성숙한 쌀의 횡단 단면(오리자 사티 라 L.) 파이펫 팁을 사용하여 전자 현미경 이미징을 스캐닝하기 위한 커널

이 프로토콜을 사용하면 씨앗을 그대로 슬라이스하여 무너지지 않도록 피펫 팁에 들어갈 수있는 모든 씨앗에서 전분 과립을 시각화 할 수 있습니다. 가단성 플라스틱 콘은 건조 조직과 장기의 기본 구조를 지원하므로 이 저렴하고 쉬운 매니폴드를 통해 짧은 시간에 많은 샘플을 처리할 수 있습니다. 여기에 법의학 현미경 이점, 내성 전분, 우리 모두가 찾고있는 무언가, 그 원시 전분, 아밀로리시스, 혈당 지수 및 포도당 스파이크에 효소의 접근성에서 계속하기 위해, 이들은 오늘날 전 세계 타입-2 당뇨병을 싸우기 위해 더 나은 쌀 품종을 사육하기위한 핵심 매개 변수입니다.

그리고 지금 당신에게 박사 키아 바튼을 소개하는 것은 큰 기쁨입니다. 바튼 박사는 우리 연구실에서 온 이며 그녀는 교수 코어 이미징 시설을 사용 하 여이 기술이 배포 하는 방법을 보여줄 것 이다. 마른 커널을 탈수하는 것으로 시작합니다.

작업 벤치에 평평한 고무 스토퍼에 하나의 커널을 놓고이 스토퍼가 고정 되어 있는지 확인합니다. 두 번째 플랫 고무 스토퍼를 사용하여 첫 번째 고무 스토퍼에 비틀어 커널에서 껍질을 제거하여 내정자를 산산조각내거나 두 고무 번사이에 씨앗을 너무 적극적으로 연마하지 않도록주의하십시오. 미세 한 집게를 사용하여 나머지 껍질을 제거하고 플라스틱 250 마이크로 리터 파이펫 팁에 개별 껍질 커널을 삽입합니다.

커널의 배아 끝이 파이펫 팁의 원추형 끝을 향하고 있는지 확인하십시오. 두 번째 250 마이크로리터 파이펫 팁을 삽입하여 커널을 첫 번째 파이펫 팁에 넣고 커널을 손상시키거나 두 번째 파이펫 팁을 구부리지 않도록 주의하십시오. 파이펫 팁 어셈블을 작업대위에 평평하게 놓고 손으로 제자리에 고정합니다.

반면에 날카로운 메스 블레이드를 사용하여 커널 중앙을 슬라이스하여 파이펫 팁의 끝을 잘라내면 됩니다. 어셈블리를 통해 아래쪽으로 슬라이스한 다음 메스 블레이드를 수직으로 방향을 지정하여 손 섹션의 두 개의 새 노출된 면이 평행합니다. 그런 다음 메스를 사용하여 쌀 커널의 1mm 두께 부분을 자른다.

반사된 빛 현미경 검사를 수행하려면, 무거운 게이지 검은 종이 조각에 가로 쌀 섹션을 배치합니다. 경사 조명을 위해 구스넥을 장착한 스테레오 현미경을 사용하여 횡단 면의 가벼운 이미지를 획득하여 최소 10배 배율을 사용한다. 야생형 닛폰베어 및 ssg1 구간은 260배, 920배, 4배, 200배 이하로 조사되었다.

제대로 준비했을 때, 쌀 부분은 내시경과 그대로 두근거림과 알뢰론 층의 최소한의 산산조각으로 약 0.9 밀리미터 두께였다. 이 기술은 전체 내정자 세포, 화합물 전분 과립 및 개별 하위 과립을 관찰하기에 충분한 품질의 섹션의 준비를 허용합니다. 야생식 내성 전분 하이브리드 라인, Zhehui 7954 및 코발트 생성 돌연변이 RS111과 같은 반투명 커널 생산업체는 일반 쌀 내정자 표현형인 단단히 포장된 다이히드랄 전분 과립을 생산합니다.

백악삭한 커널 프로듀서, 상업적 버라이어티 예탕과 RS4의 SEM 이미지는 둥글고 느슨하게 포장 된 전분 과립을 표시했습니다. 곤충 포식을 억제하기 위해 Cry1Ab 유전자를 발현한 야생형 Xiushiu 11 및 돌연변이 KMD1은 반투명 내성 전분 선과 유사한 단면및 내정자 형태를 가졌다. 이 기술은 다른 종의 씨앗에 적용 할 수 있습니다.

모델 모노코트인 브라키포디포디움 디스타시현은 매우 단단한 씨앗을 생산하지만, 그대로 횡단구간을 얻을 수 있었다. 온전한 횡방향 섹션은 부드럽고 하얀 겨울 밀로 생산되었습니다. 생물학적 구조 내부를 조사하는 이 신속하고 저렴한 스크리닝 방법은 곤충 다리, 궤나무 나무 스파이크, 산사나무, 생선 척추 또는 이 샘플 지원 설정에서 이익을 얻을 수있는 법의학 현미경 검사의 모든 분야에 적용 할 수 있습니다.

이 프로토콜을 수행 한 후, 전자 현미경 검사법을 위한 스퍼터 코팅, 특정 형광염으로 염색, 돌연변이 귀리와 보리 라인에서 베타 글루칸 세포 벽 두께에 대한 얼룩에 칼카플루어를 적용하는 것은 신속한 표현형 스크리닝을 통해 식물 사육에 접근하는 몇 가지 빠른 방법입니다.