉴런과 교세포의&gt; 준비

The enteric nervous system is a vast network of neurons and glia running the length of the gastrointestinal tract that functionally controls ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with increasing connective tissue and decreased neuronal viability that occur with age. Here, we describe a methodology for the dissociation of healthy hypothalamic neurons from adult-aged mice. The ability to study neurons from adult-aged mice allows the use of disease models that manifest at a later age and might be more developmentally accurate for certain studies. Fluorescence imaging of dissociated neurons can be used to study the activity of a population of neurons, as opposed to using electrophysiology to study a single neuron. This is particularly useful when studying a heterogeneous neuronal population in which the desired neuronal type is rare such as for hypothalamic glucose sensing neurons. We utilized membrane potential dye imaging of adult ventromedial hypothalamic neurons to study their responses to changes in extracellular glucose. Glucose sensing neurons are believed to play a role in central regulation of energy balance. The ability to study glucose sensing in adult rodents is particularly useful since the predominance of diseases related to dysfunctional energy balance (e.g.&#160;obesity) increase with age.

The activity of single neurons from adult-aged mice can be studied by dissociating neurons from specific brain regions and using fluorescent membrane potential dye imaging. By testing responses to changes in glucose, this technique can be used to study the glucose sensitivity of adult ventromedial hypothalamic neurons.

막 성인 쥐에서 Ventromedial 시상 하부 뉴런의 잠재적 인 염료 이미징은 포도당 감지를 연​​구하는

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

Lineage-reprogramming of Pericyte-derived Cells of the Adult Human Brain into Induced Neurons

Direct lineage-reprogramming of non-neuronal cells into induced neurons (iNs) may provide insights into the molecular mechanisms underlying neurogenesis and enable new strategies for in vitro modeling or repairing the diseased brain. Identifying brain-resident non-neuronal cell types amenable to direct conversion into iNs might allow for launching such an approach in situ, i.e. within the damaged brain tissue. Here we describe a protocol developed in the attempt of identifying cells derived from the adult human brain that fulfill this premise. This protocol involves: (1) the culturing of human cells from the cerebral cortex obtained from adult human brain biopsies; (2) the in vitro expansion (approximately requiring 2-4 weeks) and characterization of the culture by immunocytochemistry and flow cytometry; (3) the enrichment by fluorescence-activated cell sorting (FACS) using anti-PDGF receptor-&#946; and anti-CD146 antibodies; (4) the retrovirus-mediated transduction with the neurogenic transcription factors sox2 and ascl1; (5) and finally the characterization of the resultant pericyte-derived induced neurons (PdiNs) by immunocytochemistry (14 days to 8 weeks following retroviral transduction). At this stage, iNs can be probed for their electrical properties by patch-clamp recording. This protocol provides a highly reproducible procedure for the in vitro lineage conversion of brain-resident pericytes into functional human iNs.

Targeting brain-resident cells for direct lineage-reprogramming offers new perspectives for brain repair. Here we describe a protocol of how to prepare cultures enriched for brain-resident pericytes from the adult human cerebral cortex and convert these into induced neurons by retrovirus-mediated expression of the transcription factors Sox2 and Ascl1.

유도 된 신경 세포로 성숙한 인간 두뇌의 혈관 주위 세포에서 파생 된 세포의 리니지 - 프로그래밍

Direct lineage-reprogramming of non-neuronal cells into induced neurons (iNs) may provide insights into the molecular mechanisms underlying neurogenesis ...

Laser Capture Microdissection - A Demonstration of the Isolation of Individual Dopamine Neurons and the Entire Ventral Tegmental Area

Laser capture microdissection (LCM) is used to isolate a concentrated population of individual cells or precise anatomical regions of tissue from tissue sections on a microscope slide. When combined with immunohistochemistry, LCM can be used to isolate individual cells types based on a specific protein marker. Here, the LCM technique is described for collecting a specific population of dopamine neurons directly labeled with&#160;tyrosine hydroxylase immunohistochemistry and for isolation of the dopamine neuron containing region of the ventral tegmental area using indirect tyrosine hydroxylase immunohistochemistry on a section adjacent to those used for LCM. An infrared (IR) capture laser is used to both dissect individual neurons as well as the ventral tegmental area off glass slides and onto an LCM cap for analysis. Complete dehydration of the tissue with 100% ethanol and xylene is critical. The combination of the IR capture laser and the ultraviolet (UV) cutting laser is used to isolate individual dopamine neurons or the ventral tegmental area when using PEN membrane slides. A PEN membrane slide has significant advantages over a glass slide as it offers better consistency in capturing and collecting cells, is faster collecting large pieces of tissue, is less reliant on dehydration and results in complete removal of the tissue from the slide. Although removal of large areas of tissue from a glass slide is feasible, it is considerably more time consuming and frequently leaves some residual tissue behind. Data shown here demonstrate that RNA of sufficient quantity and quality can be obtained using these procedures for quantitative PCR measurements. Although RNA and DNA are the most commonly isolated molecules from tissue and cells collected with LCM, isolation and measurement of microRNA, protein and epigenetic changes in DNA can also benefit from the enhanced anatomical and cellular resolution obtained using LCM.

The isolation of individual dopamine neurons or the ventral tegmental area with direct or indirect immunohistochemistry is demonstrated using laser capture microdissection. Parameters for isolation of tissue from a glass slide using an infrared laser and from membrane slides using the combination of an infrared and ultraviolet laser are discussed.

레이저 캡처 이외에 Microdissection - 개별 도파민 신경 세포의 분리 및 전체 복부 피개 영역의 데모

Laser capture microdissection (LCM) is used to isolate a concentrated population of individual cells or precise anatomical regions of tissue from tissue ...

Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons

Dendrites of dopaminergic neurons receive and convey synaptic input, support action potential back-propagation and neurotransmitter release. Understanding these fundamental functions will shed light on the information transfer in these neurons. Dendritic patch-clamp recordings provide the possibility to directly examine the electrical properties of dendrites and underlying voltage-gated ion channels. However, these fine structures are not easily accessible to patch pipettes because of their small diameter. This report describes a step-by-step procedure to collect stable and reliable recordings from the dendrites of dopaminergic neurons in acute slices. Electrophysiological measurements are combined with post hoc recovery of cell morphology. Successful experiments rely on improved preparation of slices, solutions and pipettes, adequate adjustment of the optics and stability of the pipette in contact with the recorded structure. Standard principles of somatic patch-clamp recording are applied to dendrites but with a gentler approach of the pipette. These versatile techniques can be implemented to address various questions concerning the excitable properties of dendrites.

Subcellular patch-clamp recordings offer the possibility to investigate the functional properties of dendrites. However these fine structures are not easily accessible due to their small diameter. The protocol described here aims to facilitate the collection of stable and reliable recordings from the dendrites of dopamine neurons in slices in vitro.

흑색질 도파민 뉴런의 Somatodendritic 도메인에서 세포 내 패치 클램프 녹음

Dendrites of dopaminergic neurons receive and convey synaptic input, support action potential back-propagation and neurotransmitter release. Understanding ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, survival, and glial communications. To date, numerous studies have reported that defects in these systems cause various neuronal diseases. Thus, understanding the mechanisms underlying vesicle dynamics may provide influential clues that could aid in the treatment of several neuronal disorders. Here, we describe a method for quantifying vesicle motilities, such as motility distance and rate of movement, using a software plug-in for the ImageJ platform. To obtain images for quantification, we labeled neuronal endosome-lysosome structures with EGFP-tagged vesicle marker proteins and observed the movement of vesicles using a time-lapse microscopy. This method is highly useful and simplify measuring vesicle motility in neurites, such as axons and dendrites, as well as in the soma of both neurons and glial cells. Furthermore, this method can be applied to other cell lines, such as fibroblasts and endothelial cells. This approach could provide a valuable advancement of our understanding of membrane trafficking.

The investigation of membrane trafficking is crucial for understanding neuronal functions. Here, we introduce a method for quantifying vesicle motility in neurons. This is a convenient method that can be adapted to the quantification of membrane trafficking in the nervous system.

형광 프로브를 이용한 배양 된 뉴런의 엔도 좀과 리소좀 기능의 정량화

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) neurotransmission is strongly associated with several central nervous system-associated diseases such as Parkinson&#39;s disease, attention-deficit-hyperactivity disorder and drug addiction1,2,3,4. Delineating disease mechanisms involving DA imbalance is critically dependent on animal models to mimic aspects of the diseases, and thus protocols that assess specific parts of the DA homeostasis are important to provide novel insights and possible therapeutic targets for these diseases.
Here, we present two useful experimental protocols that when combined provide a functional read-out of the DAergic system in mice. Biochemical and functional parameters on DA homeostasis are obtained through assessment of DA levels and dopamine transporter (DAT) functionality5. When investigating the DA system, the ability to reliably measure endogenous levels of DA from adult brain is essential. Therefore, we present how to perform high-performance liquid chromatography (HPLC) on brain tissue from mice to determine levels of DA. We perform the experiment on tissue from dorsal striatum (dStr) and nucleus accumbens (NAc), but the method is also suitable for other DA-innervated brain areas.
DAT is essential for reuptake of DA into the presynaptic terminal, thereby controlling the temporal and spatial activity of released DA. Knowing the levels and functionality of DAT in the striatum is of major importance when assessing DA homeostasis. Here, we provide a protocol that allows to simultaneously deduce information on surface levels and function using a synaptosomal6 DA uptake assay.
Current methods combined with standard immunoblotting protocols provide the researcher with relevant tools to characterize the DAergic system.

Synaptosomal dopamine uptake and high-performance liquid chromatography analysis represent experimental tools to investigate dopamine homeostasis in mice by assessing the function of the dopamine transporter and levels of dopamine in striatal tissue, respectively. Here we present protocols to measure dopamine tissue content and assess the functionality of the dopamine transporter.

고성능 액체 크로마토그래피 분석 및 Synaptosomal 도파민 통풍 관의 사용에 의해 쥐에서 Dopaminergic 항상성의 평가

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Use of Synaptic Zinc Histochemistry to Reveal Different Regions and Laminae in the Developing and Adult Brain

Characterization of anatomical and functional brain organization and development requires accurate identification of distinct neural circuits and regions in the immature and adult brain. Here we describe a zinc histochemical staining procedure that reveals differences in staining patterns among different layers and brain regions. Others have utilized this procedure not only to reveal the distribution of zinc-containing neurons and circuits in the brain, but also to successfully delineate areal and laminar boundaries in the developing and adult brain in several species. Here we illustrate this staining procedure with images from developing and adult ferret brains. We reveal a zinc-staining pattern that serves as an anatomical marker of areas and layers, and can be reliably used to distinguish visual cortical areas in the developing and adult visual cortex. The main goal of this protocol is to present a histochemical method that allows the accurate identification of layers and regions in the developing and adult brain where other methods fail to do so. Secondarily, in conjunction with densitometric image analysis, this method allows one to assess the distribution of synaptic zinc to reveal potential changes throughout development. This protocol describes in detail the reagents, tools, and steps necessary to successively stain frozen brain sections. Although this protocol is described using ferret brain tissue, it can easily be adapted for use in rodents, cats, or monkeys as well as in other brain regions.

We describe a histochemical procedure that reveals characteristic laminar and areal zinc staining patterns in different brain regions. The zinc-staining pattern may be used in conjunction with other anatomical markers to reliably distinguish layers and regions in the developing and adult brain.

시 냅 스 아연 Histochemistry 다른 지역과 개발 및 성인 두뇌에서 하기의 사용

Characterization of anatomical and functional brain organization and development requires accurate identification of distinct neural circuits and regions ...