Name: retroductal nanoparticle injection to the murine submandibular gland
Uploaded: 2018-05-03T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland at JoVE.com

이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (NIDCR)와 보너스 번호 R56 DE025098, UG3 DE027695, 및 CA206296 F30 국립 보건원의 국립 암 연구소 (NCI)에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다. 이 작품 또한 NSF DMR 1206219와 IADR 혁신 구강 케어 상 (2016)에 의해 지원 되었다.
우리는 제인 Gavrity IVIS 실험 수행에 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다. 우리는 그들에 그녀의 지원과 입력 카 렌 벤틀리 감사 하 고 싶습니다. 우리는 페이 Lun Weng IHC와 그의 지원에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는 매튜 잉 그림 준비에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는이 논문의 중요 한 읽기 박사 Elaine Smolock, 에밀리 우 감사 하 고 싶습니다.

아래에 설명 된 모든 vivo에서 절차는 로체스터의 대학, 로체스터, 뉴욕에서 동물 자원에 대학 위원회에 의해 승인 되었다.
1입니다. 준비
<ol><li>와이어 삽입과 32 G intracranial 카 테 테 르 튜브를 사용 하 여, 3 cm 긴 축에 약 45 ° 경사진된 끝을 형성 하 고 튜브의 컷. 와이어 튜브 보다 1 cm 이상 되는지 확인 합니다.</li>
	<li>해밀턴 주사기를 50 µ L PSMA 나노 솔루션 (그림 1), 또는 다른 주입 재료를 로드 합니다. 주입 동안 barotrauma의 확률을 줄이기 위해, 주사기를 제거 stylet와 카 테 테 르 튜브를 연결 하 고 죽은 볼륨을 추방.</li>
	<li>나노는 완벽 하 게 관리 다음 ductal 방해를 방지 하기 위해 solvated 되도록 주입 솔루션을 검사 합니다.</li>
	<li>0.1 mg/mL에서 아트로핀 솔루션을 준비 합니다. 참고: 아트로핀은 빛에 민감한 시간이 지남에 저하 됩니다 때문에이 솔루션 주입의 하루와 있어야 관리까지 빛 으로부터 보호 합니다.</li>
</ol>2. 액세스 및 Ductal 진입점을 시각화
<ol><li>C57/BL6 마우스 사용 하 여 분석 균형 무게.</li>
	<li>29G x ½"바늘 0.5 mL 주사기를 사용 하 여, 100 mg/kg 케 타 민 고 10 mg/kg xylazine의 intraperitoneally 주입 된 살 균 염 분 솔루션 마우스 anesthetize. 마우스 이상에 응답 자극, 일반적으로 주사를 따라 5 ~ 10 분 이내 발생 하는 경우 다음 단계로 진행 합니다. 참고:이 절차 또한 isoflurane, 아래 수행 될 수 있습니다 하지만 구강에 대 한 액세스를 허용 하는 사용자 지정 코 콘이 필요 합니다.</li>
	<li>절차 동안 건조를 방지 하기 위해 눈에 윤활제를 적용 하 고 사용자 지정 단계에 발생 하기 쉬운 위치에 마우스를 놓습니다. 참고: 내 구두 절차에 대 한 적절 한 조건을 유지, 도구 해야 될 소독 하거나 각 사용 전에 소독 합니다.</li>
	<li>금속 빔에 상 악 앞 니를 확보 하 여 구강을 열고 신축성 밴드를 사용 하 여 악의 앞 니 (그림 2A) 뒤에 아래 긴장을 적용 합니다.</li>
	<li>턱의 시각화 되도록 해 현미경 아래 마우스를 맞춥니다.</li>
	<li>입 확대, 양측 뺨 점 막에 긴장을 적용할 사용자 지정 곡선된 강철 견인을 사용 합니다.</li>
	<li>Submandibular 용의자를 시각화 하려면 파악 하 고 부드럽게 혀 무뚝뚝한 집게를 사용 하 여 입의 바닥에서 들어올립니다. 참고:은 papillae 혀 (그림 2B) 아래 두 창백 돌출으로 표시 됩니다.</li>
	<li>구강 내에서 시각화 및 조작 추가 완화, 면 혀와 볼 점 막 사이 배치 합니다.</li>
</ol>3. ductal Cannulation 및 선 배치
<ol><li>잘 사용 하 여, 곡선된 겸 자, 와이어 삽입 된 카 테 테 르 튜브 파악. Cannulation 동안 최적의 수동 제어를 위한 겸 자 (그림 3A)의 곡률으로 튜브를 맞춥니다.</li>
	<li>보기의 필드에 집게와 와이어를 이동 해 현미경을 사용 하 여. 참고: 와이어 튜브에서 돌기 한다.</li>
	<li>부드럽게 작은, 표면, 점 막 펑크 (0.076 m m 직경) 카 테 테 르 튜브 (0.25 m m 직경)의 최신 항목을 촉진 합니다 생성 하는 삽입 된 와이어를 사용 하 여 하나의 submandibular 시의 기지에 압력을 적용. 저항을 발생 하는 경우 날카로운가 위를 해 튜브 및 와이어 삽입에 신선한 경사진된 끝을 잘라.</li>
	<li>항목에 따라는 stylet을 철회 하 고 펑크 사이트에서 타 액의 존재를 확인 해 현미경을 사용 하 여. 강력한 또는 갑자기 (철수 또는 삽입)의 움직임을 stylet 출혈이 발생할 수 있습니다 또는 ductal 무결성을 손상 하지 마십시오.</li>
	<li>(그림 3B) 배관 내 stylet을 철회.</li>
	<li>주입 튜브 여 튼의 덕트에 맞는 것을 보장 하기 위해, 이전 만든된 펑크 (그림 2 C)으로 딱딱한 가이드로는 stylet을 포함 하는 튜브를 삽입 합니다. 참고: 경우에 신속 하 게 수행 하지 로컬 붓기 다시 삽입을 방지할 수 있습니다.</li>
	<li>장기간된 ductal 방해에서 다시 압력을 방지 하기 위해 튜브를 철회 한다. 개방, 현미경, 아래 보이는 submandibular 시에서 볼 수 있습니다 확인 하려면 검사 합니다. 보이는 출혈이 발생 하는 경우는 stylet을 제거 하 고 반대 submandibular 용의자에 3.2 단계에서 다시 시도.</li>
	<li>마우스를 이동 하지 않고 절차 동안 타 액 분 비를 줄이기 위해 1 mg/kg 아트로핀 솔루션의 복 주입을 관리 합니다. 5-10 분을 기다립니다.</li>
	<li>주사기 튜브의 끝을 잡고 고 해 현미경 (그림 3C)를 사용 하 여 구멍에 삽입 합니다. 저항을 발생 하는 경우 튜브를 reattempt 신선한 경사진된 끝을 잘라.</li>
	<li>일단 튜브 submandibular 시 내에, 덕트에 3-5 m m 진행 천천히. 릴리스는 집게에서 튜브입니다.</li>
	<li>관과 submandibular 시 사이 물개를 개선 하기 위해 부드럽게 1 분 거 즈와 blotting에 의해 인터페이스를 건조.</li>
	<li>튜브의 위치는 건조 하는 동안 이동 하지 확인 하려면 검사 합니다.</li>
</ol>4입니다. 주입
<ol><li>자료는 마우스 sedated 있고 (그림 2D) 고통의 표시 표시 되지 않는 확인 하는 검사 약 10 µ L/분의 속도로 주입. 참고: 15-50 µ L의 주사는 잘 용납입니다. 더 큰 볼륨의 주입 barotrauma 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>주입, 따라와 튼의 덕트와 SMG (그림 4) 자료의 보존을 향상 시키기 위해 5 분 동안 주사기 압력을 유지 합니다. Submandibular 시 튜브 ductal 구멍을 종료 하지 않습니다 보장 하기 위해 정기적으로 검사 합니다.</li>
	<li>미세 집게를 사용 하 여 파악 하 고 부드럽게 submandibular 용의자에서 튜브를 철회. 참고: 그것은 용의자에서 일부 유체 출구를 관찰 정상입니다.</li>
	<li>스테이지에서 마우스를 이동 하기 전에 견인 및 코 튼 구강에서 제거 합니다. 참고: 동물 하지 맡겨야 한다 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 또한, 마우스 하지 완전히 복구 될 때까지 다른 마우스와 보관 되어 있는지 확인 합니다.</li>
</ol>5. 확인 및 분석
참고:는 vivo에서 이미징 시스템 (IVIS) 사용할 수 있습니다 (으로 표시 된 1 시간 그리고 그림 5에서 주사 후 24 h) 주입 다음 붙일 레이블된 나노 입자의 보존을 평가 하기 위해.
<ol><li>피부를 통해 서울시 내의 형광 신호를 더 나은 시각화 하려면 overlying SMGs 하거나 면도 하거나 화학 탈모를 사용 하 여 복 부 털을 제거 합니다. 참고: 안락사, 다음 서울시 조직 또한 수확 수 있습니다, 고정 (4 %paraformaldehyde)에서 1 박, 그리고 붙일 레이블된 NP의 지 속성 주사 (그림 6)에 따라 1 일 것인지 immunohistochemistry를 사용 하 여 스테인드.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

Retroductal 주사 침 샘에 지역화 된 약물 전달에 대 한 중요 하다. 이 기술은 응용 프로그램 Sjogren 증후군 및 RIH9,,1028를 포함 하 여 조건에 대 한 치료제를 심사에 있다. Retroductal 주입을 통해 서울시에 직접 약물 전달 주요 이점이 그것의 잠재력을 줄이기 위해 오프 대상 효과, 면역 활성화11를 포함 하 여 조직의 ?...

침 샘 기능 장애는 많은 etiologies, Sjögren의 증후군, 기능성 분 비 조직, 그리고 방사선 유발 hyposalivation (RIH), 머리와 목 암 방사선 치료1의 일반적인 sequella의 자기 면역 중재 손실을 포함 하 여 있다. 어느 조건 때문에 침 기능 손실 구두 및 조직의 감염, 충 치, 소화 하 고 삼 키는 기능 장애, 언어 장애, 그리고 주요 우울증1,2,3에 개인을 걸리기. 결과적으로, 삶의 질 크게 겪고 있다, 중재 치료4보다는 증상의 일시적 완화에 국한. Vivo에서새로운 치료 조사, 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 관리 하는 관심입니다.
Retroductal 주사 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 제공 하 고 질병, 부상, 또는 정상 조직의 항상성에서 효능을 테스트 하는 귀중 한 방법입니다. 3 개의 주요 침 샘은 귀 밑 (PG), submandibular (서울시), 그리고 삶의 (SLG), 배설 덕트를 통해 구강에는 빈의 모든. murine의 해부학 SMG cannulation 혀5아래 입의 바닥에 있는 왓슨의 덕트를 통해 직접 액세스를 허용 합니다. Cannulation, solvated 마약 SMG에 직접 관리할 수 있습니다. Retroductal 배달, 다음 외 선의 확산 구조6주위 물자의 교류를 통제 하는 주변 조직 캡슐에 의해 제한 됩니다. SMG와 그 덕트 마찬가지로 인간에서는, 구조는 SMG 수술 및 sialoendoscopy7중에 정기적으로 액세스. 인간과 쥐에서 PG는 마찬가지로 볼 점 막8에서 Stensen의 덕트를 통해 액세스할 수 있습니다.
RIH murine 모델, SMG retroductal 주입 치료제 등 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, cytokines, 부상, 세포질 응답을 조절 하 고 그 결과 감소 하는 항 산화 화합물을 제공 하는 데 사용 되었습니다. 조직 손상5,9,10,11,12,13,14,,1516. Retroductal 주입의 가장 주목할 만한 임상 성공이 이다 (Aquaporin 1; 물 채널의 표현을 직접 adenoviral vector의 관리 AQP1) 머리와 목 암17방사선 환자에.
이전에 우리는 개발과 RIH11,18,,1920에서 침 샘 기능을 보호 하기 위해 retroductally 주입 고분자 나노-siRNA 시스템의 효능 표시. 우리의 과거 작품의 확장, 여기, 우리 우리의 프로토콜 로드 하 고 그렇지 않으면 가난 하 게 녹는 제공 붙일 레이블된 나노 (NP)를 사용 하 여 retroductal 서울시 주입 약21,22, 설명 23.
우리 diblock 공중 합체 폴 리 (스 티 렌-alt-maleic anhydride)-b-poly(styrene) 가역 추가 체인 조각화 (뗏목) 중 합, 앞에서 설명한21통해 (PSMA)의 구성에서 NP를 합성 할. 솔벤트 교류를 통해 이러한 고분자 자발적으로 자기 조립 micelle NP 구조는 소수 성 내부와 친수성 외부21에. NPs는 동물을 희생 하지 않고도 동맥에 NP 배달의 확인을 허용 하도록 텍사스 레드 fluorophore와 함께 표시 됩니다. 동물 영상 라이브와 SMG immunohistochemistry 1 시간 그리고 1 일 주사를 다음에 표시 됩니다.
이 업데이트 하 고 재현할 수 cannulation 프로토콜 retroductal 주입을 달성 하기 위해 다른 사람을 사용 해야 합니다. 우리는이 세련 된 기술을 vivo에서 연구 및 치료 개발24,25에 대 한 중요 한 될 것입니다 기대 합니다.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Spring Scissors for Tracheostomy</td></tr><tr><td>Sterile Saline Solution</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Curved Forceps</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Straight Forceps</td></tr><tr><td>Standard Pattern Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Blunt Forceps</td></tr><tr><td>Fine Scissors- Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Dissection Scissors</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillary tubes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antibody</td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistical Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applicator for eye ointment</td></tr><tr><td>0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2&quot;</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Syringe for intraperitoneal injection</td></tr></tbody></table>

retroductal nanoparticle injection to the murine submandibular gland

침 샘 치료의 두 가지 일반적인 목표는 조직 장애 중 다음의 예방 및 치료 면역 또는 방사선 상해. 로컬 침 샘에 생리 활성 화합물을 함으로써, 큰 조직 농도 조직의 관리 대 안전 하 게 구현할 수 있습니다. 또한, 대상 조직에서 물자의 여분 선 축적 효과 수 극적으로 감소 될. 이와 관련, retroductal 주사 침 샘 생물학과 이상 조사를 위해 널리 사용 되는 방법입니다. Retroductal 관리 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, 그리고 작은 분자 약물의 상해의 설정에서 기능을 지원 하기 위해 표시 되었습니다. 우리는 이전 조사를 다음과 같은 기능을 유지 하기 위해 주입 retroductally 나노 siRNA 전략의 효능을 보여주었다. 여기, 왓슨의 덕트를 통해 murine submandibular 동맥에 나노 소재를 관리 하는 매우 효과적이 고 재현 방법에 대 한 자세한 (그림 1). 우리 구강 접근을 설명 하 고 더 관측 절차에 걸쳐 품질 검사로 재직 cannulate와 튼의 덕트, 하는 데 필요한 단계를 개요.

Retroductal 주입 murine SMG (그림 1)에 NPs를 관리를 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 50 µ g PSMA NPs 텍사스 레드 fluorophore와 함께 표시를 제공 합니다.
마우스의 적절 한 배치는 손쉬운 액세스와 입 (그림 2A-B)의 바닥의 시각화 수 있습니다. Submandibular papillae 혀 아래 두 살 돌출...

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Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

9.9K 조회수.  University of Rochester. Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.

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Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their head and neck regions for cancer treatment. Both groups of patients experience symptoms such as xerostomia (dry mouth), dysphagia 
(impaired chewing and swallowing), severe dental caries, altered taste, oro-pharyngeal infections (candidiasis), mucositis, pain and discomfort.
One innovative approach of regenerative medicine for the treatment of salivary gland hypo-function is speculated in RS Redman, E Mezey 
et al. 2009: stem cells can be directly deposited by cannulation into the gland as a potent method in reviving the functions of the impaired organ. Presumably, 
the migrated foreign stem cells will differentiate into glandular cells to function as part of the host salivary gland. Also, this cannulation technique is an 
expedient and effective delivery method for clinical gene transfer application.
Here we illustrate the steps involved in performing the cannulation procedure on the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct 
(Fig 1). C3H mice (Charles River, Montreal, QC, Canada) are used for this experiment, which have been kept under clean conventional conditions at 
the McGill University animal resource center. All experiments have been approved by the University Animal Care Committee and were in accordance with the 
guidelines of the Canadian Council on Animal Care.
For this experiment, a trypan blue solution is infused into the gland through the opening of the Wharton's duct using a 
insulin syringe with a 29-gauge needle encased inside a polyethylene tube. Subsequently, the mouse is dissected to show that the infusions migrated 
into the gland successfully.

A protocol for the cannulation of the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct is described. For this experiment, the trypan blue solution is used as a dyer to demonstrate how this technique effectively delivers infusions into the targeted gland, and to suggest the reliability of this new approach as a potential clinical drug/cell therapy for the regeneration of salivary glands.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

연구

의학

Intra-lymph Node Injection of Biodegradable Polymer Particles

Generation of adaptive immune response relies on efficient drainage or trafficking of antigen to lymph nodes for processing and presentation of these foreign molecules to T and B lymphocytes. Lymph nodes have thus become critical targets for new vaccines and immunotherapies. A recent strategy for targeting these tissues is direct lymph node injection of soluble vaccine components, and clinical trials involving this technique have been promising. Several biomaterial strategies have also been investigated to improve lymph node targeting, for example, tuning particle size for optimal drainage of biomaterial vaccine particles. In this paper we present a new method that combines direct lymph node injection with biodegradable polymer particles that can be laden with antigen, adjuvant, or other vaccine components. In this method polymeric microparticles or nanoparticles are synthesized by a modified double emulsion protocol incorporating lipid stabilizers. Particle properties (e.g.&#160;size, cargo loading) are confirmed by laser diffraction and fluorescent microscopy, respectively. Mouse lymph nodes are then identified by peripheral injection of a nontoxic tracer dye that allows visualization of the target injection site and subsequent deposition of polymer particles in lymph nodes. This technique allows direct control over the doses and combinations of biomaterials and vaccine components delivered to lymph nodes and could be harnessed in the development of new biomaterial-based vaccines.

Lymph nodes are the immunological tissues that orchestrate immune response and are a critical target for vaccines. Biomaterials have been employed to better target lymph nodes and to control delivery of antigens or adjuvants. This paper describes a technique combining these ideas to inject biocompatible polymer particles into lymph nodes.

생분해성 폴리머 입자의 림프절 내 주입

Generation of adaptive immune response relies on efficient drainage or trafficking of antigen to lymph nodes for processing and presentation of these ...

생체공학

Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. Irreparable cell damage results in a chronic loss of salivary function that impairs basic oral activities, and increases the risk of oral infections and dental caries. Salivary hypofunction and its complications gravely impact a patient's comfort. Current symptomatic management of the condition is ineffective, and newer therapies to assuage the condition are needed. 
Salivary glands are exocrine glands, which expel their secretions into the mouth via excretory ducts. Cannulation of these ducts provides direct access to the glands. Retroductal delivery of a contrast agent to major salivary glands is a routine out-patient procedure for diagnostic imaging. Using a similar procedure, localized treatment of the glands is feasible. However, performing this technique in preclinical studies with small animals poses unique challenges. In this study we describe the technique of retroductal administration in rat submandibular glands, a procedure that was refined in Dr. Bruce Baum's laboratory (NIH)1, and lay out a procedure for local gland irradiation.

Salivary gland hypofunction, a major adverse effect of head and neck radiotherapy diminishes a patient's quality of life. The demonstration of efficacy of new therapies in animal models is a prerequisite before clinical transition. This protocol describes retroductal administration and local irradiation of rat submandibular glands.

타액 기능 저하의 쥐 모델에서 Retroductal 턱밑 글 랜드 점적 및 현지화 된 분획 조사

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. ...

Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, including cell biology, oncology, dentistry, and immunology. The SMG is an exocrine gland comprised of secretory epithelial cells, myofibroblasts, endothelial cells, nerves, and extracellular matrix. Dynamic cellular processes in the rat and mouse SMG have previously been imaged, mostly using inverted multi-photon microscope systems. Here, we describe a straightforward protocol for the surgical preparation and stabilization of the murine SMG in anesthetized mice for in vivo imaging with upright multi-photon microscope systems. We present representative intravital image sets of endogenous and adoptively transferred fluorescent cells, including the labeling of blood vessels or salivary ducts and second harmonic generation to visualize fibrillar collagen. In sum, our protocol allows for surgical preparation of mouse salivary glands in upright microscopy systems, which are commonly used for intravital imaging in the field of immunology.

We describe a protocol to surgically expose and stabilize the murine submandibular salivary gland for intravital imaging using upright intravital microscopy. This protocol is easily adaptable to other exocrine glands of the head and neck region of mice and other small rodents.

똑바로 Intravital 현미경 Murine Submandibular 침 샘의 준비

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

면역학 및 감염병학

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, we use the salivary glands of live mice since they provide several advantages. First, they can be easily exposed to enable access to the optics, and stabilized to facilitate the reduction of the motion artifacts due to heartbeat and respiration. This significantly facilitates imaging and tracking small subcellular structures. Second, most of the cell populations of the salivary glands are accessible from the surface of the organ. This permits the use of confocal microscopy that has a higher spatial resolution than other techniques that have been used for in vivo imaging, such as two-photon microscopy. Finally, salivary glands can be easily manipulated pharmacologically and genetically, thus providing a robust system to investigate biological processes at a molecular level.
In this study we focus on a protocol designed to follow the kinetics of the exocytosis of secretory granules in acinar cells and the dynamics of the apical plasma membrane where the secretory granules fuse upon stimulation of the beta-adrenergic receptors. Specifically, we used a transgenic mouse that co-expresses cytosolic GFP and a membrane-targeted peptide fused with the fluorescent protein tandem-Tomato. However, the procedures that we used to stabilize and image the salivary glands can be extended to other mouse models and coupled to other approaches to label in vivo cellular components, enabling the visualization of various subcellular structures, such as endosomes, lysosomes, mitochondria, and the actin cytoskeleton.

Intravital microscopy is a powerful tool that enables imaging various biological processes in live animals. In this article, we present a detailed method for imaging the dynamics of subcellular structures, such as the secretory granules, in the salivary glands of live mice.

형광 단백질을 표현 라이브 마우스의 이미징 세포 이하의 구조물의 intravital 현미경

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

생물학

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of genes within the mammary epithelium has been difficult to achieve due to the lack of appropriate targeting molecules that are independent of developmental stages such as pregnancy and lactation. Herein, we describe a technique for localized delivery of reagents to the mammary gland at any stage in adulthood via intraductal injection into the nipples of mice. The injections can be performed on live mice, under anesthesia, and allow for a non-invasive and localized drug delivery to the mammary gland. Furthermore, the injections can be repeated over several months without damaging the nipple. Vital dyes such as Evans Blue are very helpful to learn the technique. Upon intraductal injection of the blue dye, the entire ductal tree becomes visible to the eye. Furthermore, fluorescently labeled reagents also allow for visualization and distribution within the mammary gland. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents, and small molecules.

A protocol for the non-invasive intraductal delivery of aqueous reagents to the mouse mammary gland is described. The method takes advantage of localized injection into the nipples of mammary glands targeting mammary ducts specifically. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents and small molecules.

마우스 유선 화 된 약물 전달을위한 췌관 주입

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery

Salivary glands are an attractive tissue target for gene therapy with promising results already leading to human trials. They are inherently capable of secreting proteins into the bloodstream and are easily accessible, making them potentially superior tissue sites for replacement hormone production or vaccination by gene transfer. Suggested methods for gene delivery include transcutaneous injection and retrograde infusion through salivary ducts. We demonstrate how to perform Retrograde Salivary Gland Infusion (RSGI) in non-human primates. We describe the important anatomic landmarks including identification of the parotid papilla, an atraumatic method of cannulating and sealing Stensen&#39;s Duct utilizing basic dental tools, polyethylene tubing, and cyanoacrylate, and the appropriate rate of infusion. While this is the least traumatic method of delivery, the method is still limited by the volume able to be delivered (&#60;0.5 mL) and the potential for trauma to the duct and gland. We demonstrate using fluoroscopy that an infusate can be fully delivered into the gland, and further demonstrate by immunohistochemistry the transduction of a typical vector and expression of the delivered gene.

Salivary glands have been proposed as a tissue target site for gene therapy, especially in the area of vaccination by gene transfer. We demonstrate gene delivery in a non-human primate model utilizing retrograde parotid infusion.

벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입

Salivary glands are an attractive tissue target for gene therapy with promising results already leading to human trials. They are inherently capable of ...

마우스 턱밑샘 재생의 실시간 실시간 이미징

Interrogating Cell-Cell Interactions in the Salivary Gland via Ex Vivo Live Cell Imaging

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal role played by macrophages in driving the regenerative response. However, our understanding of this critical role has primarily relied on static views obtained from fixed tissue biopsies. To overcome this limitation and gain insights into these interactions in real time, this study outlines a comprehensive protocol for culturing salivary gland tissue ex vivo and capturing live images of cell migration.
The protocol involves several key steps: First, mouse submandibular salivary gland tissue is carefully sliced using a vibratome and then cultured at an air-liquid interface. These slices can be intentionally injured, for instance, through exposure to radiation, to induce cellular damage and trigger the regenerative response. To track specific cells of interest, they can be endogenously labeled, such as by utilizing salivary gland tissue collected from genetically modified mice where a particular protein is marked with green fluorescent protein (GFP). Alternatively, fluorescently-conjugated antibodies can be employed to stain cells expressing specific cell surface markers of interest. Once prepared, the salivary gland slices are subjected to live imaging using a high-content confocal imaging system over a duration of 12 h, with images captured at 15 min intervals. The resulting images are then compiled to create a movie, which can subsequently be analyzed to extract valuable cell behavior parameters. This innovative method provides researchers with a powerful tool to investigate and better understand macrophage interactions within the salivary gland following injury, thereby advancing our knowledge of the regenerative processes at play in this dynamic biological context.

저자 스포트라이트: Studying Macrophage-Epithelial Cell Interactions in Salivary Gland Regeneration After Injury(부상 후 타액선 재생에서 대식세포-상피세포 상호작용 연구) 

Immunofluorescent imaging is constrained by the ability to observe complex, time-dependent biological processes in just a single snapshot in time. This study outlines a live-imaging approach conducted on precision-cut mouse submandibular gland slices. This approach allows for the real-time observation of cell-cell interactions during homeostasis and the processes of regeneration and repair.

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사

Salivary gland regeneration is a complex process involving intricate interactions among various cell types. Recent studies have shed light on the pivotal ...

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

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와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

생분해성 폴리머 입자의 림프절 내 주입

타액 기능 저하의 쥐 모델에서 Retroductal 턱밑 글 랜드 점적 및 현지화 된 분획 조사

똑바로 Intravital 현미경 Murine Submandibular 침 샘의 준비

형광 단백질을 표현 라이브 마우스의 이미징 세포 이하의 구조물의 intravital 현미경

마우스 유선 화 된 약물 전달을위한 췌관 주입

벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사