이 연구는 비엔나의 도시 및 Österreichische 분야에 Laboratoriumsmedizin und Klinische Chemie 시장의 의료 과학 기금에 의해 지원 되었다.

여기에 설명 된 모든 메서드를 동물 관리 및 사용 위원회 비엔나의 의학 대학에 의해 승인 하 고 따라는 연맹의 유럽 실험실 동물 과학 협회 (FELASA)을 실시 되었습니다. 하시기 바랍니다이 프로토콜에서 설명 하는 모든 절차만 해야 참고 기관 및 정부 승인 후 뿐만 아니라 기술적으로 능숙 한 직원에 의해 수행.
1. HFD 먹인 쥐
참고: 음식 및 물 무료 12 h 명암 주기 모든 C57BL/6J 생쥐를 유지 합니다.
<ol><li>나이의 6 주, 장소 마우스, 비만 유발 하는 HFD (40-60% 지방 칼로리)에 8-12 주 동안 먹이 상체 제어 그룹 (LFD) 낮은-지방 다이어트를 하는 동안 (10% 지방 칼로리).</li>
	<li>주간 기준 생쥐의 몸 무게를 결정 합니다. 체중 곡선 HFD 먹이 그룹에서 더 높은 사면 두 그룹에서 유사한 패턴을 표시 합니다.</li>
</ol>2입니다. OGTT
참고: 경우 혈액 샘플링 시간 점 마다 15 분 OGTT 중 선택, 실험 수행 되어야 한다 병렬로 15 마우스의 최대 마우스 당 적어도 1 분 처리 시간을 위해.
<ol><li>OGTT 전날에 준비<ol>
<li>쥐 식용 수에 접근이 보장 하면서 신선한 침구와 빠른 그들 (14 h)를 테스트 하기 전에 하룻밤 새에 쥐를 전송 (예를 들어, 오후 6 시 시작 시간 오전 8시 다음날 아침에 대 한 음식을 제거). 그러나 참고: 금식 쥐 하룻밤은 표준 접근 짧은 빨리 (5-6 h)는 더 쥐 (자세한 내용 참조)에 대 한 생리.</li>
	</ol></li>
	<li>(하지만 실험 전에) 실험의 날 준비<ol>
<li>20% 포도 당 용액 10 mL를 준비 (분해 D-(+)-증류수에 포도 당). 참고: 동물에 관리 되는 모든 시 약 약리학 학년 될 필요가 및 살 균.</li>
		<li>5 µ L로 각 샘플링 시간 지점과 각 마우스에 대 한 하나의 잘 작성 하 여 플라즈마 컬렉션에 대 한 96 잘 접시를 준비 NaEDTA (0.5 M EDTA, pH 8.0에서 0.9 %NaCl, RT에 저장). 실험 하는 동안 얼음에이 접시를 저장. 참고: 자세한 검사 목록에 대 한 보충 그림 1 을 참조 하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>모든 쥐의 몸 무게를 측정 하 고 (예를 들어, 마우스 1 = 1 대시, 마우스 2 = 2 대시, 등) 쥐 쉽게 구별할 수 있도록 영구 표시와 함께 그들의 꼬리를 표시 합니다.</li>
	<li>혈당 측정 및 혈액 샘플링 (그림 2)<ol>
<li>신중 하 게 날카로운가 위를 ("변형 A" 그림2에서)를 사용 하 여 꼬리 끝의 1-2 m m 잘라. 항상 용 혈 또는 혈액 포도 당 결정에 대 한 새로운 혈액 샘플을 채취 하기 전에 조직 액으로 오염 방지 하려면 혈액의 첫 번째 드롭 다운을 닦아내십시오. glucometer와 함께 (= 시간 포인트 0) 기저 혈액 포도 당 수준 측정 하기 위한 작은 혈액 샘플 (~ 3 µ L)를 그립니다. 주의: 확인 하 고는 glucometer에 테스트 스트립의 충전 수를 조정 합니다. 참고: 대체 혈액 샘플링 방법으로 닉 마우스의 측면 꼬리 정 맥 날카로운 메스 칼 날 ("변형 B" 그림2에서). 측면 꼬리 정 맥 보통 여러 샘플에 대 한 꼬리의 기지에 쪽으로 이동 하는 꼬리 끝에서 꼬리의 길이 따라 약 1 / 3에 액세스 합니다. 현지 마 취 크림의 사용을 권장 합니다. 적어도 30에 대 한 부드러운 조직에 손가락 압력을 적용 하 여 혈액의 흐름을 중지 s 동물의 감 금 소에 반환 되기 전에.</li>
		<li>신선한 세관 (세관 수평 유지)를 사용 하 여 혈액 샘플 (약 30 µ L)를 수집 합니다. 모 세관 튜브 끝의 상단에 피 펫 팁으로 신중 하 게 공기 방울을 피하고 있는 동안 96 잘 접시의 우물에 수집 된 혈액을 추진 한 피 펫을 사용 하 여 모 세관 튜브를 비어 있습니다. 한 번에 하나씩 모든 마우스-이 절차를 반복 합니다. 참고: 혈액, 수집 또는 수집의 드롭 올바른 볼륨 (예를 들어, 30 µ L)으로 조정 하는 피 펫을 사용 하는 모 세관 튜브를 통해 혈액 컬렉션에 대 한 대안 혈액 파라핀 필름과 피펫으로에 꼬리에서 그것은 EDTA 솔루션으로. 엄격 하 게 하지 마십시오 혈액 또는 glucometer 테스트 스트립, 석유 젤리의 접촉을 그것 이후 포도 당 및 인슐린 측정에 영향을 미칠 수 있습니다. 주의:는 OGTT는 마우스에 대 한 매우 스트레스: 마른 쥐 잃을 수 있다 약 그들의 체중의 15%는 하룻밤 빠른 동안. 또한, 다른 시간 지점에서 혈액 샘플링 혈액의 상당한 손실에 지도 한다. 쉽게 혈액 샘플링, 신중 하 게 석유 젤리 mouse-tail 마사지 가능 하다. 참고: 기관 지침 설정된 기간 내 수집한 혈액의 허용 가능한 금액을 제한할 수 있습니다. 샘플링 볼륨 및 timepoints 허용 된 최대값을 초과 하지에 조정 되어야 한다. 쥐의 몸 무게 총 계산 하는 데 사용할 한다 혈액 철수 허용.</li>
	</ol></li>
	<li>몸 무게 (1 g 포도 당/kg 몸 무게, 3g/kg까지 증가 될 수이 있습니다)에 따라 포도 당 솔루션의 필요한 볼륨 계산 모든 마우스에 대 한 구강 관리를. 예를 들어 30 g의 몸 무게로 마우스 30 mg의 포도 당을 관리 하는 20% 포도 당 솔루션의 150 µ L를 해야 합니다. 참고: 마우스의 무게에 포도의 복용량을 기반 하는 표준 절차입니다. 신체 구성 데이터를 사용할 수 있는 경우 혈당의 복용량 OGTT를 계산 해야 하는 대에 따라는 엎드려 서 체 질량 (자세한 내용 참조).</li>
	<li>혈당 관리<ol>
<li>준비 everythingthat 사전에 전체 실험 기간 동안 필요 하다 (타이머, 실험 기록 시트, 포도 당 모니터와 스트립, 모세 혈관, 주사기, 포도 당 솔루션, 96 잘 접시, 메스, 계산기, 균형, 영구 마커, 벤치 서류는 팁와 장갑 플라스틱).</li>
		<li>포도 당 응용 프로그램에 대 한 단단히 아저씨에 의해 그것을 파악 하 여 마우스를 제 지. 제 지에서 왜곡에서 마우스를 방지 하 고 제대로 다시 머리를 기울이고 목 피부에 충분 한 견고를 적용 합니다. 또한 마우스 숨을 제대로 쉴 수 있는 확인 합니다. 참고: 포도 당 관리 시작 되 면 좋은 시간 관리 매우 중요 하다.</li>
		<li>조심 스럽게 먹이 바늘을 사용 하 여 위장에 직접 (단계 2.5 기준) 포도 당 솔루션을 관리할 수 있습니다. 조심 스럽게 직접 식도 쪽으로 입을 통해 먹이 바늘. 바늘을 삼 키는 마우스 허용: 바늘 전적으로 마우스의 낮은 식도/위장에 싱크. 다음에 포도 당 솔루션 (그림 3a) 주사.<ol>
<li>어떤 저항을 만났다 또는 동물 투쟁 즉시 바늘을 철회 하 고 위치를 변경할. 첫 번째 gavage 직후 타이머를 시작 하 고 1 분 간격으로 다른 모든 쥐에 포도 당을 관리. 참고: 그것은 핥 아 삼 키는, 먹이 바늘의 쉽게 삽입을 촉진 자극 마우스의 입에 한 방울 포도 당 솔루션의 먹이 바늘에서 직접 적용할 도움이 될 수 있습니다. 이 심각 하 게 동물을 다치게 수 있습니다으로 먹이 바늘을 삽입할 때에 압력을 적용 되지 않습니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>15 분 후에 glucometer와 혈액 포도 당 수준을 측정 하 고 또한 걸릴 각 마우스 (2.4 단계에서에서 설명한 세부)로 혈액 샘플 (~ 30 µ L) 동일한 순서 대로 그들은 주입 했다. 참고: 시간 관리는 매우 중요 하다; 최대한 gavage에 관해서는 동일한 시간 간격을 사용 하 여 밀접 하 게 따라 합니다. 결과 수정할 수 있습니다 스트레스를 줄이기 위해 가능한 및 전체 절차 동안 최소한으로 억제 하는 제한으로 자유롭게 이동 하는 쥐를 보자. 한 손으로 꼬리를 우유와 다른 혈액을 수집 합니다.</li>
	<li>예상된 결과 (예를 들어, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 및 180 분 포도 당 행정 후에)에 따라 선택한 시간 지점에서 2.7 단계를 반복 합니다. 선택한 시간 포인트 120 분 보다 더 긴 경우에, 쥐 식 수에 액세스할 확인 합니다. 생쥐는 항상 식 수에 대 한 액세스를 확인 하십시오. 실험으로 완료 되 면 자신의 집 새 음식 및 물에 쥐를 반환 합니다. 주의:는 OGTT는 쥐에 대 한 매우 소진. 따라서는 ITT 같은 다음 대사 시험을 수행 하기 전에 적어도 일주일 기다려.</li>
	<li>실험 후 원심 g, 30 분, 4 ° C x 2500에서 혈액 샘플 분석까지-20 ° C에서 접시의 우물을 저장 하는 상쾌한 (플라즈마)를 전송 합니다.<ol>
<li>존재 하는 경우 샘플의 혈을 기록 (섹션 3 참조).</li>
	</ol></li>
	<li>상용 ELISA를 사용 하 여 플라스마 인슐린 레벨 키트 ( 테이블의 자료를 참조) 결정의 키트 제조 업체의 지침에 따라. 참고: 금식 상태 물론 조사 생쥐의 신진 대사에이 분석 하는 동안 문제가 발생할 수 있습니다: 하룻밤 금식 인슐린 레벨 (0 번 포인트)은 매우 낮은 하 고 그러므로 검출 한계에 가까운. 이 문제를 방지 하려면 권장된 플라즈마 볼륨의 수량을 두 번 하 고 따라 ELISA 분석 실험의 결과 이등분 합니다. 다른 한편으로, 마우스 HFD 먹인 쥐에 (서) 특히 OGTT, 동안 인슐린 피크에 도달 하면, 인슐린 수치가 검출 한계를 초과할 수 있습니다: 샘플 희석 (예를 들어, 10 0.9 %NaCl) ELISA 분석 결과 반복 하 고. 플라즈마 샘플에 혈 판독 값의 감소의 결과로 인슐린의 저하로 이어질 수 있습니다. 저하는 시간, 온도, 샘플에서 헤모글로빈 농도에 따라 다릅니다. 감기 또는 인슐린 저하를 줄이기 위해 얼음에 항상 hemolyzed 샘플을 유지.</li>
</ol>3입니다. ITT
참고: OGTT (쥐, 혈액, glucometer, 및 석유 젤리 사용의 처리)에 대 한 설명 같은 예방 조치는 ITT 수행할 때 적용 될도 있다. 예를 들어 모든 주사 한다 실시 15 분 이내 1 분 간격으로 15 마우스 동시에 테스트 하는 경우. ITT, 모 세관 튜브와 혈액 샘플의 후속 컬렉션 선택 사항입니다.
<ol><li>실험 전에 준비<ol>
<li>빨리 쥐 쥐 식용 수에 접근이 보장 하면서 인슐린 주입 하기 전에 적어도 2 시간에 대 한 (예를 들어, 오전 8 시 음식 제거, 마우스 테스트 후 2-5 h).</li>
		<li>0.9%에서 인슐린 1:1,000 희석 NaCl (재고: 100 U/mL 인슐린; 작업 농도 0.1 U/mL) 20% 포도 당을 준비 하 고 (D-(+)-포도 당 솔루션에 녹아 증류수) 쥐 될 혈당 관리를. 참고: 그렇지 않으면 하룻밤 사이에 발생할 수 있습니다는 저 혈당을 피하기 위해 짧은 빠른 동물 금식 후는 ITT 수행 일반적으로 됩니다. 동물에 관리 되는 모든 시 약 약리학 학년 될 필요가 및 살 균.</li>
	</ol>
</li>
	<li>마우스의 bodyweight 측정 하 고, 꼬리를 표시 하 고 날카로운가 위를 사용 하 여 꼬리 끝을 잘라 한 앞에서 설명한 단계 2.4에서에서 OGTT에 대 한 기저 혈액 포도 당 수준을 측정.</li>
	<li>인슐린 주입<ol>
<li>Intraperitoneally 인슐린 주사를 (0.75 U 인슐린/kg 몸 무게, 미리 계산), 아저씨 방법으로 마우스를 억제.</li>
		<li>신선한을 사용 하 여, 메 마른 27 또는 30 게이지 바늘을 불편과 어떤 주사 사이트 감염의 위험을 피하기 위해 각 동물에 대 한. 참고: 피부의 살 균 인슐린 관리, 기간을 연장할 수 있습니다 고 따라서 동물에 추가적인 장애를 발생할 수 있습니다. 따라서, 그것은 권장 하지 않습니다.</li>
		<li>노출 동물의 복 부 측에 약간의 각도에서 아래로 마우스 머리 기울기. 동물의 복 부 (그림 3b)의 더 낮은 오른쪽 사분면에 메 마른 바늘 및 30 ° 각도로 경사와 함께 배치 합니다. 첫 번째 마우스 주입 후에 즉시 타이머를 시작 합니다. 참고: 낮은 복용량 ITTs (0.1 U/kg) 구체적으로 간 인슐린 감도 평가 하기 위해 수행할 수 있습니다. 관해서는 OGTT, 몸 무게에 따라 주입 볼륨 계산은 표준 절차, 복용량을 내놓고 하는 동안 상체를 신체 질량에 선호 신체 구성 데이터 사용할 수 있는 경우.</li>
	</ol>
</li>
	<li>선택한 시간 지점 (예를 들어, 15, 30, 45, 60 및 90 분 후)에서 혈당을 측정 합니다. 참고: 인슐린 쥐13에서 ~ 10 분의 짧은 하프 타임으로, 인슐린 관리 (예를 들어, h 2 후) 후 늦은 차이 인슐린 활동의 직접적인 영향을 반영 하지 않을 수 있습니다. 20% 포도 당 솔루션 경우 마우스 된다 혈당 관리 (혈액 포도 당 수준 35 mg/dl)과 죽음의 위험에.</li>
	<li>마지막으로 점, 후 음식과 물을 듬뿍 준비 자신의 집 새에 다시 쥐를 놓습니다.</li>
</ol>

<ol>
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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+phenotyping+guidelines:+assessing+glucose+homeostasis+in+rodent+models.">Metabolic phenotyping guidelines: assessing glucose homeostasis in rodent models.</a> J Endocrinol. 222 (3), G13-G25 (2014).</li><li>Arioli, V., Rossi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Errors+related+to+different+techniques+of+intraperitoneal+injection+in+mice.">Errors related to different techniques of intraperitoneal injection in mice.</a> Appl Microbiol. 19 (4), 704-705 (1970).</li><li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+injection+of+mice.">Intraperitoneal injection of mice.</a> Appl Microbiol. 17 (2), 250-251 (1969).</li><li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+glucose+homeostasis.">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter. , 23 (2007).</li><li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C-peptide+as+a+measure+of+the+secretion+and+hepatic+extraction+of+insulin.+Pitfalls+and+limitations.">C-peptide as a measure of the secretion and hepatic extraction of insulin. Pitfalls and limitations.</a> Diabetes. 33 (5), 486-494 (1984).</li><li>Hughey, C. C., Wasserman, D. H., Lee-Young, R. S., Lantier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approach+to+assessing+determinants+of+glucose+homeostasis+in+the+conscious+mouse.">Approach to assessing determinants of glucose homeostasis in the conscious mouse.</a> Mamm Genome. 25 (9-10), 522-538 (2014).</li></ol>

저자는 공개 없다.

당뇨병 및 세계의 인구에 관련 된 질병의 높은 보급은 분자 메커니즘,19질병 치료와 예방, 해결 하는 연구에 대 한 강한 요구. 제시 프로토콜에서는 OGTT와 ITT, 전신 대사 변경의 평가 대 한 강력한 도구는의 전도 서 대사 연구에 사용 되는 강력한 동물 모델 HFD 쥐의 세대에 대 한 확고 방법을 설명 합니다. 같은 인슐린 저항. 이 문서에 소개 된 방법이 의심된 유전자, 환경 요인 뿐만 ...

선진국에서 비만 당뇨병 물리적인 비활동 및 가공된 식품의 과도 한 소비는 급속 한 도시 화, 산업화로 세계화에 의해 구동 됩니다 효과 전염병 차원에 도달. 비록 연구 인슐린 저항 및 그것의 공동 morbidities, 혈과 동맥 경화, 지난 십년 동안 돌기를 얻고 있다와 같은 건강 및 질병에 신진 대사를 조절 하는 복잡 한 생물 학적 메커니즘 남아 불완전 하 게 이해 여전히 방지 하 고 치료이 질병1새로운 치료 modalities에 대 한 긴급 한 필요가 있다.
그것의 counter-regulatory 호르몬 글 루카 곤과 인슐린, 세포 에너지 공급 및 다량 영양소 균형, 따라서 또한 적절 한 조직의 혈액 포도 당 농도2유지의 주 레 귤 레이 터 역할을 합니다. 다른 macronutrients, 체액 성 요인으로 신경 입력 추가 수정이 응답 하는 동안 자체 포도 당 췌 장 β-세포, 인슐린 분 비의 주요 자극 제 중 하나로 작동 합니다. 인슐린 근육 및 지방 세포에 과잉 혈액 포도 당의 확산을 촉진 및 추가 분해로 단백질-또는 지방산 합성을 각각 활성화 하 여 결과적으로 먹이 상태 근육 프로세스를 트리거합니다. 또한, 인슐린 gluconeogenesis를 억제 함으로써 간 포도 당 출력을 억제 합니다. 만성 과도 한 에너지 소비와 메타 염증으로 이어질 hyperinsulinemia 주변 인슐린 저항 인슐린 수용 체 식으로 변경 따라서 장애인 인 하류 신호 통로에 다운 레 귤 레이 션 때문 인슐린 중재 하는 포도 당 처리 뿐만 아니라 간 포도 당 생산3,4,,56의 부족 한 억제에 감도.
질병의 유전, 영양, 또는 실험적인 유도 동물 모델의 광범위 인슐린 저항 및 당뇨병의 동반 질환7의 다양 한 형태의 분자 메커니즘 연구를 우수한 도구 수 입증 된 . 대표적인 예는 특징 조합에서 증가 식이 섭취로 인해 급격 한 체중 증가 인슐린 저항8, 의 결과로 감소 신진 대사 효율, 널리 사용 되 고 잘 설립 HFD 유도 마우스 모델은 9. 단식 혈액 포도 당 및 인슐린 수치에 상승 인간과 동물 모델에서 혈당 관리를 장애 허용 오차 있습니다 인슐린 저항의 자주 사용된 지표 및 포도의 다른 조직의 변경 대사입니다. 모니터링 혈액 포도 당 및 인슐린 수치 또는 자극 후 기저 상태에 따라서 쉽게 접근할 수 있는 정보입니다.
현재 프로토콜 설명 두 자주 사용된 방법, 구두 포도 당 내성 검사 (OGTT) 및 인슐린 저항 테스트 (ITT), 대사 표현 형의 특성을 조사 하는 유용한 HFD 먹인 쥐의 생성 포도 당 대사에 변경입니다. 우리는 세부 사항에, 시간이 지남에 구두로 관리 포도 당 부하 및 인슐린 분 비의 처리를 평가 OGTT 설명 합니다. 또한, 우리는 ITT 인슐린 응답을 bolus로 혈액 포도 당 농도 모니터링 하 여 전신 인슐린-행동 조사를 수행 하는 방법에 지침을 제공 합니다. 이 문서에서 설명 하는 프로토콜 잘 설립 하 고 여러 연구10,,1112에 사용 되었습니다. 약간의 수정 성공을 증가 하는 데 도움이 될 수 있습니다, 뿐만 아니라 실험적인 디자인 및 데이터 분석으로 유용한 힌트 잠재적인 함정을 피하기 위해에 대 한 지침을 제공 합니다. 여기에 설명 된 프로토콜 몸 전체 포도 당 대사와 인슐린 저항 등의 관련된 질환에 유전, 약물, 식이, 및 기타 환경 요인의 영향을 조사 하기 위해 매우 강력한 도구가 될 수 있습니다. 포도 당 또는 인슐린 자극, 이외에 다른 화합물의 다양 한 개별 연구의 목적에 따라 자극을 위해 사용할 수 있습니다. 이 원고를의 범위 밖에 있지만 다른 많은 다운스트림 응용 프로그램에서 수행할 수 있습니다 그려진된 혈액 샘플의 혈액 포도 당 및 인슐린 (예를들면, 지질 및 지단백 프로필) 값의 분석 등 자세한 뿐만 아니라 신진 대사 마커 (예를 들어, 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR), 서쪽 오 점 분석 및 Enzyme-Linked Immunosorbent 분석 결과 (ELISA))의 분석. 더 cytometry 교류 하 고 형광 활성화 된 세포 분류 (FACS) transcriptomic, proteomic, 및 metabolomic 접근 타겟이 불분명 한 분석을 위해 활용 될 수 있습니다 하는 동안 고유한 단일 세포 인구에 효과 조사 하기 위해 적용 될 수 있습니다.
전반적으로, 우리 또한 전신 대사 변경는 OGTT와 질병 병 인 공부를 위한 유용한 도구가 될 수 있는 ITT 공부 두 가지 강력한 방법을 설명 하면서 HFD 유도 마우스 모델을 생성 하는 간단한 프로토콜을 제공 하 고 특히 인슐린 저항 및 당뇨병 등 대사 관련 질환의 분야에서에서 새로운 치료를 개발.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse strain: C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>664</td>
			<td>LFD/HFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accu Chek Performa - Glucometer</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6870228</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accu Chek Performa - Strips</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6454038</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8769</td>
			<td>OGTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Actrapid - Insulin</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>417642</td>
			<td>ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reusable Feeding Needles</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>#18061-22</td>
			<td>OGTT; 22 gauge (-24 gauge for young mice)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnifix-Fine dosing syringes</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Insulin needle (30G x 1/3&#34;; &#248; 0.30 x 13 mm)</td>
			<td>Braun</td>
			<td>304000</td>
			<td>ITT; lean mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican (G 27 x 3/4&#34;; &#248; 0.40 x 20 mm)&#160;&#160;</td>
			<td>Braun</td>
			<td>4657705</td>
			<td>ITT; mice on HFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well PCR Plates, non-skirted, flexible</td>
			<td>Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td>SP0016</td>
			<td>OGTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasensitive Mouse Insulin ELISA kit</td>
			<td>Crystam Chem</td>
			<td>90080</td>
			<td>OGTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet with 60% kcal% fat</td>
			<td>Research Diets Inc</td>
			<td>D12492</td>
			<td>mice on HFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet with 10% kcal% fat.</td>
			<td>Research Diets Inc</td>
			<td>D12450B</td>
			<td>mice on LFD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAND micro haematocrit capillary</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BR749321</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vaseline - creme</td>
			<td>Riviera</td>
			<td>P1768677</td>
			<td>OGTT/ITT</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study of in vivo glucose metabolism in high-fat diet-fed mice using oral glucose tolerance test (ogtt) and insulin tolerance test (itt)

비만 2 형 당뇨병, 인슐린 자극 포도 당 통풍 관을 조직의 포도 당 물질 대사의 총에서는 저항이 특징인 질병의 병 인에 가장 중요 한 단일 위험 요소를 나타냅니다. 포도 당 대사에 대 한 이해에 상당한 진행에도 불구 하 고 건강과 질병의 규제의 분자 메커니즘 아래 조사 동안 남아 소설 접근 방지 하 고 당뇨병 치료는 급하다. 파생 된 포도 당 인슐린, 먹이 주 동안 세포질 단백 동화 과정의 주 레 귤 레이 터로 서 역할 하 고 따라서 혈당 균형의 췌 장 분 비를 자극 하는 다이어트는 조직의 에너지 상태를 유지 하기 위해 레벨. 만성 지나치게 트리거 메타-염증, 주변 인슐린 수용 체 관련 변경에 이르게 신호 하 고 따라서 인슐린 중재 하는 포도 당 처리에 감도 감소 시킨다. 이러한 이벤트 궁극적으로 귀 착될 감소 뿐만 아니라 높은 단식 포도 당 및 인슐린 수치에 포도 당 내성에 인슐린 저항의 중요 한 지표 역할을. 여기, 우리 세대 및 높은 지방 다이어트 (HFD)의 변화 특성에 대 한 프로토콜을 제시-다이어트 유발 된 인슐린 저항의 자주 사용 모델 생쥐를 먹이. 우리는 구두로 관리 포도 당 부하 및 인슐린 분 비에는 시간이 지남에 따라 주변 처리 모니터링 경구 포도 당 내성 검사를 (OGTT), 자세히 보여 줍니다. 또한, 인슐린 내성 검사 (ITT) 전신 인슐린 작업 모니터링을 위한 프로토콜 선물이. 함께, 이러한 메서드 및 다운스트림 응용 프로그램 강력한 도구를를 구체적으로 평가 하는 포도 당 대사에 변경으로도 쥐의 일반적인 대사 표현 형의 특성을 나타냅니다. 그들은 인슐린 저항, 당뇨병 및 비만 치료 내정간섭의 효과 테스트로 뿐만 아니라 병의 더 나은 이해를 제공의 광범위 한 연구 분야에 특히 유용할 수 있습니다.

그림 1 규정식에 쥐의 대사 형질에 대 한 도식 시간 테이블을 보여 줍니다. LFD 그룹 컨트롤 그룹으로 될 수 있습니다 약 6 주 나이, 마우스는 HFD에 배치 한다. 중요 한 것은, 몸 무게는 몸 무게 예상된 증가 관찰을 매주 결정 되어야 합니다. 어떤 종류의 스트레스 (예를 들어, 잡음 또는 공격적인 남성 행동) 몸 체중을 방해할 수 있습니다 하 고 즉?...

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Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test OGTT and Insulin Tolerance Test ITT

높은 지방 다이어트를 먹이 쥐 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)과 인슐린 내성 검사 (ITT)를 사용 하 여 포도 당 대사 Vivo에서 의 연구

현재 문서 생성 및 다이어트 유발 된 인슐린 저항 및 비만 모델 높은 지방 다이어트를 먹이 쥐의 대사 특성에 설명합니다. 그것은 더 상세한 프로토콜 경구 포도 당 내성 검사 및 포도 당 물질 대사에서 vivo에서의 전신 변경 모니터링 인슐린 내성 검사 수행을 갖추고 있습니다.

Obesity represents the most important single risk factor in the pathogenesis of type 2 diabetes, a disease which is characterized by a resistance to ...

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Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

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67.3K 조회수.  Medical University of Vienna. 현재 문서 생성 및 다이어트 유발 된 인슐린 저항 및 비만 모델 높은 지방 다이어트를 먹이 쥐의 대사 특성에 설명합니다. 그것은 더 상세한 프로토콜 경구 포도 당 내성 검사 및 포도 당 물질 대사에서 vivo에서의 전신 변경 모니터링 인슐린 내성 검사 수행을 갖추고 있습니다.

비디오: Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test OGTT and Insulin Tolerance Test ITT

Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the abilities to extract and use the information encoded in the auditory signal. We refer to these as listening skills (or auditory processing AP). Deficits in these skills are associated with delayed language and literacy development, though the nature of the relevant deficits and their causal connection with these delays is hotly debated.
When a child is referred to a health professional with normal hearing and unexplained difficulties in listening, or associated delays in language or literacy development, they should ideally be assessed with a combination of psychoacoustic (AP) tests, suitable for children and for use in a clinic, together with cognitive tests to measure attention, working memory, IQ, and language skills. Such a detailed examination needs to be relatively short and within the technical capability of any suitably qualified professional. Current tests for the presence of AP deficits tend to be poorly constructed and inadequately validated within the normal population. They have little or no reference to the presenting symptoms of the child, and typically include a linguistic component. Poor performance may thus reflect problems with language rather than with AP. To assist in the assessment of children with listening difficulties, pediatric audiologists need a single, standardized child-appropriate test battery based on the use of language-free stimuli.
We present the IMAP test battery which was developed at the MRC Institute of Hearing Research to supplement tests currently used to investigate cases of suspected AP deficits. IMAP assesses a range of relevant auditory and cognitive skills and takes about one hour to complete. It has been standardized in 1500 normally-hearing children from across the UK, aged 6-11 years. Since its development, it has been successfully used in a number of large scale studies both in the UK and the USA. IMAP provides measures for separating out sensory from cognitive contributions to hearing. It further limits confounds due to procedural effects by presenting tests in a child-friendly game-format. Stimulus-generation, management of test protocols and control of test presentation is mediated by the IHR-STAR software platform. This provides a standardized methodology for a range of applications and ensures replicable procedures across testers. IHR-STAR provides a flexible, user-programmable environment that currently has additional applications for hearing screening, mapping cochlear implant electrodes, and academic research or teaching.

A test battery (IMAP) for performing an in-depth assessment of auditory and cognitive abilities contributing to listening skills is described. It is quick to administer, child-friendly and free from linguistic confounds. Stimulus generation and protocol management are controlled via a software platform (IHR-STAR) to ensure replicable procedures.

IMAP 테스트 배터리 : 듣기의 감각을 만들기

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

연구

의학

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time and temperature restrictions, technical sophistication, and cost of reagents, in particular monoclonal antibodies to measure CD4 on blood cells, the only currently acceptable method. A commonly used cost-saving and time-saving laboratory strategy is to calculate, rather than measure certain blood values. For example, LDL levels are calculated using the measured levels of total cholesterol, HDL, and triglycerides1. Thus, identification of cell-free correlates that directly regulate the number of CD4+ T cells could provide an accurate method for calculating CD4 counts due to the physiological relevance of the correlates.
The number of stem cells that enter blood and are destined to become circulating CD4+ T cells is determined by the chemokine CXCL12 and its receptor CXCR4 due to their influence on locomotion2. The process of stem cell locomotion into blood is additionally regulated by cell surface human leukocyte elastase (HLECS) and the HLECS-reactive active &alpha;1proteinase inhibitor (&alpha;1PI, &alpha;1antitrypsin, SerpinA1)3. In HIV-1 disease, &alpha;1PI is inactivated due to disease processes 4. In the early asymptomatic categories of HIV-1 disease, active &alpha;1PI was found to be below normal in 100% of untreated HIV-1 patients (median=12 &mu;M, and to achieve normal levels during the symptomatic categories4, 5. This pattern has been attributed to immune inactivation, not to insufficient synthesis, proteolytic inactivation, or oxygenation. We observed that in HIV-1 subjects with &gt;220 CD4 cells/&mu;l, CD4 counts were correlated with serum levels of active &alpha;1PI (r2=0.93, p&lt;0.0001, n=26) and inactive &alpha;1PI (r2=0.91, p&lt;0.0001, n=26) 5. Administration of &alpha;1PI to HIV-1 infected and uninfected subjects resulted in dramatic increases in CD4 counts suggesting &alpha;1PI participates in regulating the number of CD4+ T cells in blood 3.
With stimulation, whole saliva contains sufficient serous exudate (plasma containing proteinaceous material that passes through blood vessel walls into saliva) to allow measurement of active &alpha;1PI and the correlation of this measurement is evidence that it is an accurate method for calculating CD4 counts. Briefly, sialogogues such as chewing gum or citric acid stimulate the exudation of serum into whole mouth saliva. After stimulating serum exudation, the activity of serum &alpha;1PI in saliva is measured by its capacity to inhibit elastase activity. Porcine pancreatic elastase (PPE) is a readily available inexpensive source of elastase. PPE binds to &alpha;1PI forming a one-to-one complex that prevents PPE from cleaving its specific substrates, one of which is the colorimetric peptide, succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA3NA). Incubating saliva with a saturating concentration of PPE for 10 min at room temperature allows the binding of PPE to all the active &alpha;1PI in saliva. The resulting inhibition of PPE by active &alpha;1PI can be measured by adding the PPE substrate SA3NA. (Figure 1). Although CD4 counts are measured in terms of blood volume (CD4 cells/&mu;l), the concentration of &alpha;1PI in saliva is related to the concentration of serum in saliva, not to volume of saliva since volume can vary considerably during the day and person to person6. However, virtually all the protein in saliva is due to serum content, and the protein content of saliva is measurable7. Thus, active &alpha;1PI in saliva is calculated as a ratio to saliva protein content and is termed the &alpha;1PI Index. Results presented herein demonstrate that the &alpha;1PI Index provides an accurate and precise physiologic method for calculating CD4 counts.

The &#945;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

A CD4 enumeration method, the &#x03B1;-test, is described which uses whole saliva to provide rapid and accurate CD4 counts. The &alpha;-test costs pennies and eliminates the need for technical training, costly reagents such as monoclonal antibodies, instrumentation, refrigeration, transport of samples, as well as collection and handling of blood.

α-테스트 : 전체 타액을 사용하여 빠른 셀 프리 CD4의 열거

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the arteries (&beta;2). When systemically administered, it increases cardiac demand. Thus, dobutamine unmasks abnormal rhythm or ischemic areas potentially at risk of infarction. 
Monitoring of heart function during a cardiac stress test can be performed by either ecocardiography or cardiac catheterization. The latter is an invasive but more accurate and informative technique that the former.
Cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization accomplished as described here allows, in a single experiment, the measurement of the following hemodynamic parameters: heart rate (HR), systolic pressure, diastolic pressure, end-diastolic pressure, maximal positive pressure development (dP/dtmax) and maximal negative pressure development (dP/dtmin), at baseline conditions and under increasing doses of dobutamine.
As expected, in normal mice we observed a dobutamine dose-related increase in HR, dP/dtmax and dP/dtmin. Moreover, at the highest dose tested (12 ng/g/min) the cardiac decompensation of high fat diet-induced obese mice was unmasked.

We describe the protocol to perform a cardiac stress test induced by dobutamine and monitored by cardiac catheterization in normal mice. Also we show its application to unmask subclinical cardiac disease in high fat diet-induced obese mice.

심장 스트레스 테스트 Dobutamine에 의해 유도와 마우스의 심장 Catheterization에 의해 모니터링

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

<em&gt; 생체 내</em혈관 투과율을 테스트하려면&gt; 분석

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used techniques require killing of the animals and postmortem recovery of the meal1,2. This approach prevents longitudinal studies to determine changes in gastric emptying with age and progression of disease. The commonly used [13C]-octanoic acid breath test for humans3 has been modified for use in mice4-6 and rats7 and we previously showed that this test is reliable and responsive to changes in gastric emptying in response to drugs and during diabetic disease progression8. In this video presentation the principle and practical implementation of this modified test is explained. As in the previous study, NOD LtJ mice are used, a model of type 1 diabetes9. A proportion of these mice develop the symptoms of gastroparesis, a complication of diabetes characterized by delayed gastric emptying without mechanical obstruction of the stomach10.
This paper demonstrates how to train the mice for testing, how to prepare the test meal and obtain 4 hr gastric emptying data and how to analyze the obtained data. The carbon isotope analyzer used in the present study is suitable for the automatic sampling of the air samples from up to 12 mice at the same time. This technique allows the longitudinal follow-up of gastric emptying from larger groups of mice with diabetes or other long-standing diseases.

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Determination of gastric emptying with a non-invasive [13C]-octanoic acid breath test for tracking gastroparesis in female NOD LtJ mice.

를 사용하여 비 비만 당뇨병 마우스의 위 비우는의 평가 [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoic 산성 호흡 시험

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical profiles, inclusive of blood glucose levels in both the fed and fasted state, HbA1c, insulin levels, clinical history of diet, body composition, and body weight status, an assessment of normal and abnormal glycemic control can be made. Interpretation of an IVGTT is done through measurement of changes in glucose and insulin levels over time in relation to the dextrose challenge. Critical components to be considered are: peak glucose and insulin levels reached in relation to T0 (end of glucose infusion), the glucose clearance rate K derived from the slope of rapid glucose clearance in the first 20 min (T1 to T20), the time to return to glucose baseline, and the area under the curve (AUC). These IVGTT measures will show characteristic changes as glucose homeostasis moves from a healthy to a diseased metabolic state5. Herein we will describe the characterization of nonhuman primates (Rhesus and Cynomolgus macaques), which are the most relevant animal model of Type II diabetes (T2D) in humans and the IVGTT and clinical profiles of these animals from a lean healthy, to obese dysmetabolic, and T2D state 8, 10, 11.

The goal of this protocol is to present a standard method to perform intravenous glucose tolerance tests (IVGTTs) to assess glycemic control in nonhuman primates and assess their metabolic status from healthy to dysmetabolic.

정맥 당부 하 검사와 비인간 영장류의 대사 상태의 특성

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT

This paper describes the use of 18F-FDG and micro-PET/CT imaging to determine in vivo glucose metabolism kinetics in mice (and is transferable to rats). Impaired uptake and metabolism of glucose in multiple organ systems due to insulin resistance is a hallmark of type 2 diabetes. The ability of this technique to extract an image-derived input function from the vena cava using an iterative deconvolution method eliminates the requirement of the collection of arterial blood samples. Fitting of tissue and vena cava time activity curves to a two-tissue, three compartment model permits the estimation of kinetic micro-parameters related to the 18F-FDG uptake from the plasma to the intracellular space, the rate of transport from intracellular space to plasma and the rate of 18F-FDG phosphorylation. This methodology allows for multiple measures of glucose uptake and metabolism kinetics in the context of longitudinal studies and also provides insights into the efficacy of therapeutic interventions.

Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT

This study describes a protocol that uses 18F-FDG and positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) imaging, together with kinetic modelling, to quantify the in vivo, real-time uptake of 18F-FDG into tissues.

사용 포도당 대사 속도론 결정<sup&gt; (18)</sup&gt; F-FDG 마이크로 PET / CT

This paper describes the use of 18F-FDG and micro-PET/CT imaging to determine in vivo glucose metabolism kinetics in mice (and is transferable to rats). ...

Improving Strength, Power, Muscle Aerobic Capacity, and Glucose Tolerance through Short-term Progressive Strength Training Among Elderly People

This protocol describes the simultaneous use of a broad span of methods to examine muscle aerobic capacity, glucose tolerance, strength, and power in elderly people performing short-term resistance training (RET). Supervised progressive resistance training for 1 h three times a week over 8 weeks was performed by RET participants (71&#177;1 years, range 65-80). Compared to a control group without training, the RET showed improvements on the measures used to indicate strength, power, glucose tolerance, and several parameters of muscle aerobic capacity. Strength training was performed in a gym with only robust fitness equipment. An isokinetic dynamometer for knee extensor strength permitted the measurement of concentric, eccentric, and static strength, which increased for the RET group (8-12% post- versus pre-test). The power (rate of force development, RFD) at the initial 0-30 ms also showed an increase for the RET group (52%). A glucose tolerance test with frequent blood glucose measurements showed improvements only for the RET group in terms of blood glucose values after 2 h (14%) and the area under the curve (21%). The blood lipid profile also improved (8%). From muscle biopsy samples prepared using histochemistry, the amount of fiber type IIa increased, and a trend towards a decrease in IIx in the RET group reflected a change to a more oxidative profile in terms of fiber composition. Western blot (to determine the protein content related to the signaling for muscle protein synthesis) showed a rise of 69% in both Akt and mTOR in the RET group; this also showed an increase in mitochondrial proteins for OXPHOS complex II and citrate synthase (both ~30%) and for complex IV (90%), in only the RET group. We demonstrate that this type of progressive resistance training offers various improvements (e.g., strength, power, aerobic capacity, glucose tolerance, and plasma lipid profile).

The effect of short-term resistance training on elderly people was investigated through the simultaneous use of several methods. Compared to a control group, many improvements were seen, including on muscle aerobic capacity, glucose tolerance, strength, power, and muscle quality (i.e., protein involved in cell signaling and muscle fiber type composition).

This protocol describes the simultaneous use of a broad span of methods to examine muscle aerobic capacity, glucose tolerance, strength, and power in ...

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues contributes to type 2 diabetes mellitus (T2DM) development and appetite regulation in the hypothalamus. Chemokine CCL5 and C-C chemokine receptor type 5 (CCR5) levels have been suggested to mediate arteriosclerosis and glucose intolerance in type 2 diabetes mellitus (T2DM). In addition, CCL5 plays a neuroendocrine role in the hypothalamus by regulating food intake and body temperature, thus, prompting us to investigate its function in hypothalamic insulin signaling and the regulation of peripheral glucose metabolism.
The micro-osmotic pump brain infusion system is a quick and precise way to manipulate CCL5 function and study its effect in the brain. It also provides a convenient alternative approach to generating a transgenic knockout animal. In this system, CCL5 signaling was blocked by intracerebroventricular (ICV) infusion of its antagonist, MetCCL5, using a micro-osmotic pump. The peripheral glucose metabolism and insulin responsiveness was detected by the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT). Insulin signaling activity was then analyzed by protein blot from tissue samples derived from the animals.
After 7-14 days of MetCCL5 infusion, the glucose metabolism and insulin responsiveness was impaired in mice, as seen in the results of the OGTT and ITT. The IRS-1 serine302 phosphorylation was increased and the Akt activity was reduced in mice hypothalamic neurons following CCL5 inhibition. Altogether, our data suggest that blocking CCL5 in the mouse brain increases the phosphorylation of IRS-1 S302 and interrupts hypothalamic insulin signaling, leading to a decrease in insulin function in peripheral tissues as well as the impairment of glucose metabolism.

This protocol studies the role of chemokine (C-C motif) ligand 5 (CCL5) in the hypothalamus by delivering an antagonist, MetCCL5, into the mouse brain using a micro-osmotic pump brain infusion system. This transient inhibition of CCL5 activity interrupted hypothalamic insulin signaling, leading to glucose intolerance and peripheral systemic insulin sensitivity.

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...

높은 지방 다이어트를 먹이 쥐 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)과 인슐린 내성 검사 (ITT)를 사용 하 여 포도 당 대사 Vivo에서 의 연구

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