여기에서 입증된 플래시 나노 침전물 또는 FNP 기술은 중합체 나노 입자 내부의 소수성 또는 소수성 화합물을 캡슐화하기 위한 확장 가능하고 간단한 플랫폼을 제공합니다. 명확성을 위해, 생물학적 제제를 캡슐화하는 데 사용되는 기술은 역 플래시 나노 침전물 또는 IFNP라고합니다. 기본 원칙은 변경되지 않지만 결과 나노 입자 구조는 다릅니다.
일반적으로 새로운 사용자는 작은 나노 입자 배치를 수동으로 만들 때 입구 주사기를 일관되게 작동하기 위한 연습이 필요합니다. 컴퓨터 제어 주사기 펌프로 더 많은 볼륨을 생산할 수 있습니다. 당사의 프로토콜은 또한 제형의 성공적인 적용에 중요한 나노입자 솔루션의 사후 처리에 관한 세부 사항을 제공합니다.
프로세스를 시작하기 전에 CIJ 믹서 피팅을 확인하고 콘센트 튜브가 압착되지 않았는지 확인합니다. 그런 다음, 아세톤의 2 ~3 밀리리터, 또는 다른 청소 용매와 두 밀리리터 폴리 프로필렌 고무 무료 Luer 잠금 주사기를 채웁니다. 주사기를 인렛 어댑터에 잠그고 폐기물 용기 위에 어셈블리를 설정합니다.
몇 초 동안 혼합 챔버를 통해 용매를 보내 플런서를 꾸준히 우울. 그런 다음 주사기를 제거하고 질소 가스 스트림으로 혼합물을 건조시다. 다음으로, 용매 입력 스트림을 준비하기 시작하기 위해, 파이펫 0.25 밀리리터의 10 밀리리터 의 비타민 E의 밀리리터 용액, 안정제 프리 테트라하이드로푸란, 1.5 밀리리터 마이크로센티리후지 튜브로.
그런 다음, 파이펫 0.25 밀리리터의 밀리리터 용액당 10 밀리그램의 THF의 블록 합합체 안정제는 동일한 튜브로 한다. 혼합물을 5~10초 동안 소용돌이로 처리한 다음 원심분리기를 5~10초 동안 1,00G로 분리하여 캡에 액체 를 포동합니다. 용매반대로 탈온화 된 물의 0.525 밀리리터를 포함하는 1.5 밀리리터 원심 분리튜브를 준비합니다.
그런 다음, 파이펫 4 밀리리터의 탈온화 된 물 20 밀리 리터 신발성 유리병에 담금질 목욕을 합니다. 작은 교반바를 바이알에 놓습니다. 깨끗한 CIJ 믹서를 랙 또는 테스트 튜브 블록에 담금질 욕조 위에 놓습니다.
가능한 최대 속도의 약 75%에서 담금실 목욕을 저어주세요. 그런 다음 무딘 팁 바늘을 1 밀리리터 폴리 프로필렌 고무 프리 주사기에 맞추고 용매 방지를 그립니다. 주사기에서 기포를 조심스럽게 추방한 다음 바늘을 제거하고 폐기합니다.
플런저를 조정하여 액체가 주사기 끝에 오도록 합니다. 그런 다음 CIJ 입구 중 하나에 주사기를 부착합니다. 용매 혼합물을 같은 방법으로 두 번째 주사기에 넣고 다른 입구에 부착합니다.
나노 입자를 형성하려면 동시에 0.5 초 이내에 부드러운 균일 한 움직임으로 두 플런더를 모두 우울하게합니다. 주사기를 신속하고 균일하고 원활하게 우울하게 하는 것이 중요합니다. 주사사기를 갑자기 공격해서는 안되지만 주사기의 상단과 이미 접촉하는 모션을 시작해야 합니다.
그 후 CIJ 믹서를 주사기를 제거하지 않고 폐용기 위에 설정하여 홀드업 부피가 분산으로 배출되지 않도록 합니다. 반짝이는 유리병에서 교반 바를 제거하고 캡. 그런 다음 용매 및 용매 방지 주사기를 제거하고 폐기합니다.
다음 플래시 나노 침전 시험 전에 믹서를 청소합니다. 동적 광 산란 분석을 위한 샘플을 준비하기 위해 분산의 파이펫 100 마이크로리터가 큐벳으로 침투합니다. 900 마이크로리터의 담금질 목욕 용매를 추가하고 샘플 분석을 시작하기 전에 파이펫팅으로 잘 섞습니다.
마이크로 MIVM 조립을 시작하려면 O-링을 혼합 형상 디스크에 배치합니다. 믹싱 디스크의 구멍을 상단 디스크의 못과 정렬하고 O-링을 대체하지 않도록 주의하면서 함께 맞습니다. 하단 수신기에서 콘센트 튜브 피팅을 느슨하게 한 다음 연결된 디스크를 수신기에 나사로 연결합니다.
상단 디스크의 못에 스패너 렌치를 맞추고 어셈블리를 조입니다. 콘센트 튜빙 피팅을 조여 혼합 형상 디스크의 하단 면에 단단히 고정되도록 합니다. 상단 디스크의 주사기 피팅이 꼭 맞는지 확인합니다.
믹서 스탠드에 이동 식 플레이트를 올려 방해하지 않도록 한 다음 조립 된 믹서를 스탠드에 놓고 콘센트 튜브가 지지판을 통해 나사로 연결됩니다. 다음으로, 출구 튜브 아래에 담금질 욕조로 클로로폼 5.25 밀리리터가 들어있는 15 밀리리터 원심분리기 튜브를 놓습니다. 그런 다음, 용액 A의 0.75 밀리리터를 그립니다, 이는 부피로 10 %의 물에 디메틸 설프산화물의 ovalbumin의 밀리리터 용액 당 5 밀리그램, 무딘 팁 바늘1 밀리리터 가스 꽉 Luer 잠금 주사기로.
조심스럽게 기포를 추방, 바늘을 제거하고, Luer 피팅의 끝에 용액을 프라임. 주사기를 믹서 입구에 연결합니다. DMSO의 블록 공중합체 안정제의 밀리리터 당 6 밀리그램인 용액 B와 THF인 솔루션 C를 각각 0.75 밀리리터로 반복합니다.
주사기를 알파벳 순서로 시계 방향으로 믹서 입구에 연결합니다. 클로로폼인 1.85 밀리리터의 용액 D가 포함된 2.5 밀리리터 가스 타이트 주사기를 준비하고 네 번째 입구에 연결합니다. 주사기 높이에 큰 차이가 없는지 확인합니다.
그런 다음, 조심스럽게 이동 판의 양쪽에 베어링 하우징을 잡고, 그냥 겨우 주사기의 상단에 고르게 쉬때까지 접시를 천천히 낮춥니다. 나노 입자를 생성하려면 약 0.5 내지 1초 에서 플레이트를 꾸준히 원활하게 우울하게 합니다. 그런 다음 담금질 목욕 튜브를 제거하고 캡하십시오.
완료되면 믹서를 분해하고 청소하십시오. 더 많은 부피로 작업하려면 솔루션을 가스 꽉 주사기에 적재하고 폴리테트라플루오로틸렌 튜빙과 Luer 피팅을 주사기에 연결합니다. 튜브의 끝에 대한 솔루션을 프라임.
주사기를 주사기 펌프에 고정하고 튜브를 적절한 믹서 입구에 부착합니다. 작은 폐기물 유리병을 출구 튜브 아래에 놓고 시동 량을 수집합니다. 담금실 목욕을 준비하고 근처에 보관하십시오.
동시에 펌프를 시작하고 약 5 밀리리터의 폐수류가 폐 바이알로 흘러 들어오게 하십시오. 그런 다음 담금질 목욕에서 나노 입자를 평소와 같이 수집하기 시작합니다. 교반플레이트는 원하는 경우 담금질 목욕을 혼합하는 데 사용될 수 있다.
CIJ 믹서에 제조된 소수성 코어를 가진 중합나노입자의 4개의 복제는 높은 복제성을 보였으며, 평균 직경 107나노미터로 비교적 단분산하였다. 느리거나 고르지 않은 주사기 우울증으로 인한 대표적인 실화는 약간 더 큰 입자를 생성했으며, 이 예에서는 다분산성이 영향을 받지 않았지만, 실화로 인해 더 많은 다분산 분포가 발생할 수 있습니다. DLS 자동 상관 기능은 대표적인 중합체 나노 입자 샘플을 위해 원활하게 부패하였다.
이러한 부드러운 붕괴는 대신 미크로네 스케일 오일 액적을 생산한 블록 공중합체 안정제 없이 제형을 시도했을 때 관찰되지 않았다. 여기서 와 같이, 폴리스티렌 코어를 가진 나노입자에서, 안정제에 대한 코어 물질의 상대적 양은 입자 크기를 제어하였다. PDI는 각 제형에서 0.15 미만이었습니다.
IFNP에 의해 생성된 친수성 코어를 가진 나노 입자. CIJ 믹서에서 제조된 말토덱스트린 코어를 가진 입자는 직경 약 65나노미터였으며 PDI는 0.08이었다. 마이크로 MIVM에서 제조된 ovalbumin 코어를 가진 입자는 직경 약 125 나노미터였으며, 0.16의 PDI를 가졌다.
FNP와 IFNP는 분자 와 나노 입자를 처리하기위한 강력한 도구입니다. 기술을 수행하기 전에 혼합 중에 높은 슈퍼 포화를 보장하기 위해 모든 용매 또는 용매 혼합물에서 각 성분의 용해성을 고려해야합니다. 기본 기술은 간단하지만 주사기 우울증 단계를 마스터하는 것은 몇 가지 연습이 필요합니다.
이 문제가 있는 경우 일관성을 높이기 위해 이 비디오에 표시된 것과 같은 주사기 펌프 설정을 사용하는 것이 좋습니다. 충전된 소수성 분자 또는 중간 용해도를 가진 분자의 경우, FNP는 효율적인 캡슐화를 가능하게 하기 위해 소수성 이온 페어링과 결합될 수 있다. FNP는 또한 동일한 나노 입자 코어에서 여러 화합물을 캡슐화하는 데 사용할 수 있습니다.
텍스트 및 기타 문헌 리소스를 참조하여 원하는 응용 프로그램에서 나노 입자 분산에서 유기 용매를 제거하는 방법을 알아보십시오. 또한 저장 중에 나노 입자를 안정화하기위한 다양한 기술도 있습니다.
