이 방법은 전체 조직 거동에 대한 조직 층의 기여를 분리하여 조직 미세 구조에 대한 새로운 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 우리의 미세 해부 및 테스트 프레임 워크를 통해 심장 판막 전단지의 기계적 및 미세 구조적 특성을 자체 복합 층과 직접 비교할 수 있습니다. 미세 해부술은 마스터하기가 어려울 수 있으므로 연구를 시작하기 전에 가능한 한 많이 연습하는 것이 좋습니다.
먼저 필요한 재료, 왁스 보드, DI 물, 피펫, 메스, 마이크로 가위, 얇은 포셉, 곡선 포셉, 두꺼운 포셉 및 핀을 수집하십시오. 이축 테스터에서 조직을 분리하고 레이저 변위 센서를 사용하여 두께를 측정합니다. 조직을 왁스 보드에 놓습니다.
큰 코드 삽입을 위해 조직의 심실 측면을 검사하십시오. 참고로 사진을 찍습니다. 심방이 위를 향하게하여 왁스 보드에 조직을 평평하게 펴십시오.
조직을 보드에 부착하려면 각 모서리의 조직에서 비스듬히 기울어진 핀 하나를 놓아 조직이 약간 당겨지도록 합니다. 조직을 장착 할 때 핀이 색조에 의해 생성 된 구멍 외부에 있고 조직이 정사각형이고 층 미세 해부 중에 이동하지 않는지 확인하십시오. 필요한 경우 해부 중에 조직의 측면을 따라 핀을 배치하여 조직을 더 늘립니다.
유리 비드 신탁 마커를 제거하십시오. DI 물을 피펫으로 조직 표면에 놓아 거품과 같은 방식으로 조직을 완전히 덮도록하십시오. 초기 모서리를 만들려면 고정된 시편의 모서리를 선택하여 깨지기 쉬운 영역에 큰 코드 삽입을 피하십시오.
그런 다음 기계 테스트를 위해 장착 구멍을 따라 메스를 조직 표면 위로 가볍게 드래그하여 A / S 층을 자릅니다. 컷의 가장자리가 떨어져 나가기 시작하여 아래에 F/V 레이어가 나타납니다. 무딘 얇은 포셉으로 컷을 따라 단단히 문질러 가장자리를 더 분리하십시오.
A/S 레이어의 컷이 분리되기 시작하지 않으면 메스로 동일한 컷을 다시 가볍게 추적합니다. 첫 번째 컷에 수직인 두 번째 컷을 만듭니다. 두 컷이 연결되어 있지 않으면 두 컷을 분리하는 조직의 작은 영역 아래에서 얇은 핀셋을 실행하십시오.
그런 다음 조심스럽게 가위를 사용하여 조직을 자릅니다. 조직이 F / V 층에서 분리 될 때까지 얇은 포셉으로 모서리의 컷을 따라 문지릅니다. 작은 조직 조각이 분리되면 큰 핀셋으로 잡고 부드럽게 잡아 당겨 복합 층을 더 분리하십시오.
A / S 복합 층의 바람직하지 않은 찢어짐과 찢어짐을 방지하기 위해 더 큰 핀셋으로 조직을 잡으면서 조직을 계속 벗겨 내고 모서리에 대해 만들어진 두 컷의 끝에 도달 할 때까지 이음새를 문지릅니다. 첫 번째 모서리에 분리에 큰 문제가 있는 경우 다른 모서리를 시작점으로 시도해 보십시오. 그런 다음 두 번째 모서리를 만들려면 메스 팁을 각 컷의 하단에 놓고 조직 표면을 따라 가볍게 드래그하여 첫 번째 모서리에 대해 만들어진 두 개의 컷을 확장하여 컷 확장이 원래 컷에 연결되도록하고 주석 또는 봉합사 구멍을 계속 따라갑니다.
컷을 계속 연장하고 상단 복합 A/S 레이어를 다시 벗겨내면서 한쪽이 끝날 때까지 이음새를 문지릅니다. 조직이 하나의 컷을 따라 완전히 분리 될 것임을 관찰하십시오. 다음으로, 완전히 벗겨진 면의 끝에 수직인 두 번째 모서리를 만듭니다.
큰 코드 삽입을 피하면서 나머지 컷을 확장합니다. 이 제외가 실험 특성화에 충분히 큰 A/S 표본을 허용하는 경우에만 A/S 분리 영역에서 코드 삽입을 제외합니다. 첫 번째 모서리에 사용된 문지르기 및 당김 기술을 사용하여 A/S 및 F/V 레이어를 계속 분리합니다.
눈물이나 구멍이 형성되면 즉시 조직 분리를 중단하십시오. 핀셋이 잡히지 않도록 하려면 형성되는 구멍에 가위를 놓고 중심에서 조직을 잘라냅니다. 분리의 솔기를 따라 결함이 형성되면 다른 가장자리를 따라 조직을 분리하기 시작하십시오.
조직을 분리하고 더 이상의 조직 분리를 방지 할 때 나타날 수있는 층간 연결을 찾으십시오. 이들은 가위를 사용하여 조심스럽게 절단해야하는 얇지 만 강한 가닥임을 관찰하십시오. A/S 레이어에 구멍을 만들거나 F/V 레이어로 아래쪽으로 자르지 마십시오.
A/S 레이어의 가능한 가장 큰 샘플이 분리될 때까지 이 프로세스를 계속합니다. 수술용 펜을 사용하여 샘플의 방향을 표시하십시오. 마지막으로, 가위로 나머지 조직 가장자리에 대한 분리의 솔기를 따라 자른다.
분리 된 A / S 복합 층을 절단 매트 위에 평평하게 놓습니다. 필요한 경우 메스를 사용하여 조직의 가장자리를 곧게 펴고 이축 기계 테스트에 적합한 사각형 조직 모양을 만듭니다. A/S 층을 테스트할 준비가 될 때까지 DI 물에 넣습니다.
왁스 보드에 남아 있는 F/V 레이어의 방향을 표시합니다. A/S 레이어가 제거된 영역에서 가능한 가장 큰 사각형을 잘라냅니다. 그런 다음 DI 물에 넣으십시오.
무손상 전단지와 두 개의 해부된 층의 조직학적 분석은 조직이 해면질과 섬유사 사이의 경계를 따라 정확하게 분리되었는지를 검증하였다. 조직학 현미경 사진을 사용하여 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 조직층 두께 및 구성 질량 분율을 결정하였다. 변위 제어 기계 테스트 및 후처리는 조직의 비선형 기계적 거동을 설명하는 트리쿠스피드 밸브 전단지, 트리쿠스피드 밸브 후부 전단지 및 트리쿠스피드 밸브 중격 전단지의 스트레치 데이터 대 멤브레인 장력을 생성했습니다.
편광된 공간 주파수 영역 이미징 데이터는 콜라겐 섬유 배향 및 광학 이방성의 정도에 대한 컬러 맵을 산출하였다. 특히, 이러한 컬러 맵은 전체 조직 표본에 걸친 콜라겐 섬유 구조에 대한 포괄적인 이해를 제공했습니다. 복합 층이 고정 된 조직에서 분리되면 수축한다는 점에 유의해야합니다.
후속 검사를 위해 충분한 조직이 있는지 확인하기 위해 가능한 가장 큰 샘플을 수집하십시오.
