이 프로토콜은 동결 해동 방법이 생체 의학, 제약 또는 화장품 응용 분야에서 사용하기 위해 생체 적합성 하이드로겔을 준비하는 적절한 과정이기 때문에 중요합니다. 이 방법의 주요 장점은 선천적 결함을 일으킬 수있는 화학 적 교차 연결 제약을 사용하지 않는다는 것입니다. 또한, 이 방법에 활용된 동결 상태는 도와 같은 하이드로겔의 최종 특성을 제어한다.
이 방법은 다른 응용 프로그램과 하이드로겔에 적용 할 수 있습니다. 이것은 수질 오염을 취급하기 위하여 이용됩니다. 실제로, 새로운 배양에 대한 물 용기로 사용되는 폴리머 구슬을 생산하는 데 사용될 수 있다.
측정되는 폴리머 용액을 완전히 균질화하는 것이 중요합니다. 그렇지 않으면 하이드로겔은 크래킹 포인트를 제시합니다. 또한 각 주기의 동결 시간에 주의해야 합니다.
이 절차를 시작하기 위해 실온에서 키토산 0.2 그램과 0.1 어금다 아세트산의 10 밀리리터를 용해하고 2 % 키토산 용액을 준비하기 위해 밤새 지속적인 기계적 교반을 유지합니다. 다음 날, PVA 1 그램과 증류수 10 밀리리터를 녹이고 1 시간 동안 섭씨 80도에서 저어줍니다. 자기 교반기를 사용하여 동질이 될 때까지 실온에서 동일한 양의 두 솔루션을 혼합합니다.
페트리 접시에 혼합물을 붓습니다. 샘플을 기압에 2시간 동안 두어 가스를 빼는 데. 하이드로겔을 영하 4도, 영하 20도, 영하 80도에서 20시간 4주기로 동결한다.
또 다른 하이드로겔을 영하 80도에서 20시간 동안 동결하여 5~6회 동결사이클을 사용한다. 세 번째 동결 주기 후 하이드로겔을 탈온화물로 씻어내라. 마지막 동결 사이클의 끝에서 동결 은 48 시간 동안 영하 50도에서 하이드로겔을 건조하고 추가 특성화를 위해 저어.
FT-IR 특성화를 수행할 준비가 되면 ATR 모드에서 FT-IR 분광계에 작은 하이드로겔을 배치합니다. FT-IR 분광기를 4000에서 600파장에서 가져 가라. 첫째, 직경 13밀리미터, 높이 10mm의 하이드로겔에서 디스크를 잘라냅니다.
무게를 측정합니다. 흔들리는 동안 25섭씨 25도에서 50 밀리리터의 탈온화 된 물에 디스크를 배양하십시오. 매 30 분마다 매체에서 샘플을 제거합니다.
여분의 물을 제거하고 무게를 제거하기 위해 샘플을 블롯합니다. 그런 다음 붓기 정도를 계산하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 전자 현미경 검사법과 공공 비대칭을 수행합니다. 적재하기 전에 리터당 15밀리그램의 디플루니살 용액 4리터를 준비하고 밤새 저어줍니다.
UV-Vis 분광법에 의해 용액의 농도를 확인합니다. 그런 다음 400 밀리그램의 동결 건조 하이드로겔 샘플과 증류수 6 밀리리터를 24시간 동안 팽창시킵니다. 로딩을 위해 50밀리리터의 디플루니살 용액으로 플라스크를 채우고 섭씨 25도에서 일정한 교반을 유지하십시오.
플라스크에 팽창한 하이드로겔을 침수합니다. 다음으로, 곡선의 고원 영역을 결정하기 위해 나머지 디플루니칼 용액의 2 밀리리터 알리쿼트를 다른 시간에 복용한다. 24시간 후에는 솔루션을 새로운 솔루션으로 교체하십시오.
252 나노미터에서 각 알리쿼트의 흡광도를 측정하고 Diflunisal의 교정 곡선을 사용하여 용액에 존재하는 디플루니칼의 농도를 결정한다. 하이드로겔에 유지되는 디플루니칼의 양과 텍스트 프로토콜에 설명된 캡슐화 효율을 결정합니다. 그런 다음 로드된 하이드로겔을 영하 80도에서 동결하고 영하 50도에서 리오필화합니다.
약물 방출의 경우, 300 밀리그램의 동결 건조 디플루니살 로드 하이드로겔과 pH 7.4 및 섭씨 25도에서 인산염 완충제 50 밀리리터를 잠수하십시오. 일정한 교반을 유지합니다. 서로 다른 시간에 두 밀리리터 알리쿼트를 인출하고 일정한 볼륨을 유지하기 위해 신선한 매체로 대체합니다.
교정 곡선에 따라 252 나노미터에서 방출된 디플루니살을 결정합니다. 그 후, 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 하이드로겔의 주요 약물 방출 메커니즘을 추론한다. 여기서 CSPVA 하이드로겔은 동결 해동 방법을 사용하여 교차 연결 제없이 제조된다.
FT-IR 분광기는 두 폴리머의 7가지 특징적인 신호를 보여줍니다. 모든 CSPVA 하이드로겔은 고다공성 표면을 나타내며 준비 조건에 따라 독특한 변화가 관찰된다. 영하 4도에서 제조된 하이드로겔은 가장 큰 모공을 제시합니다.
영하 80도에서 제조된 하이드로겔은 다공성 네트워크를 더 많이 가지고 있는 것처럼 보이며 동결 주기의 수는 더 정의되고 원형 모공을 촉진하는 것으로 보입니다. 그러나 영하 80도에서 6개의 동결 사이클로 준비된 하이드로겔은 낮은 총 침입 량에 반영된 높은 불법성으로 인해 영하 80도에서 4개의 동결 사이클로 준비한 것보다 투과성이 적습니다. 팽창 동작에서 하이드로겔은 많은 양의 물을 빠르게 흡수하여 처음 5시간 동안 10배, 20시간 후에는 최대 15배의 체중을 유지합니다.
온도의 효과를 관찰할 때 영하 80도에서 4개의 동결 사이클로 제조된 하이드로겔이 처음 5시간 동안 부종 용량이 적다는 것을 볼 수 있다. 동결 주기의 수는 언제든지 차이를 만들 수 없습니다. 하이드로겔에서 디플루니살의 방출 역학은 영하 80도에서 4개의 동결 사이클로 제조된 하이드로겔을 가진 모든 경우에 약 30시간 동안 유지되어 가장 높은 양을 방출한다.
영하 80도에서 4개의 동결 사이클로 준비된 하이드로겔과 영하 80도에서 6회 동결 사이클로 제조된 하이드로겔 간의 방출에는 차이가 없습니다. 이 절차를 시도 할 때 기억해야 할 가장 중요한 것은 동결 조건입니다. 완성된 형성된 하이드로겔을 얻으려면 거의 세 번의 동결 주기부터 시작해야 합니다.
이 방법은 체외 생체 적합성을 평가하기 위해 세포 배양과 결합될 수 있습니다. 그것은 또한 저하 연구와 결합 될 수 있습니다. 이러한 절차의 개발 후 우리는 우리가 혼합물 또는 알로에 베라와 같은 천연 화합물에 다른 폴리머를 통합의 가능성을 탐구 할 수 있다는 것을 깨달았다.
이렇게 하면 이러한 재료에 새로운 속성을 통합할 수 있습니다.
