우리 닥터 프레드릭 랭, 메릴랜드 앤더슨 암 센터를 GBM PDX neurospheres에 대 한 감사합니다. 이 작품은 패배 GBM 연구 협력, 국가 뇌 종양 학회 (프랭크 나리), R01-NS080939 (프랭크 나리), 제임스 미 맥도 넬 재단 (프랭크 나리);의 자회사에 의해 지원 되었다 호르헤 베 니 테 스는 수상에서에 미국 뇌 종양 협회 (ABTA);에 의해 지원 되었다 Ciro Zanca 미국-이탈리아어 암 재단 박사 후 연구 친교에 의해 부분적으로 지원 되었다. 프랭크 푸 르 나리 암 연구에 대 한 루드비히 연구소에서 추가 지원과 급여를 받습니다.

실험적인 연구 동물 lentivirus transduce 암 세포를 같은 전염 성 요원의 활용 기관 동물 관리 프로그램 및 기관 biosafety 위원회에 의해 사전 승인을 받아야 합니다. 이 프로토콜은 캘리포니아 대학 샌디에고 (UCSD)의 동물 보호 지침을 따릅니다.
1. FP635 또는 FP720 구문 세포종 세포의 라벨
<ol><li>생산 및 Tiscornia 그 외 여러분 에 의해 설명 하는 프로토콜에 따라 lentivirus 정화 12
</li>
	<li>DMEM 플러스 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 15 cm 접시; 인간의 glioma 셀 라인에서 문화 약 2.0 x 106 셀 DMEM과 문화 2.0 x 106 인간의 세포종 환자 파생 (GBM-PDX) 분야 또는 F12 B27와 1:1 매체와 인간 재조합 표 피 성장 인자 (EGF, 20 ng/mL) 및 FGF 보완 / (10 ng/mL) T75 플라스 크에.</li>
	<li>모든 셀에서 37 ° C, 5% CO2, 그리고 100% 상대 습도 유지 합니다.</li>
	<li>세포 분열<ol>
<li>Glioma 셀:는 상쾌한 접시에서 제거 하 고 glioma 세포를 트립 신 1 X의 3-5 mL를 추가.</li>
		<li>GBM 분야: 15 mL 튜브에 세포를 pipetting으로 세포를 수집.<ol>
<li>탁상 원심 분리기를 사용 하 여 실 온에서 5 분 동안 200 x g에 GBM 분야 아래로 회전 합니다.</li>
			<li>제거는 상쾌한 고 세포 분리 솔루션의 3-5 mL를 추가 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>10-15 분 동안 37 ° C에서 모든 셀을 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>조심 스럽게 몇 번 위아래로 pipetting으로 세포 분열 (분야 및 glioma 셀 완료 해리) 및 5 분 동안 200 x g에 아래로 회전.</li>
	<li>상쾌한을 제거 하 고 여러 번 위아래로 pipetting으로 매체의 5 mL로 세포를 resuspend. Trypan 블루 제외 하 여 세포 생존 능력을 결정 합니다.</li>
	<li>플레이트 1.0 x 106 10 cm 접시에 대상 셀의 pipetting으로 매체의 5 mL와 함께.</li>
	<li>감염 (MOI) Tiscornia 그 외 여러분 에 의해 설명 된 대로 5의 다양성에서 형광 단백질을 표현 lentivirus와 셀 transduce 12 고 37 ° c.에 품 어</li>
	<li>24 시간 후 transduced 세포에서 매체를 제거, 신선한 매체의 5 mL를 추가 하 고 37 ° c.에 추가 48 h에 대 한 품 어</li>
	<li>1.4-1.6 단계에 설명 된 대로 단일 셀 서 스 펜 션에 감염 된 세포를 분리. 5 분 동안 200 x g에서 셀 아래로 회전 하 고 솔루션을 정렬의 500 µ L에서 resuspend (인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 1 %FBS).</li>
	<li>FACS 튜브에 세포 현 탁 액을 플라스틱. 공동의 4', 죽은 세포를 제외 하려면 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) dihydrochloride 1 µ L/mL로 세포 얼룩. 네거티브 컨트롤 흐름 cytometer 게이츠를 설정 하는 데 필요한 (비 불리고 세포와 세포 transduced 비 DAPI 스테인드 /).</li>
	<li>Basu 외 에 설명 된 대로 솔루션을 정렬에 DAPI 음수가 형광 양성 세포를 정렬 13, 15 mL 원뿔 튜브로 정렬된 셀을 수집.</li>
	<li>5 분 동안 200 x g에서 정렬된 셀 아래로 회전 시키십시오, 상쾌한, 제거 하 고 문화 매체의 5 mL에 resuspend. 시드 pipetting으로 10 cm 접시에 정렬 된 셀입니다. 적어도 48 72 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.</li>
	<li>해리 셀 정렬된 셀 확장 단계 1.4-1.6 그리고 vivo에서 실험에 대 한 여러 요리에 도금. 셀 정렬 준비 및 정화에 대 한 자세한 내용은 참고: Basu 외. 13
</li>
</ol>2. intracranial 주입 세포종 세포 iRFP 태그의 Immunodeficient 마우스
참고: 시작 하기 전에 수술, 수술 실 및 도구 절차에 대 한 깨끗 한 되어 있는지 확인. Immunodeficient athymic 누드 (Foxn1nu) 남성 또는 여성 쥐, 4-5 주 오래 된과 intracranial 주사에 대 한 17-19 g 사이 사용 합니다. 도착 후 그리고 수술 전에 동물은 적어도 3 일 동안 보관 한다.
<ol><li>세포 준비<ol>
<li>수확 하 고 형광 긍정적인 glioma 셀 단일 세포 현 탁 액 (1.4-1.6 단계)로 해리 동물 당 주입 당 PBS의 2-5 µ L에서 0.5 또는 1.0 x 106 셀 resuspend. 얼음에 장소와 microcentrifuge 1.5 mL 튜브에 세포 현 탁 액을 플라스틱.</li>
	</ol>
</li>
	<li>마 취 준비 및 관리<ol>
<li>케 타 민 (100mg/kg) 및 마우스 몸 무게의 20 그램 당 xylazine (10 mg/kg)를 포함 하는 염 분 해결책의 200 µ L를 준비 합니다. 그리고 무게는 동물 마 취의 적절 한 복용량을 계산.</li>
		<li>마 취의 복 주사를 제공 하 고 탈수를 방지 하기 위해 눈에 안과 연 고를 적용. 이 단계에 대 한 자세한 내용은 참조 캐슬 린 외. 14 장소 37 ° c.에 미리 데워 진된 물 열 패드에 동물</li>
		<li>그는 동물은 취 발가락 핀치 응답 (페달 반사), 모니터링 하 여 일반적으로 5-10 분 이내 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Intracranial 주입<ol>
<li>5 µ L 로드 세포 현 탁 액 및 프로브 홀더에서 마운트 해밀턴 주사기 (바늘 무뚝뚝한 끝).</li>
		<li>작은 동물 정위 적 프레임에 마우스를 놓고 귀 바, Cetin 외. 설명된 내용을 따라 니 어댑터를 사용 하 여 머리를 수정 15
</li>
		<li>70% 에탄올과 betadine 솔루션으로 머리를 소독. 있는지 확인 외과 사이트 완료 살 균 합니다. 작은 메스와 중간 절 개를 수행 하 고 피부와 연결 어 조직.</li>
		<li>해밀턴 주사기는 micromanipulator를 사용 하 여 bregma 지점에 놓습니다.</li>
		<li>프로브 홀더 1.0 m m anteroposterior와 2.0 m m 측면 bregma 지점에서 이동 합니다. 이 위치를 연필로 표시 합니다.</li>
		<li>이 위치에서 주의깊게 확인 구멍 두개골에 micromotor 휴대용 드릴 혈관 표시 될 때까지 아래쪽으로 약간의 압력을 적용 하 여. 거미 집 모양의 교 및 뇌 실질을 방해 하지 않습니다.</li>
		<li>버 구멍에 바늘을 소개 하 고 사전 pial 표면 아래 3.0 m m.</li>
		<li>볼륨 (2-5 µ L) 및 유량 (1 µ L/min) 사출 동력된 stereotaxic 인젝터를 사용 하 여 설정 하거나 수동으로 주사를 수행 합니다.</li>
		<li>주입 후 1.0 m 마다 1 분을 오름차순으로 바늘을 점차적으로 제거 하 고 70% 에탄올 주사 사이트를 청소 합니다.</li>
		<li>가까운 피부 상처 수술 스테이플 또는 외과 봉합 (바늘이 라고도 함) 하 여 고 캐슬 린 외. 14 대 한 자세한 내용입니다은.</li>
	</ol>
</li>
	<li>동물 복구<ol>
<li>동물 물 열 패드 (37 ° C)에 전송 하 고 전체 복구까지 체온, 호흡 속도 심장 박동을 모니터링. 표준 프로토콜 당 무 통을 관리 합니다. 참고: 정위 적 절차에 대 한 자세한 내용은, 수술, 그리고 좌표를 참조 다른 보고서5,,1415.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. FMT 이미징
참고: 실험 목표에 따라 iRFP 태그 세포종 세포 수 모니터링 비보 전에, 하는 동안, 또는 치료 후. 목적, 이미징 동물 isoflurane 유도 챔버를 사용 하 여 anesthetize, 스캔 및 이미지 FMT 영상의 도킹 스테이션에서 동안 이미징 카세트에서 유지.
<ol><li>감 금 소 및 isoflurane 유도 실에서 장소에서 동물을 제거 합니다. 챔버를 닫고 산소 흐름 및 기화 기 3-5%.</li>
	<li>동물을 모니터링 때까지 그것은 완전히 마 취, 일반적으로 1-2 분 무 의식 내의 동물 해야 응답 하지 외부 자극에.</li>
	<li>약 실에서 마 취 동물을 제거 하 고 동물에에서 넣어 이미징 카세트 헤드 어댑터를 먼저 배치 하 여 아래로 향하게 하는 동물을 배치 하 여 다음. 머리는 카세트의 중앙에 위치 하 고 있는지 확인 합니다.</li>
	<li>상단에 카세트의 상단 접시를 놓고 17 m m까지 조정 노브를 조입니다.</li>
	<li>일단 그 동물 안전에 이미징 카세트, 카세트는 isoflurane 동물 마 취 유지 하 양수는 FMT 영상의 내부 도킹 스테이션에 삽입 하 여 이미지를 진행.</li>
	<li>소프트웨어 아이콘을 두 번 클릭 하 여 영상 및 분석기 소프트웨어를 실행 합니다.</li>
	<li>"실험적인 탭" 창에서 "데이터베이스" 및 "연구 그룹"을 선택 합니다.</li>
	<li>"스캔 탭" 창에가 고 "제목 선택"을 클릭 하 여 이미지에 주제를 선택 합니다. 또한, "레이저 채널" 패널에 레이저 채널을 선택 합니다. FP635 표시 된 셀에 대 한 "레이저 채널 635 nm"를 선택 하 고 "채널 680 nm 레이저" FP720 표시 된 셀을 선택 합니다.</li>
	<li>"스캔 탭" 창에서 "캡처" 옵션을 클릭 하 여 이미지를 취득 합니다. 다음을 클릭 하 고 소스 위치, 일반적으로 동측 측에 대 한 20-25 소스 내에서 수를 결정된을 캡처한 이미지에서 검색 필드를 끌어 검색 필드를 조정 합니다.</li>
	<li>"재건 대기열에 추가" 옵션 확인 하 고 "검색 탭" 창에서 "스캔"을 누르십시오.</li>
	<li>스캔 완료 될 때까지 하 고 영상 카세트 도킹 스테이션에서 제거.</li>
	<li>카세트의 상단 플레이트를 제거 하 고 감 금 소 동물 다시 넣습니다.</li>
	<li>동물의 나머지 부분에 대 한 3.1 3.12 단계를 반복 합니다.</li>
</ol>4. 이미지 분석
<ol><li>영상 및 분석기 소프트웨어에서 "분석 탭" 창을 선택 합니다.</li>
	<li>데이터 집합의 "분석 탭" 창 "데이터 집합 선택" 패널에서 "+" 버튼을 클릭 하 여 분석을 로드 합니다.</li>
	<li>이미지 "분석 탭" 창에서 로드 되 면 "분석 탭" 윈도우의 왼쪽된 상단에 있는 둥글지 아이콘을 선택 하 여 관심 (ROI) 분석의 영역을 수행 합니다.</li>
	<li>오른쪽 "분석 탭" 창에서 "임계값" 열을 클릭 하 여 "통계 데이터" 패널에서 0 임계값을 조정 합니다.</li>
	<li>"통계 데이터" 패널의 총 가치는 쥐의 뇌에 이식 하는 형광 태그 세포종 세포에서 신호를 나타냅니다.</li>
	<li>동물의 나머지 부분에 대 한 4.2-4.4 단계를 반복 합니다. 로드 하거나 클릭 하 여 새로운 주제를 제거는 "+" 또는 "−" 버튼, "분석 탭" 창의 "데이터 집합 선택" 패널에 각각. : FMT 이미징 및 소프트웨어 동작에 대 한 자세한 내용은 참고20.
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ostrom, Q. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CBTRUS+Statistical+Report:+Primary+Brain+and+Other+Central+Nervous+System+Tumors+Diagnosed+in+the+United+States+in+2009-2013.">CBTRUS Statistical Report: Primary Brain and Other Central Nervous System Tumors Diagnosed in the United States in 2009-2013.</a> Neuro-Oncology. 18 (suppl_5), v1-v75 (2016).</li><li>Pauli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Personalized+In+Vitro+and+In+Vivo+Cancer+Models+to+Guide+Precision+Medicine.">Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine.</a> Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).</li><li>Stewart, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Utility+of+Patient-Derived+Xenografts+to+Determine+Biomarkers+of+Prognosis+and+Map+Resistance+Pathways+in+EGFR-Mutant+Lung+Adenocarcinoma.">Clinical Utility of Patient-Derived Xenografts to Determine Biomarkers of Prognosis and Map Resistance Pathways in EGFR-Mutant Lung Adenocarcinoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (22), 2472-2480 (2015).</li><li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response.">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nat Med. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li><li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Intracranial+Brain+Tumor+Xenografts+With+Subsequent+Analysis+of+Tumor+Growth+and+Response+to+Therapy+using+Bioluminescence+Imaging.">Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), e1986 (2010).</li><li>Kondo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+brainstem+tumor+model+using+in+vivo+bioluminescence+imaging+in+rat.">An experimental brainstem tumor model using in vivo bioluminescence imaging in rat.</a> Child's Nervous System. 25 (5), 527-533 (2009).</li><li>Nyati, S., Young, G., Ross, B. D., Rehemtulla, A., Kozlov, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ATM Kinase: Methods and Protocols. , 97-111 (2017).</li><li>Kondo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+assessment+of+regional+directed+delivery+in+a+rodent+malignant+glioma+model.">Longitudinal assessment of regional directed delivery in a rodent malignant glioma model.</a> J Neurosurg Pediatr. 4 (6), 592-598 (2009).</li><li>Badr, C. E., Badr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bioluminescent Imaging: Methods and Protocols. , 1-18 (2014).</li><li>Shcherbakova, D. M., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-infrared+fluorescent+proteins+for+multicolor+in+vivo+imaging.">Near-infrared fluorescent proteins for multicolor in vivo imaging.</a> Nat Meth. 10 (8), 751-754 (2013).</li><li>Filonov, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bright+and+stable+near-infrared+fluorescent+protein+for+in+vivo+imaging.">Bright and stable near-infrared fluorescent protein for in vivo imaging.</a> Nat Biotech. 29 (8), 757-761 (2011).</li><li>Tiscornia, G., Singer, O., Verma, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+purification+of+lentiviral+vectors.">Production and purification of lentiviral vectors.</a> Nat. Protocols. 1 (1), 241-245 (2006).</li><li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Specific+Cell+Population+by+Fluorescence+Activated+Cell+Sorting+(FACS).">Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS).</a> J. Vis. Exp. (41), e1546 (2010).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li><li>Cetin, A., Komai, S., Eliava, M., Seeburg, P. H., Osten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+gene+delivery+in+the+rodent+brain.">Stereotaxic gene delivery in the rodent brain.</a> Nat. Protocols. 1 (6), 3166-3173 (2007).</li><li>Benitez, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEN+regulates+glioblastoma+oncogenesis+through+chromatin-associated+complexes+of+DAXX+and+histone+H3.3.">PTEN regulates glioblastoma oncogenesis through chromatin-associated complexes of DAXX and histone H3.3.</a> Nature Communications. 8, 15223 (2017).</li><li>Kirschner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+Orthotopic+Glioblastoma+Xenografts+in+Mice+Using+a+Clinical+CT+Scanner:+Comparison+with+Micro-CT+and+Histology.">Imaging of Orthotopic Glioblastoma Xenografts in Mice Using a Clinical CT Scanner: Comparison with Micro-CT and Histology.</a> PLOS ONE. 11 (11), e0165994 (2016).</li><li>Mannheim, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+Small+Animal+Imaging-Current+Status+and+Future+Prospects.">Standardization of Small Animal Imaging-Current Status and Future Prospects.</a> Molecular Imaging and Biology. , (2017).</li><li>Engblom, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoblasts+remotely+supply+lung+tumors+with+cancer-promoting+SiglecFhigh+neutrophils.">Osteoblasts remotely supply lung tumors with cancer-promoting SiglecFhigh neutrophils.</a> Science. 358 (6367), (2017).</li><li>Lauber, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State+of+the+art+in+vivo+imaging+techniques+for+laboratory+animals.">State of the art in vivo imaging techniques for laboratory animals.</a> Laboratory Animals. 51 (5), 465-478 (2017).</li><li>Zanca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+cellular+cross-talk+converges+on+NF-&#954;B+to+attenuate+EGFR+inhibitor+sensitivity.">Glioblastoma cellular cross-talk converges on NF-&#954;B to attenuate EGFR inhibitor sensitivity.</a> Genes &amp; Development. 31 (12), 1212-1227 (2017).</li><li>Villa, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+LXR-Cholesterol+Axis+Creates+a+Metabolic+Co-Dependency+for+Brain+Cancers.">An LXR-Cholesterol Axis Creates a Metabolic Co-Dependency for Brain Cancers.</a> Cancer Cell. 30 (5), 683-693 (2016).</li><li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+Mutation+Promotes+Glioblastoma+through+Epigenome+and+Transcription+Factor+Network+Remodeling.">EGFR Mutation Promotes Glioblastoma through Epigenome and Transcription Factor Network Remodeling.</a> Molecular Cell. 60 (2), 307-318 (2015).</li></ol>

저자 관심 없음 충돌 선언합니다.

종양 xenografts 암 연구에 광범위 하 게 사용 되 고 다양 한 잘 설립 된 이미징 기술 개발 되었습니다: 라스; 자기 공명 영상 (MRI); 양전자 방출 단층 촬영 (PET), 계산 된 단층 촬영 (CT); FMT입니다. 각이 방법 마다 장점과 단점을 함께 제공 하지만 궁극적으로 제공 하는 정보의 종류와 서로 보완. 가장 일반적으로 사용 되는 vivo에서 이미징 기술 중 하나입니다 씨5,<sup class=...

암은 산업화 된 세계에서 인간에서 질병 관련 된 죽음의 주요 원인 중 하나입니다. 매우 높은 사망자와 새로운 처리는 시급히 필요. 세포종 님 (GBM)는 매우 치명적인 뇌 암, 뇌 종양, 실질, 그리고 면역 세포의 이질적인 인구의 구성 유형의 이다. 미국의 중앙 두뇌 종양 레지스트리 따르면 기본 악성 및 비 악성 뇌종양의 발생률 100000 당 대략 22 경우입니다. 약 11, 000의 새로운 사례는 20171미국에서 진단 되는으로 예상 된다.
전 임상 연구는 마약, 절차, 또는 인 간에 있는 테스트 전에 효과적 치료의 가능성을 조사. 전 임상 연구의 초기 실험실 단계 중 하나는 인간의 종이 식 모델로 정의 호스트 유기 체에 이식 하는 암 세포를 사용 하 여 약물 치료에 대 한 잠재적인 분자 표적 식별 됩니다. 이 컨텍스트에서 intracranial 뇌 종양이 종이 식 모델 환자 파생 xenografts (PDXs)를 사용 하 여 널리 사용 된 뇌 종양 생물학, 진행, 진화, 그리고 치료 응답, 연구와 바이오 마커 개발에 대 한 더 많은 최근 마약 검사, 및 맞춤 의학2,,34.
가장 저렴 하 고 비-침략 적 vivo에서 이미징 intracranial xenografts 모니터링 하는 방법 중 하나입니다 생물 발광 영상 (BLI)5,6,,78. 그러나, 일부 씨 한계는 기판 관리 및 가용성, 효소 안정성, 그리고 가벼운 냉각 및 수집9이미징 동안 비 산을 포함 합니다. 여기 우리는 이미징 방법 전 임상 세포종 모델을 모니터링 하는 대신 적외선 FMT를 보고 합니다. 이 방법, 신호 수집 및 intracranially 이식된 PDXs의 정량화에 표현 한 근 적외선 형광 단백질 iRFP72010,11 (FP720 이제 되 나) 또는 turboFP635 (이제 되 나 FP635), 이미징 시스템 FMT와 함께 수행 됩니다. FMT 기술을 사용 하 여, 종양 수 orthotopic 모니터링 비보 전에, 동안, 또는 치료, 임상 관찰에 대 한 비-침략 적, 기판 및 양적 방식.

<table><tbody><tr><td>DMEM/High Glucose&amp;nbsp;</td><td>HyClone/GE</td><td>SH30022.1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11320-082</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>HyClone/GE</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Innovative cell technologies</td><td>AT-104</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>HyClone/GE</td><td>SH30236.01</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>human recombinant EGF&amp;nbsp;</td><td>Stemcell Technologies</td><td>2633</td><td></td></tr><tr><td>human recombinant FGF</td><td>Stemcell Technologies</td><td>2634</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Corning</td><td>21-031-00</td><td></td></tr><tr><td>FACS tubes</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1113903</td><td></td></tr><tr><td>p24 ELISA&amp;nbsp;</td><td>Clontech</td><td>632200</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Zoetis</td><td>NADA 043-403</td><td>Controlled substance</td></tr><tr><td>Ointment</td><td>Dechron</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Absorbable suture</td><td>CpMedical</td><td>VQ392</td><td></td></tr><tr><td>5 ul syringe</td><td>Hamilton</td><td>26200-U</td><td>Catalog number as sold by Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Cell Sorter</td><td>Sony</td><td>SH8007</td><td></td></tr><tr><td>Mouse stereotaxic frame&amp;nbsp;</td><td>Stoelting</td><td>51730</td><td></td></tr><tr><td>Motorized stereotaxic injector</td><td>Stoelting</td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>Micromotor hand-held drill</td><td>Foredom</td><td>K1070</td><td></td></tr><tr><td>Mouse warming pad&amp;nbsp;</td><td>Ken Scientific Corporation</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence Tomography System&amp;nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td>FMT 2500 XL</td><td></td></tr><tr><td>TrueQuant Imaging Software&amp;nbsp;</td><td>Perkin Elmer&amp;nbsp;</td><td>7005319</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-centrifuge Optima L-80 XP</td><td>Beckman Coulter</td><td>392049</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Culture 100mm Dishes</td><td>Olympus Plastics</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Culture 150mm Dishes</td><td>Olympus Plastics</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Culture Flasks T75</td><td>Corning</td><td>430720U</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conical tubes</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>Olympus Plastics</td><td>28-101</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge Avanti J-20</td><td>Beckman Coulter</td><td>J320XP-IM-5</td><td></td></tr><tr><td>Tube, Polypropylene, Thinwall, 5.0 mL</td><td>Beckman Coulter</td><td>326819</td><td></td></tr><tr><td>Tube, Thinwall, Polypropylene, 38.5 mL, 25 x 89 mm</td><td>Beckman Coulter</td><td>326823</td><td></td></tr><tr><td>Athymic nude mice</td><td>Charles River Laboratories</td><td>Strain Code&amp;nbsp; 490 (Homozygous)</td><td>Prior approval by the Institutional Animal Care Program and by the Institutional Biosafety Committee required.&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

fluorescence molecular tomography for in vivo imaging of glioblastoma xenografts

Tumorigenicity는 종양을 형성 하는 암 세포의 기능 대량. 널리 사용 방식은 셀 tumorigenic 확인 암 세포와 immunodeficient 쥐를 피하 주입 되 고 만져 서 후 종양 질량을 측정 하 여. 암 세포의 Orthotopic 주사 가장 밀접 하 게 공부 되 고 종양의 기원의 조직 microenvironment에이 종이 식을 소개 하고자 합니다. 뇌 암 연구의 암 세포는 뇌의 독특한 microenvironment에서 종양 형성과 분석 수 있도록 intracranial 주입을 필요 합니다. Vivo에서 이미징 intracranial xenografts의 즉시 orthotopically engrafted 쥐의 종양 질량을 모니터링합니다. 여기 우리 뇌 종양 xenografts의 형광 분자 단층 (FMT)를 사용 하 여를 보고합니다. 암 세포는 먼저 가까운 적외선 형광 단백질으로 불리고 하 고 immunocompromised 쥐의 뇌에 주입. 동물 다음 시간의 연장된 기간 동안 종양 질량에 대 한 정량적 정보를 검색 합니다. 셀 라벨 미리 각 마우스에서 종양의, 재현성, 비용 효과적이 고 신뢰할 수 있는 정량화 할 수 있습니다. 우리는 이미징 기판, 주입에 대 한 필요성을 제거 하 고 따라서 동물에 스트레스 감소. 이 접근의 제한; 매우 작은 질량을 감지 하는 무 능력에 의해 표시 됩니다. 그러나, 그것은 다른 기술 보다 더 큰 대 중을 위한 더 나은 해결책이 있다. 그것은 약물 치료의 효 험 또는 glioma 셀 라인 및 환자 파생 된 샘플의 유전 변경 평가에 적용할 수 있습니다.

세포종 세포 U87EGFRvIII (U87 셀-EGF 수용 체 변형 III 표현) 1.2 단계에 따라 경작 했다. Lentivirus 생산과 단계 1.1에 따라 정화 했다. 바이러스 농도 p24에 의해 결정 되었다 ELISA 분석. 셀은 lentivirus 단계 1.8에 따르면 적외선 형광 단백질을 운반으로 불리고 있었다. FP72010,11 인코딩 플라스 미드 박사 V.V. Verkhusha에서 제공한 친절 하 게 그리?...

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts at JoVE.com

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

종양 세포의 Orthotopic intracranial 주사 공부 뇌 종양 생물학, 진행, 진화, 그리고 치료 응답을 암 연구에 사용 되었습니다. 여기 선물이 형광 분자의 단층 촬영 종양 xenografts 실시간 intravital 이미징 및 종양의 정량화 임상 세포종 모델에서 대량 제공.

Vivo에서 이미징 세포종 Xenografts의 형광 분자 단층 촬영

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

fluorescence-molecular-tomography-for-vivo-imaging-glioblastoma

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

8.9K 조회수.  Ludwig Institute for Cancer Research. 종양 세포의 Orthotopic intracranial 주사 공부 뇌 종양 생물학, 진행, 진화, 그리고 치료 응답을 암 연구에 사용 되었습니다. 여기 선물이 형광 분자의 단층 촬영 종양 xenografts 실시간 intravital 이미징 및 종양의 정량화 임상 세포종 모델에서 대량 제공.

비디오: Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging

Transplantation models using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research for many years. In the past, the most commonly used procedure for human tumor xenograft establishment consisted of the collection of cells from culture flasks, followed by the subcutaneous injection of the collected cells in immunocompromised mice. Whereas this approach still sees frequent use in many laboratories, there has been a significant shift in emphasis over the past decade towards orthotopic xenograft establishment, which, in the instance of brain tumors, requires tumor cell injection into appropriate neuroanatomical structures. Because intracranial xenograft establishment eliminates the ability to monitor tumor growth through direct measurement, such as by use of calipers, the shift in emphasis towards orthotopic brain tumor xenograft models has necessitated the utilization of non-invasive imaging for assessing tumor burden in host animals. Of the currently available imaging methods, bioluminescence monitoring is generally considered to offer the best combination of sensitivity, expediency, and cost. Here, we will demonstrate procedures for orthotopic brain tumor establishment, and for monitoring tumor growth and response to treatment when testing experimental therapies.

Luciferase-modified human brain tumor xenografts can be established intracranially in athymic mice, with subsequent monitoring of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging. In combination with survival analysis, bioluminescence monitoring is an essential research tool for pre-clinical testing of therapies being considered for treating brain tumors.

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

Transplantation models using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research for many years. In the past, the most ...

연구

신경과학

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The cell line was originally induced by intracranial injection of 3-methyl-cholantrene into a C57BL/6 syngeneic mouse strain 1; therefore, immunologically competent C57BL/6 mice can be used. While we use GL261, the following protocol can be used for the implantation and monitoring of any intracranial mouse tumor model. GL261 cells were engineered to stably express firefly luciferase (GL261-luc). We also created the brighter GL261-luc2 cell line by stable transfection of the luc2 gene expressed from the CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr mice (albino variant of C57BL/6) from the National Cancer Institute, Frederick, MD were used to eliminate the light attenuation caused by black skin and fur. With the use of albino C57BL/6 mice; in vivo imaging using the IVIS Spectrum in vivo imaging system is possible from the day of implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). The GL261-luc and GL261-luc2 cell lines showed the same in vivo behavior as the parental GL261 cells. Some of the shared histological features present in human GBMs and this mouse model include: tumor necrosis, pseudopalisades, neovascularization, invasion, hypercellularity, and inflammation 1.
Prior to implantation animals were anesthetized by an intraperitoneal injection of ketamine (50 mg/kg), xylazine (5 mg/kg) and buprenorphine (0.05 mg/kg), placed in a stereotactic apparatus and an incision was made with a scalpel over the cranial midline. A burrhole was made 0.1mm posterior to the bregma and 2.3mm to the right of the midline. A needle was inserted to a depth of 3mm and withdrawn 0.4mm to a depth of 2.6mm. Two &mu;l of GL261-luc or GL261-luc2 cells (107 cells/ml) were infused over the course of 3 minutes. The burrhole was closed with bonewax and the incision was sutured.
Following stereotactic implantation the bioluminescent cells are detectable from the day of implantation and the tumor can be analyzed using the 3D image reconstruction feature of the IVIS Spectrum instrument. Animals receive a subcutaneous injection of 150&mu;g luciferin /kg body weight 20 min prior to imaging. Tumor burden is quantified using mean tumor bioluminescence over time. Tumor-bearing mice were observed daily to assess morbidity and were euthanized when one or more of the following symptoms are present: lethargy, failure to ambulate, hunched posture, failure to groom, anorexia resulting in &gt;10% loss of weight. Tumors were evident in all of the animals on necropsy.

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Intracranial implantation of GL261 cells into C57BL/6 mice produces malignant gliomas that recapitulate many of the hallmarks of human glioblastoma multiforme. We used GL261 cells stably expressing luciferase to allow us to use in vivo imaging to follow tumor progression. The surgery and 3D in vivo imaging are demonstrated.

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서</emMurine Gliomas의> 발광 생물 이미징

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

의학

Computed Tomography-guided Time-domain Diffuse Fluorescence Tomography in Small Animals for Localization of Cancer Biomarkers

Small animal fluorescence molecular imaging (FMI) can be a powerful tool for preclinical drug discovery and development studies1. However, light absorption by tissue chromophores (e.g., hemoglobin, water, lipids, melanin) typically limits optical signal propagation through thicknesses larger than a few millimeters2. Compared to other visible wavelengths, tissue absorption for red and near-infrared (near-IR) light absorption dramatically decreases and non-elastic scattering becomes the dominant light-tissue interaction mechanism. The relatively recent development of fluorescent agents that absorb and emit light in the near-IR range (600-1000 nm), has driven the development of imaging systems and light propagation models that can achieve whole body three-dimensional imaging in small animals3.
Despite great strides in this area, the ill-posed nature of diffuse fluorescence tomography remains a significant problem for the stability, contrast recovery and spatial resolution of image reconstruction techniques and the optimal approach to FMI in small animals has yet to be agreed on. The majority of research groups have invested in charge-coupled device (CCD)-based systems that provide abundant tissue-sampling but suboptimal sensitivity4-9, while our group and a few others10-13 have pursued systems based on very high sensitivity detectors, that at this time allow dense tissue sampling to be achieved only at the cost of low imaging throughput. Here we demonstrate the methodology for applying single-photon detection technology in a fluorescence tomography system to localize a cancerous brain lesion in a mouse model.
The fluorescence tomography (FT) system employed single photon counting using photomultiplier tubes (PMT) and information-rich time-domain light detection in a non-contact conformation11. This provides a simultaneous collection of transmitted excitation and emission light, and includes automatic fluorescence excitation exposure control14, laser referencing, and co-registration with a small animal computed tomography (microCT) system15. A nude mouse model was used for imaging. The animal was inoculated orthotopically with a human glioma cell line (U251) in the left cerebral hemisphere and imaged 2 weeks later. The tumor was made to fluoresce by injecting a fluorescent tracer, IRDye 800CW-EGF (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE) targeted to epidermal growth factor receptor, a cell membrane protein known to be overexpressed in the U251 tumor line and many other cancers18. A second, untargeted fluorescent tracer, Alexa Fluor 647 (Life Technologies, Grand Island, NY) was also injected to account for non-receptor mediated effects on the uptake of the targeted tracers to provide a means of quantifying tracer binding and receptor availability/density27. A CT-guided, time-domain algorithm was used to reconstruct the location of both fluorescent tracers (i.e., the location of the tumor) in the mouse brain and their ability to localize the tumor was verified by contrast-enhanced magnetic resonance imaging.
Though demonstrated for fluorescence imaging in a glioma mouse model, the methodology presented in this video can be extended to different tumor models in various small animal models potentially up to the size of a rat17.

Diffuse fluorescence tomography offers a relatively low-cost and potentially high-throughout approach to preclinical in vivo tumor imaging. The methodology of optical data collection, calibration, and image reconstruction is presented for a computed tomography-guided non-contact time-domain system using fluorescent targeting of the tumor biomarker epidermal growth factor receptor in a mouse glioma model.

암 생체 현지화위한 작은 동물의 계산된 Tomography 주 도형 시간 도메인 미만성 형광 Tomography

Small animal fluorescence molecular imaging (FMI) can be a powerful tool for preclinical drug discovery and development studies1. However, light ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality treatment consisting of surgical resection, post-operative radiation therapy and temozolomide chemotherapy 1. New therapeutic approaches are clearly needed to improve patient survival and quality of life. The development of more effective treatment strategies would be aided by animal models of GBM that recapitulate human disease yet allow serial imaging to monitor tumor growth and treatment response. In this paper, we describe our technique for the precise stereotactic implantation of bio-imageable GBM cancer cells into the brains of nude mice resulting in tumor xenografts that recapitulate key clinical features of GBM 2. This method yields tumors that are reproducible and are located in precise anatomic locations while allowing in vivo bioluminescent imaging to serially monitor intracranial xenograft growth and response to treatments 3-5. This method is also well-tolerated by the animals with low perioperative morbidity and mortality.

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

We describe an integrated method for the precise, stereotactic implantation of human glioblastoma multiforme cells into the brains of nude mice and subsequent serial in vivo imaging to monitor growth and response to treatment of the resultant xenografts.

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

마우스에서 2P-IVM을 사용한 뇌종양의 나노 입자 실시간 추적

Two-Photon Intravital Microscopy of Glioblastoma in a Murine Model

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the accumulation and distribution of macromolecules in brain tumors in vivo would greatly enhance our ability to understand and optimize drug delivery in preclinical models. This protocol describes a method for real-time in vivo tracking of intravenously administered fluorescent-labeled nanoparticles with two-photon intravital microscopy (2P-IVM) in a mouse model of glioblastoma (GBM).
The protocol contains a multi-step description of the procedure, including anesthesia and analgesia of experimental animals, creating a cranial window, GBM cell implantation, placing a head bar, conducting 2P-IVM studies, and post-surgical care for long-term follow-up studies. We show representative 2P-IVM imaging sessions and image analysis, examine the advantages and disadvantages of this technology, and discuss potential applications.
This method can be easily modified and adapted for different research questions in the field of in vivo preclinical brain imaging.

저자 스포트라이트: 교모세포종 치료에서 약물 전달 및 조기 발견 최적화를 위한 멀티모달 이미징 전략

We present a novel approach for two-photon microscopy of the tumor delivery of fluorescent-labeled iron oxide nanoparticles to glioblastoma in a mouse model.

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the ...

암 연구학

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and histopathologic features of the human disease. When GL261 cells are implanted intracranially in syngeneic C57BL/6 mice, the model has the added advantage of maintaining an intact immune microenvironment. Stable expression of luciferase in GL261 cells allows non-invasive cost effective bioluminescence monitoring of intracranial tumor growth. We have recently demonstrated that luciferase expression in GL261 cells does not affect the tumor growth properties, tumor cell immunomodulatory cytokine expression, infiltration of immune cells into the tumor, or overall survival of animals bearing the intracranial tumor. Therefore, it appears that the GL261 luciferase glioma model can be useful in the study of novel chemotherapeutic and immunotherapeutic modalities. Here we report the technique for generating stable luciferase expression in GL261 cells and how to study the in vitro and in vivo growth of the tumor cells by bioluminescence imaging.

GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

교 모세포종에 대한 면역 적격 동물 모델의 생물 발광 영상

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and ...

Live Imaging of Microtubule Dynamics in Glioblastoma Cells Invading the Zebrafish Brain

With a dismal median survival time in real populations-between 6 to 15 months-glioblastoma (GBM) is the most devastating malignant brain tumor. Treatment failure is mainly due to the invasiveness of GBM cells, which speaks for the need for a better understanding of GBM motile properties. To investigate the molecular mechanism supporting GBM invasion, new physiological models enabling in-depth characterization of protein dynamics during invasion are required. These observations would pave the way to the discovery of novel targets to block tumor infiltration and improve patient outcomes. This paper reports how an orthotopic xenograft of GBM cells in the zebrafish brain permits subcellular intravital live imaging. Focusing on microtubules (MTs), we describe a procedure for MT labeling in GBM cells, microinjecting GBM cells in the transparent brain of 3 days post fertilization (dpf) zebrafish larvae, intravital imaging of MTs in the disseminating xenografts, altering MT dynamics to assess their role during GBM invasion, and analyzing the acquired data.

We report a technique permitting live imaging of microtubule dynamics in glioblastoma (GBM) cells invading a vertebrate brain tissue. Coupling the orthotopic injection of fluorescently tagged GBM cells into a transparent zebrafish brain with high-resolution intravital imaging allows the measurement of cytoskeleton dynamics during in situ cancer invasion.

제브라피쉬의 뇌를 침범하는 교모세포종 세포의 미세소관 역학의 라이브 이미징

With a dismal median survival time in real populations-between 6 to 15 months-glioblastoma (GBM) is the most devastating malignant brain tumor. Treatment ...

Vivo에서 이미징 세포종 Xenografts의 형광 분자 단층 촬영

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서 발광 생물 이미징

암 생체 현지화위한 작은 동물의 계산된 Tomography 주 도형 시간 도메인 미만성 형광 Tomography

Stereotactic Intracranial 주입 및

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

쥐 모델에서 교모세포종의 Two-Photon Intravital Microscopy

교 모세포종에 대한 면역 적격 동물 모델의 생물 발광 영상

제브라피쉬의 뇌를 침범하는 교모세포종 세포의 미세소관 역학의 라이브 이미징